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免疫チェックポイント関連遺伝子84種の発現量をqPCRで同時解析 Immune checkpoints SignArray

掲載日情報:2019/06/17 現在Webページ番号:69104

特定のカテゴリーに関連する84種の遺伝子発現量をqPCRで同時解析できるSignArrayの中から,免疫チェックポイント(Immune checkpoints)関連遺伝子解析用の製品をご紹介します。
本製品は,各ウェルに各因子に対するqPCR用プライマーが添加されているプレート製品です。合成したcDNAと専用のqPCR用マスターミックス(別売り)を混合後,各ウェルに添加してqPCRを行います。
*qPCR用マスターミックス(Perfect Master Mix SYBR Green)は、ご使用のqPCR装置に併せてお選び下さい。AnyGenes では、SignArrayと同社のPerfect Master Mix SYBR Green を併せてご使用いただくことを強く推奨しております。他社の試薬と組み合わせて使用し、結果に不具合などが生じた場合、補償の対象外となる可能性があります。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


MEMO 免疫チェックポイントについて

免疫チェックポイントについて (クリックで開閉します)

免疫恒常性の維持は免疫応答の大きさの制御によって行われますが,それは共刺激シグナルと抑制シグナルのバランスによって調節されます。これらのシグナルは免疫チェックポイント分子によって開始され,その活性化は多くのシグナル伝達経路に影響を与えることによって悪性細胞または病原体に対する抗原特異的T細胞応答を調節します1)

免疫チェックポイント分子の中で,腫瘍細胞の作用でT細胞活性化を負に調節するレセプターであるPD1およびCTLA4は,腫瘍細胞に対する免疫応答を高めるがん免疫療法における重要な標的として注目されました2~3)。がんにおける免疫チェックポイント遮断療法の成功により,この手法はHIV,HBVなどの慢性持続性ウイルス感染やマラリア感染のような免疫チェックポイントのアップレギュレーションをもたらす疾患に対しての新しい治療法として注目されています4)

しかしながら,がんの免疫療法は一群の患者にのみ有効な手法であり5),関連するバイオマーカー遺伝子発現のモニタリングは,治療に対する反応の予測,およびメカニズムの理解に必要です。


模式図

T細胞応答を調節する抗原提示細胞との相互作用
(画像出典:参考文献4)


■ 参考文献

  1. Nirschl, C. J. & Drake, C. G., Clin. Cancer Res., 19 (18), 4917~4924 (2013).
  2. Parry, R. V. et al., Mol. Cell. Biol., 25, 9543~9532 (2005).
  3. Sharpe, A. H. & Pauken, K. E., Nat. Rev. Immunol., 18 (3), 153~167 (2018).
  4. Wykes, M. N. & Lewin, S. R., Nat. Rev. Immunol., 18 (2), 91~104 (2018).
  5. Chen, D. S. & Mellman, I., Nature, 541, 321~330 (2017).

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特長

  • 関連84遺伝子と,ノーマライズ用8遺伝子,品質管理用4遺伝子(計96遺伝子)の発現量をわずか3時間で一度に解析できます(384プレート製品は,96遺伝子×4セット)。
  • イントロン部分を挟んだ複数エクソンを標的としたプライマーデザインにより,ゲノムDNAを増幅することなくcDNAのみを増幅できるため,高感度かつ高い特異性で測定を行えます。
  • SignArrayと,専用のqPCR用マスターミックス(Perfect Master Mix SYBR Green)は,それぞれのqPCR装置に最適化された製品があり,簡便かつ高い信頼性で測定を行えます。
  • AnyGenes社Webより,解析用ソフトウェア(Microsoft Excel対応)を無料でダウンロードでき,得られた結果の解析が容易です。

