NAD分子をワンステップで抽出・測定

Vol. 103 NAD分子をワンステップで抽出・測定

近年、NADへの関心が高まっており、特にその代謝の調節機能、老化や寿命への影響、さらには神経変性疾患における役割が注目されています。現在では、パーキンソン病やALS（筋萎縮性側索硬化症）、心血管疾患などを対象に、NADの前駆体であるNMN（ニコチンアミドモノヌクレオチド）を用いた「NADを増やす治療法」の研究も進められています。

しかし、こうした治療法の研究が進む一方で、NADレベルを正確に測定することの重要性は、まだ十分に理解されていません。実際の研究では、NADの量が低すぎても高すぎても、さまざまな疾患との関連が見られることが明らかになっており、NAD濃度を生理的な範囲内で維持・最適化することの重要性が指摘されています。

そのためには、信頼性が高く標準化されたNADの測定技術が不可欠であり、NAD代謝の理解や治療法の最適化に向けた大きな鍵となります。

最近の研究では、NAD代謝の乱れがミトコンドリア疾患、代謝異常、神経変性疾患、心血管疾患、がんなど、多くの病気に関与していることが明らかになっています。

これまで、全血試料からのNAD測定は困難でした。まず、NADの代謝物は非常に不安定であり、急速に分解されてしまいます。さらに、NADは血清／血漿といった液性成分にはほとんど含まれておらず、細胞成分を含む全血からの抽出が必要となります。

全血にはヘモグロビンやタンパク質が含まれており、これが質量分析などの従来の分析技術に干渉し、信頼性のある結果を得ることを難しくしていました。

質量分析を使えば高精度で測定できますが、測定できるのは酸化型NAD（NAD^＋）のみであり、測定数も少なくなります。しかも特殊な機器と複雑な前処理が必要となり、日常的な測定には限界があります。

NADMED社は、これらの課題を解決するために、酵素サイクリング反応と比色検出に基づいた新しい測定法を開発しました。この方法は、代謝物をワンステップで抽出した後、代謝物の不安定性を回避するために、NAD＋とNADHに対して環境の最適化を個別に行います。アッセイの呈色の強度はNADおよびグルタチオンの濃度に一致し、吸光度をスタンダードと比較することで代謝物レベルを判定します。

NADMEDの技術の大きな利点は、標準的な実験機器で実施できる点です。これにより、血中NAD測定がスケーラブルで実用的になり、研究や臨床現場での使用が可能になります。また、血液は採取が簡単で、組織検査より身体への負担も少ないため、血液試料から直接NADを測定できることは、研究室や臨床現場での大きなメリットとなります。NADMED社のキットは、たった200μlの血液があれば十分なため、通常の採血で簡単に対応できます。

NADMED社のキットは質量分析と同等の測定精度を有していることに加え、質量分析に比べて低コストかつ作業時間が短いといった多くの利点があります。

NADMED社製品と質量分析法によるヒト血液試料のNAD^＋濃度の比較

【NAD^＋and NADH Assay Kit（#RUO_001）の場合】
血液試料をキット付属のバッファーと混合、インキュベートしてNAD^＋とNADHを同時に抽出します。抽出物を2つに分割し、一方の代謝物を除去、もう一方を安定化してから、NAD＋とNADHの両方の濃度を測定します。

※ 血清、血漿試料は測定できません。
※ 組織試料の測定はNAD+ & NADH Tissue/Cell Kit (#RUO_003)をご使用下さい。

全血試料用の新しいNADP^＋/NADPH 測定キットの発売準備を進めています。今後は、酸化ストレスと代謝をより包括的に把握できるグルタチオンアッセイキットも開発中です。