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ポリ[ADP-リボース]ポリメラーゼのトラッピング測定キット PARPtrap Assay Kit for PARP1 / PARP2

掲載日情報:2021/12/09 現在Webページ番号:70152

PARP(Poly [ADP-ribose] polymerase)とDNAの複合体形成を蛍光偏光(FP、Fluorescence Polarization)法を利用して測定するキットです。PARP-DNA複合体は、がん細胞に対する強い細胞毒性があるため、がん治療への応用が期待されています。

測定例

PARPtrap Assay Kit for PARP1(#80584)(左図)とPARPtrap Assay Kit for PARP2(#78296)(右図)を使用してTalazoparib、 Olaparib、Veliparib、およびAZD5305の用量依存的阻害効果を測定した。「No compound」は「Low FP control」に相当し、「No NAD」は「High FP control」に相当する。

PARPtrap Assay Kit for PARP1(#80584)<br>を用いた各種阻害物質の測定例

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PARPtrap Assay Kit for PARP1(#80584)を用いた各種阻害物質の測定例

PARPtrap Assay Kit for PARP2(#78296)<br>を用いた各種阻害物質の測定例

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PARPtrap Assay Kit for PARP2(#78296)を用いた各種阻害物質の測定例

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PARP(ポリ[ADP-リボース]ポリメラーゼ)とトラッピングとは

ポリ[ADP-リボース]ポリメラーゼ(PARP, Poly[ADP-ribose] polymerase)は、核DNAに生じた一本鎖切断端を認識してDNAに結合します。核DNAに結合したPARPは活性化され、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)を基質とし、PARP自身やDNA修復関連タンパク質にADP-リボースを付加し、ポリ-ADP-リボシル化を引き起こします(自己リボシル化)。通常、ポリ-ADP-リボシル化はDNA修復反応を活性化しますが、過度のPARPの活性化はNADとATPの枯渇、さらにミトコンドリアに局在するアポトーシス誘導因子(AIF)の切断を誘導します。切断されて細胞質に放出されたAIFは、ミトコンドリアに局在していたエンドヌクレアーゼGとともに核に移行し、核DNAの断片化(~50 kb程度)を引き起こし、細胞死を誘導します。

リボシル化によりリボシルポリマーの負電荷が蓄積されてPARPはDNAから解離します。ただし一部の阻害物質が存在する場合、PARPはDNAに結合した状態を維持します。これがトラッピングと呼ばれる現象です。トラップされたPARP-DNA複合体は、がん細胞に対して強い細胞毒性があるため、この阻害物質はがん治療に有用である可能性があります。

参考文献

  • 谷口直之/監, 赤池孝章, 鈴木敬一郎, 内田浩二/編、『病態解明に迫る;活性酸素シグナルと酸化ストレス』, 実験医学増刊, 27(15)(2009)
  • 赤池孝章, 本橋ほづみ, 内田浩二, 末松誠/編, 『レドックス疾患学", 実験医学増刊』, 36(5) (2018)
  • Murai, J., et al., "Stereospecific PARP trapping by BMN 673 and comparison with olaparib and rucaparib", Mol. Cancer Ther., 13(2), 433~443 (2014). [PMID:24356813]
  • Murai, J., et al., "Trapping of PARP1 and PARP2 by Clinical PARP Inhibitors", Cancer Res., 72(21), 5588~5599 (2012). [PMID:23118055]
  • Zandarashvili, L., et al., "Structural basis for allosteric PARP-1 retention on DNA breaks", Science, 368(6486), 30~31 (2020). [PMID:32241924]

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測定原理

PARPtrapアッセイでは、蛍光標識オリゴヌクレオチド(蛍光プローブ)を使用します。PARPと蛍光プローブを反応させると、PARPはオリゴヌクレオチドに結合しますが、続いてPARPの自己リボシル化が生じるとPARPは蛍光プローブから解離します。蛍光プローブ単独の場合、蛍光偏光度は小さくなります(上段)。
PARP阻害剤存在下でPARPの自己リボシル化が生じない場合は、PARPは蛍光プローブに結合し続け、トラップされます。PARP-蛍光プローブ複合体の蛍光偏光度は大きくなります(下段)。PARP阻害剤の量依存的に、蛍光偏光度が増加します。

測定原理

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蛍光偏光(FP、Fluorescence Polarization)法とは