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プライマーデザインについて

他社製品の多くは,プライマーの標的部位をひとつのエクソン内にデザインしているため,cDNAだけでなく,ゲノムDNAやゲノム中の偽遺伝子も増幅され,感度や特異性に問題が生じます。
一方,SignArrayは,イントロン部分を挟んだ複数エクソンを標的としてデザインしているため,ゲノムDNAを増幅することなくcDNAのみを増幅でき,高感度かつ高い特異性で測定を行えます。

原理

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品質管理

プライマー効率 プライマー効率は,Perfect Master MixSYBR Green(PMS)を使用した厳密な品質検査により100±10%の効率を確認しています。
プライマーの
特異性
厳密なイントロンスパン設計に基づいて,全プライマーについて,融解曲線上の単一ピーク,および予想される分子量における単一ゲルバンドを示すことを確認しています。
再現性 Perfect Master Mix SYBR Green(PMS)は,全シグナル伝達経路研究用SignArrayにおいて,同じcDNAで試験した同じSignArray間の相関関係について検証を実施して,信頼性および再現性を確認しています。

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操作方法概略

  1. 細胞,組織などの生体試料からRNAを抽出する
  2. 逆転写酵素によりcDNAを合成する
  3. cDNAとPerfect Master Mixを混合し,qPCR Master Mixとする。
  4. qPCR Master MixをSignArrayに添加してqPCRを行う。
  5. 解析用ソフトウェアを用いてデータ解析を行う。

本製品にRNA抽出試薬やcDNA合成試薬は含まれていません。


操作方法概略

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解析用ソフトウェアについて

解析用ソフトウェアについて(クリックで開閉します)

AnyGenes社Webより,解析用ソフトウェア(Microsoft Excel対応)を無料でダウンロードでき,得られた結果の解析が容易です。

■ ソフトウェア特長

  • 測定結果から統計データテーブルセットおよびグラフを作成でき,迅速かつ信頼性の高い解析が行えます。
  • ΔCq計算法を用いて解析を行い,選択したハウスキーピング遺伝子を用いてノーマライズします。
  • 同一のExcelワークブック中に存在する最大10種の実験結果について,参照条件(コントロール,キャリブレーター)と比較することができます。
  • 解析結果は,プレゼンテーションや出版に使用できます。
  • 主にMicrosoft Excel 2007以降のバージョンに対応しています。

Microsoft Excel 2007以前のバージョンをご使用された場合には,機能上の問題が生じる可能性があります。


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測定できる遺伝子

■ヒトImmune Checkpoints SignArray(#IC1H1-xxx)

ADORA2AAKT1ALKBTLACASP3CASP6CASP7CASP8CASP10CCL2CD4CD24
CD27CD28CD40CD40LGCD70CD80CD86CD96CD160CD244CD247CD274
CD276CTLA4DAXXFADDFASFLOT1FOXP3GUCY1A3HAVCR2HLA-DMAHLA-DMBHMOX1
HRH4ICOSICOSLGIDO1IFNGIL1AIL2IL6IL6RIL6STIL10IL10RA
IL10RBIL12BIL18KIR3DL1KLRG1LAG3LGALS9MICAMICBNT5EOR2H2PDCD1
PDCD1LG2PIK3CAPSMB8PSMB9PTPN6PTPN11PVRSTAT3TAP1TAP2TGFB1TGFBR2
TNFRSF4TNFRSF9TNFRSF10ATNFRSF10BTNFRSF14TNFRSF18TNFSF4TNFSF9TNFSF14TRIM39TUBBVTCN1

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qPCR装置と対応した製品について

品名をクリックすると,該当の価格表へページ内リンクします。

SignArrayおよび別売りのPerfect Master Mix SYBR Greenは,qPCR装置に応じた製品を取りそろえています。
※ qPCR用マスターミックス(Perfect Master Mix SYBR Green)は、ご使用のqPCR装置に併せてお選び下さい。

SignArrayの商品コードは,以下のように番号づけされています。下記「製品ラインナップ」の表をご確認の上,お手持ちのqPCR装置に対応した製品をお選び下さい。

