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細胞のリプログラミングや疾患マーカーの研究に有用なエクソソーム ATCC®Exosomes(エクソソーム)

掲載日情報:2020/11/19 現在Webページ番号:68662

ATCC®では,十分に認証された細胞株とhTERT不死化間葉系幹細胞に由来するエクソソーム(Exosomes)を提供しています。これらの細胞外小胞は,エクソソームの組成,エピジェネティックな細胞のリプログラミング,および疾患マーカーの研究などに有用です。

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ATCC®のエクソソーム(Exosomes)への取り組みについて

エクソソームは,細胞内ナノ粒子(粒径50~200 nm)であり,多細胞体と細胞膜の融合により細胞から放出されます。エクソソームは現在,がんを含む多くの疾患の診断ツールとして期待されています。エクソソームは,DNA,RNA,およびタンパク質の形状での安定した非細胞運搬体であり,液体生検によるがんの早期発見のための候補として有望視されています。
腫瘍エクソソームは,腫瘍細胞の成長,血管新生,転移,および免疫系の抑制の刺激にも関連しています。しかし,エクソソームの一貫した集団を分離することは困難な場合があり,研究および診断用のリファレンススタンダードとして使用するに当たり,特性が十分に解明されたエクソソームを要します。そこで,ATCC®は,接線流ろ過法を新たに開発し,細胞培養液から大量の純粋で無菌のエクソソームを分離に成功しました。
PC3(ATCC® CRL-1435™),LNCaP(ATCC® CRL-1740™)前立腺細胞,HCT116(ATCC®CCL-247™)結腸直腸細胞,MDA-MB-231(ATCC® HTB-26™)乳房細胞,A549(ATCC® CCL-185™)肺細胞,およびU87-MG(ATCC® HTB-14™)膠芽腫細胞など,一般的ながん型を示すがん細胞株からエクソソームを分離し,特性解析しました。

接線流ろ過法

エキソソームの分離法
(接線流ろ過法, TFF:Tangential Flow Filtration system)

  1. 細胞培養から大スケールの馴化培地を回収する。
  2. 培地を遠心分離し,死細胞/デブリを除去する(前洗浄)。
  3. 清澄化した培地を,接線流ろ過システム(TFF)を使用してろ過,洗浄,濃縮する。
  4. 保持された画分には精製エキソソームが含まれており,下流の特性評価および分析に用いられる。
ATCC®では,さらにこれらのを定義および特徴付けるために,厳格な品質管理アプローチを用いてエクソソームを解析した結果,1×1010個/ml以上の収量と,平均2mg/mlのタンパク質当量が得られ,ウエスタンブロッティングによりテトラスパニンを含む多くのエクソソームタンパク質の発現を実証しました。分離したエクソソームは,ナノ粒子追跡分析(NTA)により平均粒径約102 nmでした(→NTA解析)。異なる腫瘍細胞株からのエクソソームのウエスタンブロッティングの結果から,CD63,CD81,CD9,フロチリン-1,TSG101タンパク質の異なるタンパク質マーカーのユニークな発現プロファイルが得られました(→ウエスタンブロッティングによる解析)。また,細胞取り込み,足場非依存性増殖アッセイ,および血管新生アッセイを通じてこれらのエクソソームの機能を示しています。 また,これらの精製エクソソーム由来のRNAには,バイオマーカー研究に役立つ可能性がある低分子RNA(20~200 nt)が存在しています(→RNAサイズ分布)。分離されたエクソソームは,高い収量と品質を備え,また機能的であるため,がん研究および診断開発の分野におけるリファレンススタンダード/コントロールとしても有用です。

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製品ラインナップ

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品名 メーカー ATCC® No. 包装 価格 在庫
A549 Exosomes; Lung Carcinoma; Human (Homo sapiens) ACC CCL-185-EXM™
HCT-116 Exosomes; Colorectal Carcinoma (Homo sapiens) ACC CCL-247-EXM™
hTERT Mesenchymal; Stem Cell Exosomes; Human (Homo sapiens) ACC SCRC-4000-EXM™
LNCap Exosomes ACC CRL-1740-EXM™
PC-3 Exosomes ACC CRL-1435-EXM™

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特長

  • がん研究および液体生検開発において標準試料として最適です。
  • 接線流ろ過法により高純度を確保し,ナノ粒子追跡分析による一貫した粒度分布(50~200 nm)を検証済みです。
  • エキソソームのタンパク質マーカーの確認済みです。
  • 機能性のパフォーマンスのデータを提供しています。
  • 大ロットのご提供が可能です。
  • 細胞株の起源による,ロット間のばらつきがほとんどありません。

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使用例

様々ながん細胞株から精製したエクソソームのウエスタンブロッティングによる解析

精製エクソソーム(タンパク質10μg相当)をウエスタンブロットにより解析した。様々ながん細胞株(PC-3, HCT116, MDA-MB-231, A549, U87 MG, LNCap)から精製したエクソソームは,異なるマーカータンパク質を発現していた。






