TR-FRET法で細胞内のcAMP濃度を測定 THUNDER cAMP TR-FRET Assay Kit
掲載日情報：2022/03/23 現在Webページ番号：69932
TR-FRET法にて細胞ライセート中のcAMP（Cyclic AMP）濃度を高感度に測定できるキットです。
Gタンパク質共役型受容体（GPCR）への刺激によって産生されるcAMP濃度を、分離操作や洗浄操作が不要な少ステップで測定できます。創薬ターゲットとして重要視されているGPCRの薬理学的特性評価、アゴニスト／アンタゴニストを用いたハイスループットスクリーニング（HTS）に最適です。
※ BioAuxilium社ではリン酸化タンパク質検出キット、サイトカイン測定キットも取り扱っています。また、お客様のご希望に合わせてアッセイキットを作製する受託サービスもあります。
※ 本製品は研究用です。研究用以外に使用できません。
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特長
- ロット間の一貫性を確認済み
- データシートに社内検証データを記載
- 最適な抗体ペア、ドナー／アクセプター蛍光色素分子を使用
- 測定試料：細胞ライセート
- 試料量：20μl
- フォーマット：384 well plate
- 測定波長：励起320 nm（340 nm）、337 nm（レーザー）／蛍光665 nm
- Gs-およびGi-coupled GPCRの薬理学的特性評価やハイスループットスクリーニングに最適です。
- 1,000 tests（#KIT-CAMP-1000）、5,000 tests（#KIT-CAMP-5000）、20,000 tests（#KIT-CAMP-20000）を測定できるキットがあります。
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TR-FRET法とは
Time-resolved Förster resonance energy transfer（TR-FRET）法は、蛍光共鳴エネルギー移動（Förster Resonance Energy Transfer：FRET）法と時間分解蛍光測定（Time-Resolved Fluorescence：TRF）法を組み合わせた測定方法で、タンパク質間相互作用の解析に用いられています。
FRET現象により、ドナー（ユーロピウム、Eu）の励起波長で励起するアクセプター（Far-red fluorophore、FR）の蛍光波長を測定することで、ドナーとアクセプターが近接した状態にあるかどうかを判定します。
※TR-FRET法の原理の詳細は細胞内リン酸化タンパク質検出キットの製品記事をご覧下さい。
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測定原理
キットには、ユーロピウム（Eu）標識されたストレプトアビジン（SA）、ビオチン標識されたcAMP、近赤外の蛍光物質（FR）標識された抗cAMP抗体（FR-抗cAMP抗体）が含まれています。
cAMPトレーサー複合体（Eu-SA/Biotin-cAMP）と試料中のcAMPが抗cAMP抗体に競合的に結合する競合法の原理を利用し、細胞中のcAMP濃度を測定します。
細胞が産生する遊離cAMPは、近赤外蛍光標識された抗cAMPモノクローナル抗体と結合し、cAMPトレーサー複合体（ユーロピウム標識ストレプトアビジン／ビオチン標識cAMP）と競合します。これにより、特異的なTR-FRETシグナルは細胞ライセート中のcAMPの濃度に反比例します。
試料中にcAMPが存在しない場合
FR-抗cAMP抗体がcAMPトレーサー複合体（Eu-SA/Biotin-cAMP）と結合すると、二つの色素（EuとFR）は近接する。ドナーであるEuキレート分子を320 nmもしくは340 nmまたはレーザー（337 nm）で励起するとドナー（Eu）からアクセプター（FR）へのFRETが起こり、665 nmで最大TR-FRETシグナルを発する。
試料中にcAMPが存在する場合
FR-抗cAMP抗体との結合において、試料（cAMP standardまたは細胞ライセート）中の遊離cAMPとcAMPトレーサー（Eu-SA/Biotin-cAMP）が競合するため、TR-FRETシグナルが減少する。
その結果、665 nmにおける特異的なシグナルは、試料中のcAMP濃度に反比例することになる。
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実験操作概要
実験操作は2段階（1.細胞処理、2.細胞ライセートを用意しcAMP検出）のみです。
詳細は以下のテクニカルデータシートをご確認下さい。
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他社製品との比較
本製品（赤）は他社製品（青）と比較して、同等以上のアッセイパフォーマンスを示すことを確認した。
S/B比 本製品:16、他社製品：12
※ S/B比：singal / background比＝アッセイ系の精度を表す指標
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アプリケーション例
内在性Gs共役型アデノシンA2aレセプター発現U266B1細胞
アゴニスト濃度反応曲線
アンタゴニスト濃度反応曲線
Gi共役型ヒトμオピオイドレセプター発現CHO細胞
アゴニスト濃度反応曲線
アンタゴニスト濃度反応曲線
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キット内容
- cAMP standard
- Biotin-cAMP
- Eu-streptavidin
- FR-anti-cAMP（Acc-anti-cAMP）
- cAMP detection buffer
※ キットに384ウェルプレートは含まれていません。また、別途必要なものはテクニカルデータシートのADDITIONAL MATERIALS REQUIRED（2ページ目）をご確認下さい。
※ 測定にはTR-FRETの測定が可能なプレートリーダーが必要です。プレートリーダーについてはCompatible Microplate Readersをご確認下さい。
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価格
[在庫・価格 ：2024年05月08日 11時15分現在]
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THUNDER cAMP TR-FRET Assay Kit (1000points) |
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THUNDER cAMP TR-FRET Assay Kit (5000points) |
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THUNDER cAMP TR-FRET Assay Kit (20000points) |
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[在庫・価格 ：2024年05月08日 11時15分現在]
THUNDER cAMP TR-FRET Assay Kit (1000points)
文献数： 0
- 商品コード：KIT-CAMP-1000
- メーカー：BAX
- 包装：1kit
- 価格：¥107,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
細胞ライセート中のcAMPをTR-FRET法で定量的に測定できます（洗浄不要）。浮遊細胞，接着細胞のいずれにも対応し，Gs-およびGi-coupled GPCRの薬理学的特性評価やスクリーニングに最適です。アッセイ数：1,000 points（Low-volume 384 well plate）。測定試料：細胞ライセート。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2023年6月15日号 p.32 ニュース2022年5月合併号 p.16
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
THUNDER cAMP TR-FRET Assay Kit (5000points)
文献数： 0
- 商品コード：KIT-CAMP-5000
- メーカー：BAX
- 包装：1kit
- 価格：¥284,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
細胞ライセート中のcAMPをTR-FRET法で定量的に測定できます（洗浄不要）。浮遊細胞，接着細胞のいずれにも対応し，Gs-およびGi-coupled GPCRの薬理学的特性評価やスクリーニングに最適です。アッセイ数：5,000 points（Low-volume 384 well plate）。測定試料：細胞ライセート。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2023年6月15日号 p.32 ニュース2022年5月合併号 p.16
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
THUNDER cAMP TR-FRET Assay Kit (20000points)
文献数： 0
- 商品コード：KIT-CAMP-20000
- メーカー：BAX
- 包装：1kit
- 価格：ご照会ください
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
細胞ライセート中のcAMPをTR-FRET法で定量的に測定できます（洗浄不要）。浮遊細胞，接着細胞のいずれにも対応し，Gs-およびGi-coupled GPCRの薬理学的特性評価やスクリーニングに最適です。アッセイ数：20,000 points（Low-volume 384 well plate）。測定試料：細胞ライセート。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2023年6月15日号 p.32 ニュース2022年5月合併号 p.16
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| 製品記事 | |||
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