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AAV産生時に感染力および品質を向上させるヘルパープラスミド pPLUS AAV-Helper

掲載日情報:2024/02/29 現在Webページ番号:70746

AAV産生時に、FectoVIR-AAVなどのトランスフェクション試薬と併用することで、AAVの感染力(TU/ml)や品質(full/empty比)が向上するヘルパープラスミドです。さまざまな細胞における、さまざまな血清型(セロタイプ)のAAV産生に有用です。

pPLUS AAV-Helper

pPLUS AAV-Helperについて

動画 pPLUS AAV-Helper is a novel plasmid helper designed for AAV production

pPLUS AAV-Helperは、FectoVIR-AAVによって得られたウイルス粒子の感染力(TU/mlで測定)と品質(full/empty比)の改善を目的として、Polyplus-transfection社(以下Polyplus社)独自のDNAアセンブリ技術(e-Zyvec技術)に基づいた広範な研究開発プログラムにより、複数の遺伝的特徴の相乗効果の探索を行い開発されました。

本動画は、同社のグローバルプロダクトマネージャーであるLaure Robert氏により、このヘルパープラスミドについて解説したものです。

e-Zyvec技術について☟


pPLUS AAV-Helperベクター情報

pPLUS AAV-Helperベクターマップ

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pPLUS AAV-Helperベクターマップ

pPLUS AAV-Helperは、AAV粒子の感染力を向上させる新しいヘルパーエレメントを組み込んだヘルパープラスミドです。プラスミドのサイズ(13.3 kb)は、標準的なヘルパープラスミドと比べて小さく、その配列にはHexon Associated PrecursorおよびFiber配列は含まれていません。

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特長

  • ウイルス粒子の感染力(TU/ml)および品質(full/empty比)が向上します。
  • FectoVIR-AAVとの併用に最適化されています。
  • PEIproおよびその他のトランスフェクション試薬とも併用できます。
  • さまざまな細胞株における、さまざまな血清型(セロタイプ)のAAVの産生に適しています。
  • カナマイシン耐性遺伝子を有しています。
  • 商用などに際し、ライセンスおよびロイヤリティーの必要はありません。

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使用例

本製品とFectoVIR-AAVの併用によるAAVの産生量と感染力の向上

F17培地中で懸濁培養したHEK293T細胞において、PEIproFectoVIR-AAVまたはB社トランスフェクション試薬と、A社pHelperまたは本製品を組み合わせてそれぞれAAV9を産生した。

本製品を使用した場合、いずれのトランスフェクション試薬を用いてもA社pHelperに比べて力価(VG/ml)および感染力(TU/ml)の向上が見られた。また、pPLUS AAV-HelperとFectoVIR-AAVを併用した場合では、A社pHelperとB社トランスフェクション試薬の組合せと比べて、相乗効果により力価(VG)が最大4倍、感染力(TU)が8倍向上することが示された。

本製品とFectoVIR-AAVの併用によるAAVの産生量と感染力の向上

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本製品とFectoVIR-AAVの併用によるAAVの産生量と感染力の向上


さまざまな血清型(セロタイプ)における力価(VG/ml)と感染力(TU/ml)の向上

F17培地中で懸濁培養したHEK293T細胞において、FectoVIR-AAVと、本製品またはA社pHelperを組み合わせてAAV2、AAV5、AAV8およびAAV9を産生した。産生したAAVを用いてHT-1080細胞に対してトランスダクションアッセイを実施し、力価の向上をA社pHelperに対する増加倍数としてそれぞれ示した。

力価と感染力の向上はさまざまな血清型で観察された。

さまざまな血清型(セロタイプ)における力価(VG/ml)と感染力(TU/ml)の向上

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さまざまな血清型(セロタイプ)における力価(VG/ml)と感染力(TU/ml)の向上


HEK293由来のさまざまな細胞株におけるAAV2の力価の向上

表中に示した各種HEK293由来細胞株をそれぞれ表中に示した培地で増殖し、FectoVIR-AAVと、本製品またはA社pHelperを組み合わせてAAV2を産生した。力価の向上は、A社pHelperに対する増加倍数としてそれぞれ示した。

本製品は、AAV産生工程で一般的に使用されるさまざまな細胞株に使用した場合において、一貫した性能を示した。

HEK293由来のさまざまな細胞株におけるAAV2の力価の向上

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HEK293由来のさまざまな細胞株におけるAAV2の力価の向上

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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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