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痛みのモデリングや末梢神経の再生研究に! ヒトiPS細胞由来の感覚神経細胞と成熟化培地

掲載日情報:2022/03/02 現在Webページ番号:69782

ヒトiPS細胞由来の感覚神経細胞(Sensory(DRG)neuron)と各感覚神経細胞に対応した成熟化培地をご紹介します。発現マーカーの異なる2種類の感覚神経細胞(RealDRG、RealDRGx)があり、実験系にあわせてお選びいただけます。また成熟化培地Senso-MMは、分化誘導キットのSenso-DM(#1010)を用いて作製した感覚神経細胞の成熟化にも使用できます。

ヒトiPS細胞から感覚神経細胞への分化誘導キットは、「Senso-DM」をご覧下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

Anatomic社のヒトiPSC由来細胞の商用利用について

Anatomic社のヒトiPSC由来細胞は、以下のご用途においてはライセンスフリーでご使用いただけます。

  • Anatomic社細胞を用いた評価試験をCROなどの第三者へ委託する場合
  • CROなどの受託試験機関がAnatomic社細胞を購入し、得られた評価データをその顧客に提供する場合

その他の用途でのご使用や、ご不明な点につきましては当社テクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。


製品ラインナップ


ヒトiPS細胞由来の感覚神経細胞必要な成熟化培地初回購入限定!(1研究室あたり、1個・1回限り)
RealDRG(#1020F1-1M)とSenso-MM(#1030)のお得なセット*1
品名ドナー商品コード品名商品コード品名商品コード
RealDRGFemale1020F1-1MSenso-MM10301M RealDRG Female #1 with Senso-MM1020F1-1M+1030
Male1020M1-1M
RealDRGxFemale1021F1-1MSenso-MM*21030
Senso-MMx2*21032

*1 注文時にセット品の商品コード(#1020F1-1M+1030)をご指定いただかなかった場合、特別価格は適用されません。あらかじめご了承下さい。
MaleのRealDRG(#1020M1-1M)をご検討のお客様は当社テクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。
*2 RealDRGxの成熟化には、Senso-MM(#1030)に加えて、Senso-MMx2(#1032)が必要です。
Anatomic社のヒトiPSC由来の感覚神経細胞を培養する場合は、コート用細胞外基質としてiMatrix-511 silkの使用を推奨しています。


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ヒトiPS細胞由来の感覚神経細胞

2種類の感覚神経細胞 RealDRG(#1020F1-1M、#1020M1-1M)とRealDRGx(#1021F1-1M)では、発現マーカーが異なります。下記の比較データをご確認のうえ、実験系にあわせてお選び下さい。

RealDRGとRealDRGxの比較

ヒートマップ解析

画像をクリックすると拡大します。

ヒートマップ解析像

図. ヒト初代DRG、ヒトiPS細胞由来の感覚ニューロン、およびヒトiPS細胞における感覚ニューロン特異的イオンチャネル、神経ペプチド、GPCR、細胞接着分子のヒートマップ解析像


自発的神経活動の評価

微小電極アレイ(MEA)を用いて、RealDRGとRealDRGxの自発的神経活動を評価した。自発的な神経活動は2週目から始まり、3週目には90%以上で活動を認めた。
画像をクリックすると拡大します。

自発的神経活動の評価

図. MEAを用いた自発的神経活動の評価


TRPA1+および神経ペプチドの発現解析

RealDRGxは約60%の細胞でTRPA1が発現し、SCN10AとTAC1もこれらの集団内で高発現していた(左図)。トランスクリプトーム解析によるRealDRGとの比較では、RealDRGxにおいてTAC1(Substance P)、CALCA、CALCB(CGRP)などの神経ペプチドの発現レベルが高いことが示された(中図)。ELISAを用いた解析においてもRealDRGxはRealDRGよりもSubstance Pの高い放出レベルを示した(右図)。
各画像をクリックすると拡大します。

RNAscopeと免疫細胞染色像

図. RNAscopeおよび免疫細胞染色像

トランスクリプトーム解析

図. トランスクリプトーム解析による比較

ELISAを用いたSubstance P放出のレベルの検証

図. ELISAを用いたSubstance P放出レベルの検証

ポスター

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RealDRG QuickGuide

Comparative Transcriptome Profiling of Multiple Human Induced Pluripotent Stem Cell Derived Sensory Neuron Populations and Functional Validation of Pain Targets on Automated Patch Clamp Systems

Anatomic社ヒトiPS細胞由来の感覚神経細胞の選択ツール

どちらの細胞がご自身の研究に適しているか、より詳細に検討したい場合はオンラインツールがあります。詳細は、当社テクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。

動画. オンラインツールの説明


使用例

RealDRGの侵害受容器のカプサイシンおよびメントールに対する応答

プロトコルはCalcium Imaging QuickGuideをご確認下さい。

RealDRGの侵害受容器のカルシウムイメージング像

図. RealDRGの侵害受容器のカルシウムイメージング像



動画. RealDRGの侵害受容器のカルシウムイメージング像



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成熟化培地

RealDRG、RealDRGx共通の成熟化培地(Senso-MM)

RealDRG(#1020F1-1M、#1020M1-1M)、RealDRGx(#1021F1-1M*2および分化誘導キットのSenso-DM(#1010)を用いて作製した感覚神経細胞の成熟化に使用できます。成熟化した神経細胞は電位依存性Na+チャネル(NaV1.7, NaV1.8, NaV1.9)、カルシウムイオンチャネル(CaV2.2)、TRPチャネル(TRPV1)を発現します*3。Senso-MMで7日間培養した感覚神経細胞は、活動電位の発火と-50 mV付近の静止膜電位を示すようになります。

