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細胞内の活性型低分子量Gタンパク質を検出するキット G-Protein Activation Assay Biochem Kit

掲載日情報:2014/06/05 現在Webページ番号:6289

細胞ライセート中の活性型Rhoファミリータンパク質(Cdc42 / Rac1 / RhoA)および活性型Rasを、分離・検出するキットです。

特長

  • 各活性型低分子量Gタンパク質(Cdc42 / Rac1 / RhoA / Ras)と特異的に結合するアフィニティビーズを用いて、細胞ライセート中から各低分子量Gタンパク質を分離・検出できます。
  • 活性型Cdc42、Rac1、RhoAの検出用試薬がセットになったCombo Biochem Kit(#BK030)と、各低分子量Gタンパク質を個別に検出するBiochem Kitがあります。
  • キット付属のグルタチオンアガロースビースは着色されているため、操作がしやすくなっています(下図参照)。
着色されたアガロースビーズ

着色されたアガロースビーズ

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検出原理

各低分子量Gタンパク質に対するエフェクター分子の相互作用ドメインがビーズ上にコートされています。試料中の活性型Gタンパク質をプルダウン法により回収します。

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各アフィニティビーズ上にコートされているエフェクタードメイン

低分子量
Gタンパク質
エフェクター分子 エフェクタードメイン 説 明
Cdc42 / Rac1 PAK PAK-PBD PAK(p21 activated kinase 1)のCdc42 / Rac1結合ドメイン(p21 Binding Domain)
RhoA Rhotekin Rhotekin-RBD RhotekinのRho結合ドメイン(Rho Binding Domain)
RalA RalBP1 RalBP1-RBD RalBP1のRal結合ドメイン(Ral Binding Domain)
Ras Raf1 Raf1-RBD Raf1のRas結合ドメイン(Ras Binding Domain)


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操作方法概略

操作方法概略

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解析例

活性型Rhoウエスタンブロッティング解析

分離した活性型Rhoファミリータンパク質のウエスタンブロッティング解析

上図に示した各キットを用いて、Swiss 3T3細胞ライセート中の各活性型Rhoファミリータンパク質を検出した。本製品により、活性型Rhoファミリータンパク質のみが分離されており、不活性型Rhoファミリータンパク質は検出されていないことがわかる。
レーン左:組換え体活性型Hisタグ融合Rhoファミリータンパク質(ポジティブコントロール)
レーン中央:GDP処理した細胞ライセート
レーン右:GTPγS処理した細胞ライセート
レーン中央および右は、同量の細胞ライセート試料を使用している。

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キット内容

共通

  • GTPγS (non-hydrolyzable GTP analog)
  • GDP
  • Cell lysis buffer
  • Wash buffer
  • Loading buffer
  • Stop buffer
  • Protease inhibitor cocktail

その他のキット構成品

キット構成品 商品コード
BK030 BK034-S BK035-S BK008-S BK040 BK036-S
BK034 BK035 BK008 BK036
GST-tagged PAK-PBD protein on colored agarose beads
GST-tagged Rhotekin-RBD protein on colored agarose beads
RalBP1-RBD protein on colored agarose beads
GST-tagged Raf1-PBD protein on colored agarose beads
Cdc42 monoclonal antibody
Rac1 monoclonal antibody
RalA monoclonal antibody
RhoA monoclonal antibody
p21 RAS monoclonal antibody
His-tagged Cdc42 protein
His-tagged Rac1 protein
RalA active control protein
His-tagged Ras protein
His-tagged RhoA protein
DMSO

キットに付属のアフィニティビーズ、抗体、プロテアーゼ阻害物質カクテルは、個別にご購入いただくことも可能です。詳細は当社テクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。

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価格

[在庫・価格 :2024年04月25日 20時55分現在]

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RhoA/Rac1/Cdc42 Activation Assay Combo Biochem Kit (3×10assays)
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

Gタンパク質/環状ヌクレオチド