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様々ながん細胞株から精製したエクソソームのNTA解析

細胞名 エクソソーム濃度(個/ml) エクソソーム平均粒径
PC-3 1.4×1011 140 nm
HCT 116 1.3×1010 71 nm
MDA-MB-231 5.9×1010 122 nm
A549 4×1010 140 nm
U87-MG 5×1010 122 nm
LNCaP 4×1010 95 nm

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がん細胞由来エクソソームのtotal RNAのサイズ分布

がん細胞由来エクソソームのtotal RNAのサイズ分布

がん細胞由来エクソソームのtotal RNAのサイズ分布

Agilent Bioanalyzer RNA 6000 Pico Kit™を用いて各がん細胞(PC-3, MDA-MB-231, HCT116)由来のエクソソームに含まれるRNAを解析した。
ほとんどのエクソソームはsmall RNA(20~200 nt)を含んでいた。また,PC-3およびMDA-MB-231は,少量のrRNA(1386 ntおよび3754 nt付近のピーク)も含んでいた。

Agilent is a trademark of Agilent technologies, Inc.

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ヒト初代肺線維芽細胞の足場非依存的な成長アッセイ

ヒト初代肺線維芽細胞(LF, Lung fibroblasts)(ATCC® PCS-201-013™)に,各がん細胞株(MDA-MB-231, PC-3, HCT116)およびLFから精製したエクソソームを等濃度(タンパク質各100μg/ml相当)で7日間処理後,細胞を回収して軟寒天コロニー形成アッセイを行った。細胞を21時間インキュベートし,一晩クリスタルバイオレットで染色した。細胞コロニーは,位相差顕微鏡を用いて6-well培養プレートの4 fields/wellをカウントした。

ヒト初代肺線維芽細胞の足場非依存的な成長アッセイ

(A) クリスタルバイオレット染色した細胞

スケールバー:400μm





ヒト初代肺線維芽細胞の足場非依存的な成長アッセイ

(B)コロニー形成数

LF由来のエキソソームに対するがん細胞株由来のエキソソームの軟寒天コロニー形成能力を分析するために,独立t検定(unpaired t-test)を実施し,それぞれのp値を算出した結果, MDA-MB-231およびPC-3は***p<0.0006であり, HCT116は*** p<0.0003といずれもがんエクソソームの顕著な細胞形質転換能力の指標となるp<0.010の数値が得られた

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in vitro 血管新生アッセイ

100 μg/ml のタンパク質を含む,各細胞株由来エクソソームで処理した細胞を,Angio-Ready™Angiogenesis Assay System (ATCC® ACS-2001-2™) を用いて7日間培養し,血管新生を蛍光顕微鏡下で観察した。

in vitro 血管新生アッセイ

(A) MSC由来エクソソーム(ATCC® SCRC-4000-EXM™)で処理した細胞
(B) iPS細胞由来エクソソームで処理した細胞
(C) A549細胞由来エクソソーム(ATCC® CCL-185-EXM™)で処理した細胞
(D) 未処理の細胞
(E) VEGF (5 ng/ml) で処理した細胞(ポジティブコントロール)


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関連製品

細胞株名または品名をクリックすると製品の詳細を,商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

細胞株

細胞株名 メーカー ATCC® No. 包装 価格 在庫
A-549 ACC CCL-185™
HCT 116 ACC CCL-247™
LNCaP ACC CRL-1740™
MDA-MB-231 ACC HTB-26™
PC-3 ACC CRL-1435™
Primary Lung Fibroblasts ACC PCS-201-013™
U-87 MG ACC HTB-14™

血管新生アッセイ用キット

品名 メーカー ATCC® No. 包装 価格 在庫
Angio-Ready Angiogenesis Assay ACC ACS-2001-2™

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ポスターダウンロード

下の画像をクリックすると,ATCC®製品由来エクソソームを使用したがん研究についてのポスターをダウンロードできます。

Siddhartha Paul, et, al., Development and characterization of cancer cell line exosomes as reference standards in cancer research. Poster presented at: AACR Annual Meeting, 2019, March 29~Apr 3, Atlanta, Georgia.





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ご注文方法

ご注文は専用の分譲依頼書またはオンラインオーダーフォームをご利用下さい。

ATCC®製品は,ご所属の研究機関・企業でATCC Material Transfer Agreement(MTA)にご同意いただいた上で,ご所属部門でユーザー登録書(New Account Application)を提出いただいたお客様が分譲のご依頼・ご購入いただくことができます。
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© 2020 American Type Culture Collection. The ATCC trademark and trade name, and any other trademarks listed in this publication are trademarks owned by the American Type Culture Collection unless indicated otherwise.

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A549 Exosomes; Lung Carcinoma; Human (Homo sapiens)
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A549 Exosomes; Lung Carcinoma; Human (Homo sapiens)

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