商品コード概略

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製品ラインナップ

商品コードをクリックすると,価格表をご覧いただけます。
※ qPCR用マスターミックス(Perfect Master Mix SYBR Green)は、ご使用のqPCR装置に併せてお選び下さい。

会社名 qPCR装置名 動物種 Immune checkpoints SignArray Perfect Master Mix SYBR Green
2×96 plates 2×384 plates 2×96 plates 2×384 plates
Roche LightCycler 96 Human IC1H1-R2S PMS1-W2S
LightCycler 480 IC1H2-R2S PMS2-W2S
Applied Biosystems
(Thermo Fisher Scientific)
Step One Plus Real-Time System Human IC1H1-F2S PMS1-R2S
ABI 5700 / 7000 / 7300 / 7700 IC1H1-A2S
ABI 7500
(Standard block)
PMS1-LR2S
ABI 7500
(Fast block)
IC1H1-F2S
ABI 7900 HT
(Standard block)
IC1H1-A2S IC1H2-A2S PMS1-R2S PMS2-R2S
ABI 7900 HT
(Fast block)
IC1H1-F2S
ViiA7 System, QuantStudio 5 / 6 / 7 / 12K Flex System(Standard block) IC1H1-A2S PMS1-LR2S PMS2-LR2S
ViiA7 System, QuantStudio 5 / 6 / 7 / 12K Flex System
(Fast block)
IC1H1-F2S
Bio-RadiCycler iQ, iQ5, MyiQ, MyiQ2 Human IC1H1-A2S PMS1-F2S
Chromo4, Opticon, Opticon2, CFX Connect, CFX96 IC1H1-B2S PMS1-W2S
CFX384 IC1H2-A2S PMS2-W2S
EppendorfMastercycler ep realplex 2 / 2S / 4 / 4S Human IC1H1-A2S PMS1-W2S
/PMS1-R2S
Stratagene (Agilent) Mx3000P, Mx3005P, Mx4000, AriaMx Human IC1H1-A2S PMS1-LR2S
Techne Quantica, PrimeQ Human IC1H1-A2S PMS1-F2S

対応したキット(#IC1H1-F2S)を用いた場合でも,Fast Modeでの使用には適していません。



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ご注文方法

ご注文の際には専用注文書に必要事項をご記入の上,販売店担当者にお渡し下さい。
詳細は,当社受託・特注品業務担当(TEL:03-5684-1645,FAX:03-5684-6539,e-mail:jutaku@funakoshi.co.jp)までお問い合わせ下さい。



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価格

[在庫・価格 :2020年06月04日 16時51分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
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Human Immune Checkpoints SignArray(96x2) type A
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ヒト免疫チェックポイント関連遺伝子84種の発現をqPCRで解析するアレイ。解析用ソフトをメーカーWebから無料でダウンロードできる(詳細は製品紹介ページをご覧下さい)。お手持ちのqPCR装置に適合するANY社qPCRマスターミックスを別途お求め下さい。
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Human Immune Checkpoints SignArray(96x2) type A

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  • 商品コード:IC1H2-A2S
  • メーカー:ANY
  • 包装:1kit
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  • 商品コード:IC1H1-F2S
  • メーカー:ANY
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  • 商品コード:IC1H1-R2S
  • メーカー:ANY
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  • 商品コード:IC1H2-R2S
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■Perfect Master Mix SYBR Green

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Perfect Master Mix SYBR Green x2 for SignArrays 96 system
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Perfect Master Mix SYBR Green x2 for SignArrays 96 system

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  • 商品コード:PMS1-W2S
  • メーカー:ANY
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  • 商品コード:PMS1-R2S
  • メーカー:ANY
  • 包装:1kit
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  • 商品コード:PMS1-LR2S
  • メーカー:ANY
  • 包装:1kit
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  • メーカー:ANY
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  • メーカー:ANY
  • 包装:1kit
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  • メーカー:ANY
  • 包装:1kit
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  • メーカー:ANY
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