*2 RealDRGxの成熟化には、Senso-MM(#1030)に加えて、Senso-MMx2(#1032)が必要です。
*3 培養期間によって各イオンチャネルの発現パターンは異なります。
Anatomic社のヒトiPSC由来の感覚神経細胞を培養する場合は、コート用細胞外基質としてiMatrix-511 silkの使用を推奨しています。
ヒトiPS細胞から感覚神経細胞への分化誘導キットは、「Senso-DM」をご覧下さい。


使用例

Senso-MMによって成熟化した感覚神経細胞の発現パターン例。
遺伝子の発現パターンのRNAシークエンスデータについては、当社テクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。

Neurons Product Manual

図. 位相差モルフォロジー(上図)とイオンチャネルの免疫細胞染色像(下図)

Neurons Product Manual

図. ヒト皮膚線維芽細胞に対する相対的な発現倍率


アプリケーションガイド

RealDRG(左)およびカルシウムイメージング(右)の詳細・操作手順は、以下のクイックガイドをご確認下さい。

RealDRG QuickGuide

RealDRG QuickGuide

Calcium Imaging QuickGuide

Calcium Imaging QuickGuide


RealDRGx用の成熟化培地(Senso-MMx2)

RealDRGx(#1021F1-1M*2用の成熟化培地です。

*2 RealDRGxの成熟化には、Senso-MM(#1030)に加えて、Senso-MMx2(#1032)が必要です。
Anatomic社のヒトiPSC由来の感覚神経細胞を培養する場合は、コート用細胞外基質としてiMatrix-511 silkの使用を推奨しています。


アプリケーションガイド

RealDRGxの詳細・操作手順は、以下のクイックガイドをご確認下さい。

RealDRG QuickGuide

RealDRGx QuickGuide



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使用文献

  • Gabrielle, M., et al., "Phosphatidic acid is an endogenous negative regulator of PIEZO2 channels and mechanical sensitivity.″ Nat. Commun., 15(1), 7020(2024). [PMID:39147733]
  • Shin, S.M., et al., "Peripherally targeted analgesia via AAV-mediated sensory neuron-specific inhibition of multiple pronociceptive sodium channels.″ J. Clin. Invest., 134(13), e170813(2024). [PMID:38722683]
  • Kalia, A.K., et al., "How to differentiate induced pluripotent stem cells into sensory neurons for disease modelling: a functional assessment.″ Stem Cell Res. Ther., 15(1), 99(2024). [PMID:38581069]
  • Black, B.J., et al., "Phenotypic Screening of Prospective Analgesics Among FDA-Approved Compounds using an iPSC-Based Model of Acute and Chronic Inflammatory Nociception.″ Adv. Sci., 11(11), e2303724(2024). [PMID:38189546]
  • Zurek, N.A., et al., "Electrophysiological Analyses of Human Dorsal Root Ganglia and Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Sensory Neurons From Male and Female Donors.″ J. Pain, 25(6), 104451(2024). [PMID:38154622]
  • Pollard, K.J., et al., "Respiratory Syncytial Virus Infects Peripheral and Spinal Nerves and Induces Chemokine-Mediated Neuropathy.″ J. Infect. Dis., 230(2), 467(2024). [PMID:38135285]
  • Jiang, W., et al., "Intervertebral disc human nucleus pulposus cells associated with back pain trigger neurite outgrowth in vitro and pain behaviors in rats.″ Sci. Transl. Med., 15(725), eadg7020(2023). [PMID:38055799]
  • Jami, S., et al., "Pain-causing stinging nettle toxins target TMEM233 to modulate NaV1.7 function.″ Nat. Commun., 14(1), 2442(2023). [PMID:37117223]
  • Lawson, J., et al., "Electrically-evoked oscillating calcium transients in mono- and co-cultures of iPSC glia and sensory neurons.″ Front. Cell. Neurosci., 17, 1094070(2023). [PMID:37006467]
  • Romero, L.O., et al., "Linoleic acid improves PIEZO2 dysfunction in a mouse model of Angelman Syndrome.″ Nat. Commun., 14(1), 1167(2023). [PMID:36859399]
  • Geramifard, N., et al., "A Novel 3D Helical Microelectrode Array for In Vitro Extracellular Action Potential Recording.″ Micromachines, 13(10), 1692(2022). [PMID:36296045]
  • Li, R., et al., "Differentiation of Human iPS Cells Into Sensory Neurons Exhibits Developmental Stage-Specific Cryopreservation Challenges.″ Front. Cell Dev. Biol., 9, 796960(2021). [PMID:34970550]
  • Ehsanian, R., et al., "Pre- and Post-Interventional Changes in Physiological Profiles in a Patient Presenting With Opioid Withdrawal After Intrathecal Drug Delivery System Failure Related to Assumed Catheter Microfracture.″ Cureus, 13(5), e14835(2021). [PMID:34104585]

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価格

初回購入限定!(1研究室あたり、1個・1回限り)RealDRG(#1020F1-1M)とSenso-MM(#1030)のお得なセット*1

*1 注文時にセット品の商品コード(#1020F1-1M+1030)をご指定いただかなかった場合、特別価格は適用されません。あらかじめご了承下さい。
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1M RealDRG Female #1 with Senso-MM
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※輸入諸費用(90,000円)を別途いただく製品です。※初めて購入されるお客様限定。#1020F1-1Mと#1030のセット品。1研究室1個・1回限り。 細胞数:1×106 cells/vial
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ヒトiPS細胞由来の感覚神経細胞(RealDRG)

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1M RealDRG Male #1
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ヒトiPS細胞由来の感覚神経細胞(RealDRGx)

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RealDRG、RealDRGx共通の成熟化培地

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RealDRGx用の成熟化培地

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Senso-MMx2

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(テクニカルサポート 試薬担当)

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