蛍光偏光(FP)アッセイでは、試料中の蛍光トレーサーから放出される光の偏光の変化を測定します。特定の波長で放出される光の強度を測定する蛍光強度測定法とはまったく異なります。FPは、直接および競合アッセイにおいて、溶液中の分子相互作用のモニタリングに広く使用されています。

蛍光偏光(FP、Fluorescence Polarization)法の原理

蛍光偏光(FP、Fluorescence Polarization)法の原理(詳細は上図をクリックpdf

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特長

  • PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のハイスループットスクリーニングに最適です。
  • フォーマット:96ウェル/384ウェル
  • 測定原理:蛍光偏光(FP)
  • 測定波長:励起 470~480 nm/蛍光 508~528 nm
  • 適応:PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングおよびIC50の決定

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製品の種類

商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。
Combo Kit(#78317)は、384ウェルプレート1枚と、PARP1 / PARP2それぞれについて192 reactions分の試薬が含まれています。

品名 PARPtrap Assay Kit for PARP1 PARPtrap Assay Kit for PARP2 PARPtrap Combo Assay Kit for PARP1 and PARP2
フォーマット 96ウェル 384ウェル 96ウェル 384ウェル 384ウェル
商品コード 80584-1 80584-2 78296-1 78296-2 78317
キット内容 PARP1,GST-tag
PARP2,GST-tag
Fluorescent labeled oligonucleotide duplex*
PARPtrap assay buffer
NAD+
Black 96-well plate
Black 384-well plate

キットにより内容は異なります。
測定には蛍光偏光測定対応の蛍光マイクロプレートリーダーが必要です。



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価格

PARPtrap Assay Kit for PARP1

[在庫・価格 :2025年02月09日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
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納期 文献数
PARPtrap Assay Kit for PARP1
2週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • メーカーサイト
  • お問い合わせ
説明文
PARP1とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 1,poly(ADP-ribosyl)transferase,ADPRT,PARP1
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 室温,-80℃ 法規備考
掲載カタログ

製品記事 免疫療法研究用製品(BPS Bioscience社)
DNA Damage Repair関連アッセイキット(BPS Bioscience社)
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PARP1とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:384 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 1,poly(ADP-ribosyl)transferase,ADPRT,PARP1
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PARPtrap Assay Kit for PARP1

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説明文 PARP1とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 1,poly(ADP-ribosyl)transferase,ADPRT,PARP1
法規制等 カルタヘナ該当品
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PARPtrap Assay Kit for PARP1

文献数: 0

説明文 PARP1とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:384 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 1,poly(ADP-ribosyl)transferase,ADPRT,PARP1
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PARPtrap Assay Kit for PARP2

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PARPtrap Assay Kit for PARP2
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説明文
PARP2とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 2,poly(ADP-ribosyl)transferase 2,ADPRT,PARP2
法規制等 カルタヘナ該当品
保存条件 室温,-20℃,-80℃ 法規備考
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PARPtrap Assay Kit for PARP2
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PARP2とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:384 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 2,poly(ADP-ribosyl)transferase 2,ADPRT,PARP2
Protein Accession No: P23510
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PARPtrap Assay Kit for PARP2

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説明文 PARP2とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:96 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 2,poly(ADP-ribosyl)transferase 2,ADPRT,PARP2
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PARPtrap Assay Kit for PARP2

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別名:poly (ADP-ribose) polymerase 2,poly(ADP-ribosyl)transferase 2,ADPRT,PARP2
Protein Accession No: P23510
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PARPtrap Combo Assay Kit for PARP1 and PARP2

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PARP1およびPARP2とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:384 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 2,poly(ADP-ribosyl)transferase 2,ADPRT,PARP2,PARP1,poly (ADP-ribose) polymerase 1,poly(ADP-ribosyl)transferase 1
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PARPtrap Combo Assay Kit for PARP1 and PARP2

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説明文 PARP1およびPARP2とDNAの複合体形成を測定するキット。PARP/DNAトラッピングを促進する低分子化合物のスクリーニングに適しています。種交差性:Human,検出方法:Fluorescence Polarization,アッセイ法:Assay,アッセイ数:384 well,測定波長:励起:470~480 nm, 蛍光:508~528 nm
別名:poly (ADP-ribose) polymerase 2,poly(ADP-ribosyl)transferase 2,ADPRT,PARP2,PARP1,poly (ADP-ribose) polymerase 1,poly(ADP-ribosyl)transferase 1
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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