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GTPaseのGEF(グアニンヌクレオチド交換因子)を蛍光により測定 RhoGEF Exchange Assay Kit

掲載日情報:2019/09/30 現在Webページ番号:68824

ヒト低分子量 G タンパク質small GTPase Cdc42,RhoA および Rac1 を活性化する GEF(グアニンヌクレオチド交換因子:guanine nucleotide exchange factors)は,標的small GTPase(低分子量Gタンパク質)のGDPとGTPの交換を触媒します。本製品は,GTPaseへの蛍光ヌクレオチドアナログmant-GTP(N-methylanthraniloyl-GTP)の取り込みを測定するキットです。
付属のマルチウェルプレートを用いることにより多量の試料を測定できます。

GTPase 活性化タンパク質( GAP )の活性を測定するキットについては,RhoGAP Assay Biochem Kitをご覧下さい。

使用例

Dbs exchange activity for Cdc42, RhoA and Rac1 in 96-well half area plate format

Dbs exchange activity for Cdc42, RhoA and Rac1 in 96-well half area plate format

Dbs exchange activity for Cdc42, RhoA and Rac1 in 384-well plate format

Dbs exchange activity for Cdc42, RhoA and Rac1 in 384-well plate format

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特長

  • 未同定のGEF(グアニンヌクレオチド交換因子)の活性/GTPase特異性を測定できます。
  • 低分子GTPaseと関連するGEFの生化学的特長を検討できます。
  • 異なるコファクターあるいはタンパク質ドメインによるGEF活性の調節を検討できます。
  • ハイスループットスクリーニングによるGEF阻害物質の解析にも有用です。
  • キットには,96 ウェルで各60回,または 384 ウェルで各300回行うのに十分な量の試薬が含まれています。
  • 励起/蛍光波長:360 nm / 440 nm

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測定例

Dbs測定例

small GTPase Cdc42 (#CD01) とhuman Dbs protein (#GE01)を用いた測定
The reactions were conducted in a 96 well black flat bottom half area plate (Corning Cat# 3686) format (150 μl reaction volumes). Each reaction contains 1 μM GTPases, 50 μg/ml bovine serum albumin (BSA), 20 mM Tris pH 7.5, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2, and 0.8 μM mant-GTP with or without the presence of 0.5 μM human Dbs(DH/PH) protein. Reactions were measured in a Tecan Spectrofluor plus fluorimeter( λex=360 nm, λem=460 nm). Readings were taken at 20°C every 30 seconds for a total reaction time of 30 minutes.

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測定原理

測定原理

GEFは,GDP結合型GTPaseと結合することで,GDP(ヌクレオチド)が放出されます。この結果,ヌクレオチドフリーなGEF-GTPase反応中間体が生じます。GEFはGTP結合型GTPaseよりもGDP結合型GTPaseに対し高親和であるため,GEFはGDP結合型GTPaseからGTP結合型GTPaseへの交換をし続けています。
蛍光グアニンヌクレオチドmant (N-methylanthraniloyl)-GTPを用いたアッセイは,蛍光アナログmant-GTP結合型,非結合型グアニンヌクレオチド間の分光の違いを利用し,small GTPaseの状態をモニタリングできます。

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キット内容

  • Exchange buffer (mant-GTP)
  • His-tagged Cdc42 protein (#CD01)
  • His-tagged Rac1 protein(#RC01)
  • His-tagged RhoA protein (#RH01)
  • His-tagged hDbs protein (#GE01)
  • 384-well black half area round bottom plate
  • 96-well black half area flat bottom plate

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使用論文

  • Wang, S., et al., Mol. Endocrinology, 23: 901~913 (2009).
    "PLC-g1 and Rac1 coregulate EGF-induced cytoskeleton remodeling & cell migration."
  • Shi, Y., et al., J. Immunology, 182:3837~3845 (2009).
    "The mDia1 Formin is required for neutrophil polarization, migration & activation of the LARG/RhoA/Rock signaling axis during chemotaxis."

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価格

[在庫・価格 :2020年07月04日 00時13分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
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納期 文献数
RhoGEF Exchange Assay Kit
1週間程度  0
説明文
アッセイ法:Assay,検出方法:蛍光,測定波長:360/440 nm
法規制等
保存条件 4℃,乾燥状態(デシケータ内)で保存 法規備考
掲載カタログ

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RhoGEF Exchange Assay Kit

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  • 商品コード:BK100
  • メーカー:CYO
  • 包装:1kit
  • 価格:¥176,000
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説明文 アッセイ法:Assay,検出方法:蛍光,測定波長:360/440 nm
法規制等
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cdc42, Wild Type, His-tagged, Human, Recombinant
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cdc42, Wild Type, His-tagged, Human, Recombinant

文献数:0

  • 商品コード:CD01-A
  • メーカー:CYO
  • 包装:100μg
  • 価格:¥71,000
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  • 商品コード:RH01-A
  • メーカー:CYO
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  • 商品コード:RH01-C
  • メーカー:CYO
  • 包装:3x100μg
  • 価格:¥176,000
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  • 納期:1週間程度 
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  • 商品コード:RH01-XL
  • メーカー:CYO
  • 包装:1mg
  • 価格:ご照会ください
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
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  • 商品コード:GE01-A
  • メーカー:CYO
  • 包装:2x50μg
  • 価格:¥69,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

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