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アフィニティービーズシステムを用いたアセチル化タンパク質解析 Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit

掲載日情報:2024/05/29 現在Webページ番号:69126

細胞または組織ライセートから、アフィニティビーズシステムを使用した免疫沈降(Immunoprecipitation、IP)による、アセチル化タンパク質を分離・濃縮し、標的タンパク質特異的な抗体によりウエスタンブロッティングで検出するキットです。


製品ラインナップ

品名 アッセイ回数 アセチル化リジンアフィニティビーズ(付属品) 商品コード
Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit 30 AAC02-Beads、AAC03-Beads BK163
15 BK163-S
Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit - AAC03 30 AAC03-Beads BK164

アセチル化リジンアフィニティビーズの詳細

アセチル化リジンアフィニティビーズ アイソタイプ(免疫動物) クローン名
AAC02-Beads Mouse IgG2b 7B5A1
AAC03-Beads Mouse IgG1 19C4B2.1
AAC04-Beads Mouse IgG2b、Mouse IgG1 7B5A1、19C4B2.1

AC02-BeadsとAAC03-Beadsを1:1で混合すると、AAC04-Beadsが作製できます。


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特長

  • アセチル化リジンアフィニティビーズは、抗アセチル化リジン抗体が共有結合により架橋されたプロテインGビーズです。
  • Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit(#BK-163、#BK163-S)は、2種類のアセチル化リジンアフィニティビーズを含むため汎用性の高いキットです。事前準備として、AAC02-BeadsとAAC03-Beadsを別々に試して、どちらのビーズが標的タンパク質に最適かを比較することをおすすめします。
  • アセチル化タンパク質の包括的なプロファイリングが必要な場合は、AC02-BeadsとAAC03-Beadsを1:1で混合したAAC04-Beadsをおすすめします。
  • キットにはHDAC阻害物質であるTrichostatin AやNicotinamide、およびウエスタンブロッティング用の化学発光検出試薬などが含まれています。
  • 翻訳後修飾の新規制御メカニズムや新規バイオマーカーの探索、非常に一時的な翻訳後修飾の制御の検出などに有用です。

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適用

  • 新規制御機構の探索
  • タンパク質修飾の高度な一過性制御の検出
  • トランスフェクションまたはプロテオミクスアプローチから生成されたデータの確認
  • システム内の既知のタンパク質修飾の役割を調査
  • 新規バイオマーカーの探索

動画によるSignal-Seekerシリーズ適用ガイド

下の画像をクリックすると、Signal-Seekerシリーズの適用分野に関するガイドビデオをご覧いただけます。


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使用例

アセチル化リジンアフィニティビーズを用いた、アセチル化EGFRおよびアセチル化RhoGDIタンパク質の免疫沈降(IP)の比較

アセチル化リジンアフィニティビーズを用いた、アセチル化EGFRおよびアセチル化RhoGDIタンパク質の免疫沈降(IP)の比較

AAC02-Beads、AAC03-BeadsおよびAAC04-Beads(AAC02-Beads:AAC03-Beads=1:1)を用いて、Trichostatin A(1 μM)およびNicotinamide(16 mM)で6時間処理(+)または未処理(-)したCos-7細胞株からアセチル化タンパク質を免疫沈降(Immunoprecipitation、IP)した。IP後は、抗EGFR抗体と抗RhoGDI抗体を用いてウエスタンブロット解析をし、定量化した。

Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kitを用いたWB像

アセチル化リジンアフィニティビーズ(AAC04-Beads)と競合他社製品の比較

各社のアセチル化リジンアフィニティビーズ製品を用いて、Trichostatin A(1 μM)およびNicotinamide(16 mM)で6時間処理(+)または未処理(-)したCos-7細胞株からアセチル化タンパク質を免疫沈降(Immunoprecipitation、IP)した。IP後は、HRP標識抗アセチル化リジン抗体(1:3,000希釈)を用いてウエスタンブロット解析し、評価を行った。競合他社製品は、アセチル化タンパク質(アセチル化チューブリンやヒストンなど)を濃縮するのに対し、AAC04-Beadsは幅広いアセチル化タンパク質を濃縮した。


AAC03-Beadsを用いたアセチル化タンパク質の網羅的解析

AAC03-Beadsを用いたアセチル化タンパク質の網羅的解析

AAC03-Beadsを用いて、Trichostatin A(1 μM)およびNicotinamide(1 mM)で6時間処理(+)または未処理(-)した。1 mgのCos-7細胞株ライセートから内因性のアセチル化タンパク質を免疫沈降(Immunoprecipitation、IP)した。IP後、標的タンパク質(POI)は抗EGFR抗体と抗RhoGDI抗体を用いて、アセチローム解析はHRP標識抗アセチル化リジン抗体(#BK164に付属)を用いてウエスタンブロット解析をした。

Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kitを用いたWB像

組織試料を用いたアセチル化タンパク質の免疫沈降(IP)

BlastR lysis bufferを用いて、マウス組織抽出液(肝臓および心臓)を調製した。1 mgの組織抽出液にAAC04-Beads(50 μl)またはコントロールビーズ(#CIG02、50μl)で免疫沈降(Immunoprecipitation、IP)を行った。IP後の濃縮タンパク質はSDS-PAGEで分離し、HRP標識抗アセチル化リジン抗体(1:3,000希釈)を用いてウエスタンブロット解析をした。


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操作方法概略

操作方法概略

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キット内容

  • BlastR lysis buffer
  • BlastR dilution buffer
  • BlastR wash buffer
  • Trichostatin A
  • Nicotinamide
  • Proteinase inhibitor cocktail
  • Acetyl lysine affinity beads
  • Control beads for acetyl lysine IP
  • Anti-acetyllysine-HRP antibody
  • Precision red advanced protein assay reagent
  • Bead elution buffer
  • DMSO
  • Chemiluminescent detection reagent A/B
  • Spin column & collection tube
  • BlastR filter

ウエスタンブロットに使用する一次抗体および二次抗体は含まれていません。

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価格

[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]

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Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit (30 assays)
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

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