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ポリ[ADP-リボース]ポリメラーゼのトラッピング測定キット PARPtrap Assay Kit for PARP1 / PARP2

掲載日情報：2021/12/09 現在Webページ番号：70152

ビーピーエス バイオサイエンス /
BPS Bioscience Inc.
[メーカー略称：BPS]

PARP（Poly [ADP-ribose] polymerase）とDNAの複合体形成を蛍光偏光（FP、Fluorescence Polarization）法を利用して測定するキットです。PARP-DNA複合体は、がん細胞に対する強い細胞毒性があるため、がん治療への応用が期待されています。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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測定例

PARPtrap Assay Kit for PAPR1（#80584）（左図）とPARPtrap Assay Kit for PAPR1（#78296）（右図）を使用してTalazoparib、 Olaparib、Veliparib、およびAZD5305の用量依存的阻害効果を測定した。「No compound」は「Low FP control」に相当し、「No NAD」は「High FP control」に相当する。

PARPtrap Assay Kit for PAPR1（#80584）<br>を用いた各種阻害物質の測定例

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PARPtrap Assay Kit for PAPR1（#80584）を用いた各種阻害物質の測定例

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PARP（ポリ[ADP-リボース]ポリメラーゼ）とトラッピングとは

ポリ[ADP-リボース]ポリメラーゼ（PARP, Poly[ADP-ribose] polymerase）は、核DNAに生じた一本鎖切断端を認識してDNAに結合します。核DNAに結合したPARPは活性化され、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NAD＋）を基質とし、PARP自身やDNA修復関連タンパク質にADP-リボースを付加し、ポリ-ADP-リボシル化を引き起こします（自己リボシル化）。通常、ポリ-ADP-リボシル化はDNA修復反応を活性化しますが、過度のPARPの活性化はNAD＋とATPの枯渇、さらにミトコンドリアに局在するアポトーシス誘導因子（AIF）の切断を誘導します。切断されて細胞質に放出されたAIFは、ミトコンドリアに局在していたエンドヌクレアーゼGとともに核に移行し、核DNAの断片化（～50 kb程度）を引き起こし、細胞死を誘導します。

リボシル化によりリボシルポリマーの負電荷が蓄積されてPARPはDNAから解離します。ただし一部の阻害物質が存在する場合、PARPはDNAに結合した状態を維持します。これがトラッピングと呼ばれる現象です。トラップされたPARP-DNA複合体は、がん細胞に対して強い細胞毒性があるため、この阻害物質はがん治療に有用である可能性があります。

参考文献

  • 谷口直之／監, 赤池孝章, 鈴木敬一郎, 内田浩二／編、『病態解明に迫る；活性酸素シグナルと酸化ストレス』, 実験医学増刊, 27(15）(2009)
  • 赤池孝章, 本橋ほづみ, 内田浩二, 末松誠／編, 『レドックス疾患学", 実験医学増刊』, 36(5) (2018)
  • Murai, J., et al., "Stereospecific PARP trapping by BMN 673 and comparison with olaparib and rucaparib", Mol. Cancer Ther., 13(2), 433～443 (2014). [PMID：24356813]
  • Murai, J., et al., "Trapping of PARP1 and PARP2 by Clinical PARP Inhibitors", Cancer Res., 72(21), 5588～5599 (2012). [PMID：23118055]
  • Zandarashvili, L., et al., "Structural basis for allosteric PARP-1 retention on DNA breaks", Science, 368(6486), 30～31 (2020). [PMID：32241924]

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測定原理

PARPtrapアッセイは、蛍光標識オリゴヌクレオチド二重鎖を使用します。リボシル化がない場合は、PARPは蛍光プローブに結合して大きな複合体を形成すると高い蛍光偏光度を示します。偏光した光を放出します。しかし、自己リボシル化が起こると、PARPはオリゴヌクレオチド二重鎖から解離し、オリゴヌクレオチド二重鎖は自由に回転することで蛍光の偏光度が小さくなります。PARP阻害物質を添加すると、PARPが蛍光オリゴヌクレオチド二重鎖にトラップされ、複合体を形成したままのため、用量依存的にFPシグナル（蛍光偏光度）が増加します。

PARPtrap Assay Kit for PAPR1（#80584）測定原理図

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PARPtrap Assay Kit for PAPR1（#80584）測定原理図

PARPtrap Assay Kit for PAPR2（#78296）測定原理図

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PARPtrap Assay Kit for PAPR2（#78296）測定原理図

蛍光偏光（FP、Fluorescence Polarization）法とは

蛍光偏光（FP）アッセイでは、試料中の蛍光トレーサーから放出される光の偏光の変化を測定します。特定の波長で放出される光の強度を測定する蛍光強度測定法とはまったく異なります。FPは、直接および競合アッセイにおいて、溶液中の分子相互作用のモニタリングに広く使用されています

蛍光偏光（FP、Fluorescence Polarization）法の原理

蛍光偏光（FP、Fluorescence Polarization）法の原理（詳細は上図をクリックpdf）

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特長

  • PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のハイスループットスクリーニングに最適です。
  • フォーマット：96ウェル／384ウェル
  • 測定原理：蛍光偏光（FP)法
  • 測定波長：励起 470～480 nm／蛍光 508～528 nm
  • 適応：PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングおよびIC50の決定

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製品の種類

商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。
※ Combo Kit（#78317）は、384ウェルプレート1枚と、PAPR1 / PAPR2それぞれについて192 reactions分の試薬が含まれています。

品名 PARPtrap Assay Kit for PAPR1 PARPtrap Assay Kit for PAPR2 PARPtrap Combo Assay Kit for PAPR1 and PARP2
フォーマット 96ウェル 384ウェル 96ウェル 384ウェル 384ウェル
商品コード 80584-1 80584-2 78296-1 78296-2 78317
キット内容 PAPR1,GST-tag ● ● － － ●
PAPR2,GST-tag － － ● ● ●
Fluorescent labeled oligonucleotide duplex* ● ● ● ● ●
PARPtrap assay buffer ● ● ● ● ●
NAD+ ● ● ● ● ●
Black 96-well plate ● － ● － －
Black 384-well plate － ● － ● ●

＊ キットにより内容は異なります。
※ 測定には蛍光偏光測定対応の蛍光マイクロプレートリーダーが必要です。



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価格

PARPtrap Assay Kit for PAPR1

[在庫・価格 ：2024年04月20日 14時15分現在]

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PARPtrap Assay Kit for PARP1
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PARPtrap Assay Kit for PAPR2

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PARPtrap Assay Kit for PARP2

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PARPtrap Combo Assay Kit for PARP1 and PAPR2

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お問い合わせ先

（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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