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DetectX Protein Kinase A Colorimetric Activity Kit
プロテインキナーゼ A（PKA）活性測定キット DetectX Protein Kinase A Colorimetric Activity Kit
掲載日情報：2020/10/01 現在Webページ番号：69571
試料中のプロテインキナーゼ A（PKA、Protein Kinase A）活性を比色法により高感度で測定するキットです。PKAの阻害物質のスクリーニングにも最適です。キットの改良により、従来のキットに比べ、2波長での読み取りが不要になり、感度は約10倍向上し、またより簡便な操作で測定が可能になりました。
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検量線例
 Protein Kinase A（PKA) Colorimetric Activity Kitの検量線例 |
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プロテインキナーゼ A（PKA, Protein Kinase A）とは
由来
プロテインキナーゼ A（PKA, Protein Kinase A）は、1960年代にEdwin G. Krebs の研究室で発見されました1。この重要なクラスのキナーゼは、Arg-directed kinaseまたはAGC-family kinaseと呼ばれ、cAMP-dependent protein kinase（PKAまたはcAPK）、cGMP-dependent protein kinase（PKG）、Protein kinase C、AktおよびRSKが含まれます。これらのキナーゼは、リン酸化セリンまたはスレオニンに対し、3位のArgを特徴とする基質特異性を共有しています2～4。
作用
セカンドメッセンジャーのCyclic AMP（cAMP）は、哺乳類細胞のPKAを活性化し、遺伝子転写、イオン輸送、タンパク質リン酸化などの多くの細胞メカニズムを制御します2。不活性型PKAは、Regulatory subunit（R）dimerとCatalytic subunit（C）dimerで構成されるヘテロ四量体です。この非アクティブの状態においては、Rサブユニットの疑似基質配列は、Cサブユニットの活性部位を阻害します。PKAは、Akt（PKB）およびPKC4と基質特異性を共有します。この同一配列を示す基質Bad（Ser155）、CREB（Ser133）、およびGSK-3（GSK-3αSer21およびGSK-3βSer9）は、PKAによってリン酸化されます5～7。
PKAは、他のプロテインキナーゼの調節、細胞内カルシウム濃度の調節、転写調節など、多くの細胞プロセスに関与しています8。転写応答は、cAMP response element-binding protein（CREB）、cAMP response element modulator（CREM）の活性化、およびTranscription Factor-1（ATF1）の活性化を介するcAMPの増加に対して起こります9。それぞれの転写因子は、PKAによるリン酸化のための保存部位を含むキナーゼ誘導性ドメインを有しています。
参考文献
- Walsh, DA., Perkins, JP., Krebs, EG., "An adenosine 3',5'-monophosphate-dependent protein kinase from rabbit skeletal muscle.", J. Biol. Chem., 243, 3763～3765 (1968).
- Montminy, M., "Transcriptional regulation by cyclic AMP.", Annu Rev Biochem., 66, 807～822 (1997).
- Pearson, RB. and Kemp, BE., "Protein kinase phosphorylation site sequences and consensus specificity motifs:Tabulations.", Methods Enzymol., 200, 62～81 (1991) .
- Dell’Acqua, ML. and Scott, JD., "Protein kinase A anchoring.", J. Biol. Chem., 272, 12881～12884 (1997).
- Tan, Y., et al., "BAD Ser-155 Phosphorylation Regulates BAD/Bcl-XL Interaction and Cell Survival.", J. Biol. Chem., 275, 25865～25869 (2000).
- Gonzalez, GA. and Montminy, MR., "Cyclic AMP stimulates somatostatin gene transcription by phosphorylation of CREB at serine 133.", Cell, 59, 675～680 (1989).
- Fang, X., et al., "Phosphorylation and inactivation of glycogen synthase kinase 3 by protein kinase A.", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 11960～11965 (2000).
- Taskén, K, and Aandahl, EM., "Localized effects of cAMP mediated by distinct routes of protein kinase A.", Physiol. Rev., 84, 137～167 (2004).
- Sands, WA., and Palmer, TM., "Regulating gene transcription in response to cAMP elevation.", Cell Signal., 20, 460～466 (2008).
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測定原理
- PKA基質が固定化されたプレートウェルにPKA含有試料とキット構成品のATPを加え、PKA基質をリン酸化する。
- 90分間のインキュベーションの後に洗浄し、ウサギ抗リン酸化PKA抗体を加え、リン酸化PKA基質に結合させる。
- HRP標識抗ウサギIgG抗体を加え、ウサギ抗リン酸化PKA抗体に結合させる。
- 短時間のインキュベーションの後、TMB基質を加え発色させる。
- 吸光度（OD 450 nm）を測定する。試料または標準溶液中のPKA量に正比例する。
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特長
- 測定試料：細胞ライセート、組織抽出物、バッファー試料
- フォーマット：96 well plate
- 測定方法：比色
- 測定波長：450 nm
- 測定時間：約3時間
- 測定範囲：0.625～10.0 U/ml
- 感度：0.037 U/ml（1.48 mU/sample）
- オンラインツール（
）のテンプレートへ測定結果を入力することで、濃度計算が簡単に行えます。*
* MyAssays
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阻害試験例
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交差性
| 抗原名 | 交差性 |
|---|---|
| PKAc α | 100％ |
| PKAc β | 73％ |
| PKAc γ | 10.1％ |
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キット内容
- PKA substrate 96 well plate
- PKA standard
- ATP
- Phospho PKA substrate antibody
- Donkey anti-rabbit IgG HRP conjugate
- Kinase reaction buffer concentrate
- Cell lysis buffer
- Wash buffer concentrate
- TMB substrate
- Stop solution
- Plate sealer
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Arbor Assays社アッセイキットデモビデオ
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月24日 09時15分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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PKA (Protein Kinase A) Activity Assay Kit (96well) |
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[在庫・価格 ：2024年04月24日 09時15分現在]
PKA (Protein Kinase A) Activity Assay Kit (96well)
文献数： 28
- 商品コード：K027-H1
- メーカー：ARB
- 包装：1kit
- 価格：¥125,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
測定試料：Cell lysates, Tissue extracts, buffer samples，感度：0.366 U/ml，測定範囲：5-25 U/ml (alt. 5-40)，検出方法：呈色，測定波長：450 nm (alt. 650 nm)，アッセイ法：Activity，アッセイ数：1x96 well plate，必要試料量：40 ul，総インキュベーション時間：90 min @ 30C with shaking + 30 min @ RT，測定因子：Protein Kinase A (PKA) |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 |
DetectX アッセイキットシリーズ（Arbor Assays社） DetectX Inflammation Assay Kitシリーズ |
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| 関連記事 | |||
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