ユビキチンリガーゼE3酵素（c-CBL / CBL-B）自己ユビキチン化活性をTR-FRET法で測定するキット CBL TR-FRET Assay Kit（BPS Biosciences社）
掲載日情報：2021/12/22 現在Webページ番号：70160
ユビキチンリガーゼE3酵素であるc-CBL（Casitas B lineage lymphoma）およびCBL-B（Casitas B-lineage lymphoma proto-oncogene b）の自己ユビキチン化活性をTR-FRET法により簡便に測定するキットです。自己ユビキチン化の促進／阻害物質のスクリーニングに有用です。
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使用例
c-CBL TR-FRET Assay Kit（#79786）
）
CBL-B TR-FRET Assay Kit（#79575）
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c-CBLとCBL-B（ユビキチンリガーゼE3酵素）について
c-CBLとは
Casitas B lineage lymphoma（c-CBL）は、さまざまなタンパク質を分解できるユビキチンE3リガーゼ活性を持つ多機能タンパク質です。c-CBLは、細胞の生存、遊走、増殖などの基本的な細胞機能において重要な役割を果たしており、哺乳類に遍在的に発現しています。最近、c-CBLは、血管新生およびヒト固形臓器腫瘍における重要な役割が示されており、がん免疫療法における創薬ターゲットとして有望視されています。
Casitas B lineage lymphomaプロトオンコジーン b（CBL-B）とは
ヒトCBL-B（Casitas B-lineage lymphoma proto-oncogene b）は、T細胞活性化において負の調節因子として機能するE3ユビキチンタンパク質リガーゼで、細胞傷害性リンパ球およびNK細胞の細胞内チェックポイントおよび調節因子として機能します。CBL-Bは、E2-ユビキチン複合体およびTAMレセプターTYRO3などの標的タンパク質に結合し、TYRO3のさらなる分解を促進します。CBL-Bは、自然免疫応答の調節、病原体に対する宿主の防御、および抗腫瘍免疫において重要な役割を果たしています。
CBL-Bを標的化することにより、自己免疫疾患、感染症、腫瘍、およびアレルギー性気道炎症などのヒト免疫関連障害を改善することが期待できます。CBL-Bは、がんの免疫回避を抑制する能力があるため、免疫療法の分野で新たな関心を集めています。CBL-Bは、細胞毒性T細胞とエフェクターT細胞の両方のNK細胞で抗がん免疫応答を開始し、T細胞とNK細胞の活性化を促進します。
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測定原理
BPS Biosciences社のc-CBL / CBL-B TR-FRET Assay Kitは、384 wellフォーマットの均一系反応で自己ユビキチン化活性を測定するように設計されています。
c-CBL / CBL-BのTR-FRET法による測定原理
- ビオチン標識ユビキチンに、活性化酵素E1がATPのエネルギーを利用して結合する。
- E1と結合したビオチン標識ユビキチンに酵素E2が結合して、E2-ビオチン標識ユビキチン複合体となり、ユビキチンが活性化される。
- 活性化されたユビキチンは、ユビキチンリガーゼE3（GSTタグ付きCBL）と複合体を形成する。この反応を繰り返してポリユビキチン鎖が形成される。
- GSTタグ付きCBLにテルビウム標識抗GST抗体（Tb-labeled donor）を結合させ、また、ビオチン標識ユビキチンには蛍光標識アクセプター（Dye-labeled acceptor）を結合させる。
- ドナー（テルビウム）の励起波長の光を照射すると、Tb-labeled donorとDye-labeled acceptorの間でFRET現象が生じるため、アクセプターの蛍光波長を測定する。
- 促進／阻害物質の添加後のポリユビキチン鎖の検出により自己ユビキチン化を測定できる。
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特長
- 洗浄操作が不要です。
- ハイスループットスクリーニングに最適です。
- フォーマット：384 well
- 測定原理：TR-FRET
※ 測定には、TR-FRET（時間分解蛍光共鳴エネルギー移動）対応の蛍光マイクロプレートリーダーが必要です。
測定機器設定条件
データ解析は、ドナー（テルビウム）の励起波長620 nmの蛍光強度の測定後に蛍光標識アクセプター（Dye-labeled acceptor）の蛍光波長を665 nmで測定し、TR-FRET ratio（665 nm蛍光強度／620 nm蛍光強度）を用いて行います。
| 測定モード | TR-FRET | ||
|---|---|---|---|
| 測定波長 | 励起 | 340±20 nm | |
| 蛍光 | 620±10 nm | 665±10 nm | |
| 測定間隔 | 60μs | ||
| 積分時間 | 500μs | ||
％ Activityの算出
％ Activity = FRETs - FRETnegFRETp - FRETneg × 100％
- FRETs：試料のFRET
- FRETneg：ネガティブコントロールのFRET
- FRETp：ポジティブコントロールのFRET
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キット内容
商品コードをクリックすると価格表、キットコンポーネント（●）をクリックすると単品の価格表をご覧いただけます。
| 品名 | c-CBL TR-FRET Assay Kit | CBL-B TR-FRET Assay Kit | |
|---|---|---|---|
| 商品コード | 79786 | 79575 | |
| キット内容 | UBE1(E1) | ● | ● |
| UBCH5b(E2) | ● | ● | |
| Human c-CBL(E3), GST-tag | ● | － | |
