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RhoGEF Exchange Assay Kit
GTPaseのGEF（グアニンヌクレオチド交換因子）を蛍光により測定 RhoGEF Exchange Assay Kit
掲載日情報：2019/09/30 現在Webページ番号：68824
ヒト低分子量 G タンパク質small GTPase Cdc42、RhoA および Rac1 を活性化する GEF（グアニンヌクレオチド交換因子：guanine nucleotide exchange factors）は、標的small GTPase（低分子量Gタンパク質）のGDPとGTPの交換を触媒します。本製品は、GTPaseへの蛍光ヌクレオチドアナログmant-GTP（N-methylanthraniloyl-GTP）の取り込みを測定するキットです。
付属のマルチウェルプレートを用いることにより多量の試料を測定できます。
GTPase 活性化タンパク質（ GAP ）の活性を測定するキットについては、RhoGAP Assay Biochem Kitをご覧下さい。
追加しました。
使用例
Dbs exchange activity for Cdc42, RhoA and Rac1 in 96-well half area plate format
Dbs exchange activity for Cdc42, RhoA and Rac1 in 384-well plate format
追加しました。
特長
- 未同定のGEF（グアニンヌクレオチド交換因子）の活性／GTPase特異性を測定できます。
- 低分子GTPaseと関連するGEFの生化学的特長を検討できます。
- 異なるコファクターあるいはタンパク質ドメインによるGEF活性の調節を検討できます。
- ハイスループットスクリーニングによるGEF阻害物質の解析にも有用です。
- キットには、96 ウェルで各60回、または 384 ウェルで各300回行うのに十分な量の試薬が含まれています。
- 励起／蛍光波長：360 nm / 440 nm
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測定例
small GTPase Cdc42 (#CD01) とhuman Dbs protein (#GE01)を用いた測定
The reactions were conducted in a 96 well black flat bottom half area plate (Corning Cat# 3686) format (150 μl reaction volumes). Each reaction contains 1 μM GTPases, 50 μg/ml bovine serum albumin (BSA), 20 mM Tris pH 7.5, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2, and 0.8 μM mant-GTP with or without the presence of 0.5 μM human Dbs(DH/PH) protein. Reactions were measured in a Tecan Spectrofluor plus fluorimeter( λex=360 nm, λem=460 nm). Readings were taken at 20°C every 30 seconds for a total reaction time of 30 minutes.
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測定原理
GEFは、GDP結合型GTPaseと結合することで、GDP（ヌクレオチド）が放出されます。この結果、ヌクレオチドフリーなGEF-GTPase反応中間体が生じます。GEFはGTP結合型GTPaseよりもGDP結合型GTPaseに対し高親和であるため、GEFはGDP結合型GTPaseからGTP結合型GTPaseへの交換をし続けています。
蛍光グアニンヌクレオチドmant (N-methylanthraniloyl)-GTPを用いたアッセイは、蛍光アナログmant-GTP結合型、非結合型グアニンヌクレオチド間の分光の違いを利用し、small GTPaseの状態をモニタリングできます。
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キット内容
- Exchange buffer (mant-GTP)
- His-tagged Cdc42 protein (#CD01)
- His-tagged Rac1 protein(#RC01)
- His-tagged RhoA protein (#RH01)
- His-tagged hDbs protein (#GE01)
- 384-well black half area round bottom plate
- 96-well black half area flat bottom plate
追加しました。
使用論文
- Wang, S., et al., Mol. Endocrinology, 23: 901～913 (2009).
"PLC-g1 and Rac1 coregulate EGF-induced cytoskeleton remodeling & cell migration." - Shi, Y., et al., J. Immunology, 182:3837～3845 (2009).
"The mDia1 Formin is required for neutrophil polarization, migration & activation of the LARG/RhoA/Rock signaling axis during chemotaxis."
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月20日 15時35分現在]
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RhoGEF Exchange Assay Kit |
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本製品は取扱中止になりました | 0 | ||
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