| Human CBL-B(E3), GST-tag | － | ● | |
| Biotin-Ubiquitin | ● | ● | |
| ATP*1 | ● | ● | |
| CBL assay buffer | ● | － | |
| CBL assay buffer 2 | － | ● | |
| Tb-labeled donor | ● | ● | |
| Dye-labeled acceptor | ● | ● | |
| Methyl-ubiquitin*2 | － | ● | |
| White Corning microtiter plate | ● | ● | |
| Plate sealer | ● | － | |
＊1 キットにより内容は異なります。
＊2 Methyl-ubiquitin：リジン側鎖を介したポリユビキチン鎖形成を阻害する。
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関連製品 組換え体CBL／ユビキチンタンパク質
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| 品名 | 発現 | M.W. | アミノ酸配列 | GenBank # | UniProt # | 商品コード |
|---|---|---|---|---|---|---|
| c-CBL, GST-Tag | E. coli | 71 kDa | 49～434 | NM_005188 | P22681 | 100370 |
| CBL-C, FLAG-Tag | HEK293 | 45 kDa | 11～404 | NM_012116 | Q9UlV8 | 100332 |
| CBL-B, GST-Tag (Human) | E. coli | 72 kDa | 39～426 | NM_170662 | Q13191 | 80415 |
| CBL-B, His-Avi-Tag | E. coli | 48 kDa | 39～426 | NM_170662 | － | 80414 |
| CBL-B, His-Avi-Tag, Biotin-labeled (Human) | E. coli | 48 kDa | 39～426 | NM_170662 | Q13191 | 80412 |
| CBL-B (Y363F), His-tag, Biotin-labeled (Human) | E. coli | 48 kDa | 39～426 | NM_170662 | Q13191 | 80413 |
| UBE1 (UBA1), FLAG-tag | Sf9 insect cells | 119 kDa | 2～1,058(end) | NM_003334 | P22314 | 80301 |
| UbcH5b, His-Tag (Human) | E. coli | 18 kDa | 2～end | NM_003339 | P62837 | 80314 |
| Ubiquitin, His-Avi-Tag, Biotin-labeled | E. coli | 12 kDa | 2～76 | NM_021009 | P0CG48 | 11236 |
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価格表
[在庫・価格 ：2025年04月25日 20時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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c-CBL TR-FRET Assay Kit (384reactions) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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CBL-B TR-FRET Assay Kit |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 20時55分現在]
c-CBL TR-FRET Assay Kit (384reactions)
文献数： 0
- 商品コード：79786
- メーカー：BPS
- 包装：1kit
- 価格：¥470,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 | 検出方法：TR-FRET 別名：CBL-2，Cbl Proto-Oncogene，Signal Transduction Protein CBL; Cbl Proto-Oncogene，E3 Ubiquitin Protein Ligase，c-CBL |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | PROTAC研究用製品（BPS Bioscience社） ユビキチン・プロテアソーム特集 |
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CBL-B TR-FRET Assay Kit
文献数： 0
- 商品コード：79575
- メーカー：BPS
- 包装：1kit
- 価格：ご照会ください
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 | 検出方法：Fluorogenic 別名：UBE1，UBA1，ubcH5b，UBE2D2，E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B，RING finger protein 56，CBL，CBLB，HTRF，cblb |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | PROTAC研究用製品（BPS Bioscience社） ユビキチン・プロテアソーム特集 |
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表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。