生細胞のcGMP検出用蛍光バイオセンサー Green GENle cGMP Assay Kit
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：68590
GENIeセンサーは、cGMP (cyclic GMP)濃度の増加に対応して蛍光強度が減衰する蛍光タンパク質を応用した蛍光バイオセンサーです。この蛍光バイオセンサーは、蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡による画像解析システムを用いて、生細胞におけるcGMPの動的挙動の継時測定、局在性の観察およびマルチプレックスアッセイを簡便に行うことができます。また、PDE(phosphodiesterase）阻害物質の選択性の確認にも有用です。
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Green GENle cGMP sensorをHEK293細胞に導入した。SNP（Sodium Nitroprusside ）の添加によるcGMPの変化が、緑色蛍光により示される。 | 阻害物質添加前（左）および添加後（右）のHEK293T細胞 |
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cGMPとPDE(Phosphodiesterase）阻害物質の選択性の確認
cGMPは、光伝達、平滑筋弛緩およびシナプス可塑性を含む多くの細胞プロセスにおける重要な二次メッセンジャーです。GENIeは、生細胞のcGMPシグナリングを検出するようにデザインされた蛍光タンパク質遺伝子を用いた蛍光アッセイです。このアッセイは、PDE阻害物質の選択性の決定にも使用できます（下図参照）。 GENIeと異なる蛍光色のセンサーと併用することにより、複数のシグナルの同時測定することができます。蛍光はcGMPレベルの増加に対応して減少し、蛍光顕微鏡および自動蛍光プレートリーダーで容易に検出することができます。
※ 下図のcGMP ProductionとPDE Inhibitionのそれぞれの部分をクリックすると、使用例をご覧いただけます
※ 下表中のキット名をクリックすると製品の詳細、商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。
| キット名 | cADDis cAMP assay | GENle cGMP assay | |
|---|---|---|---|
| 商品コード | U0200G | D0800G | |
| 阻害物質名 | IBMX (非選択的PDE阻害物質)の効果 IBMXの添加により、cAMPとcGMPの濃度はともに増加する。 |
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| PDE阻害物質の選択性の同定 cADDisとGENle assayの測定結果を比較することにより、PDE阻害物質の選択性を同定することができる。 |
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特長
- cGMPの生成およびPDEの阻害機構の研究に最適です。
- 生細胞において、継時的な応答を測定します。
- BacMamベクターを用いて初代培養細胞およびiPSCに効率的に導入することができます。
- 蛍光プレートリーダーまたはイメージングシステムを用いてmNeon greenの蛍光の変化をモニターします。
- 測定波長：励起 506 nm／蛍光 517 nm
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キット内容
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※ 測定には蛍光プレートリーダーまたはイメージングアナライザーが必要です。
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使用例
Bright green fluorescent sensor for cGMP
Green GENle cGMPは、cGMP濃度の増加に対してmNEonGreenの蛍光強度が減少する。
GENle cGMP sensorの用量依存的蛍光強度および変化率の測定
BacMam vectorに挿入されたGENleは、特定の細胞型に対して滴定により最適化することができる。この例では、HEK293T細胞に異なる用量のGENleを導入し、sGC BacMam 2μlとSNP (Sodium Nitroprusside) 30μMにより刺激し、生成したcGMPの蛍光強度およびその変化率を測定した（n=10 wells per condition）。
SNPの刺激によるcGMP生成の測定
BacMam vector（sGC BacMam 2μlとGENle 25μl）をHEK293T細胞に導入し、SNPにより刺激した後に96well plateを用いてcGNPの生成を蛍光強度により測定した（使用機器：Biotek Synergy MX plate reader）。
HEK293T細胞におけるcAMP（赤色）とcGMP（緑色）の同時測定
HEK293T細胞にcADDis cAMP BacMamとGreen GENle cGMPのそれぞれのプラスミドを同時に導入し、300μMのNO-sensitive guanylyl cyclase Sodium Nitroprusside(SNP)（左）で刺激し、また1μMのIsoproterenol（右）でB2ARを刺激し、24時間後にそれぞれの蛍光強度を蛍光プレートリーダーで測定した。SNPによる刺激した場合は、cGMPの濃度は継時的に増加するが、cAMPはほとんど増加しなかった。一方、Isoproterenolで刺激した場合では、cGMP濃度はほとんど変化しなかったが、cAMP濃度は添加直後に顕著に増加することがわかる。
GENleを用いたPDE阻害物質の検出
PDE阻害物質のSildenafilは、GENleの蛍光を増加させる。このことは、cGMPの分解が阻害された際にcGMP濃度がより速く増加することを示している。HEK293T細胞に25μlのGENleを導入後、内因性sGCを30μMのSNPの添加によって活性化した（n=5 wells per condition）。
GENleとcADDisセンサーの比較によるPDE阻害物質の選択性の決定
- IBMX：non-selective inhibitor
- Sildenafil：selective inhibitor of cGMP-specific PDE5
- Rolipram：selective inhibitor of cAMP-specific PDE4
- (n=4 per condition)
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操作方法概略
- 細胞を播種する。
- BacMam（ウイルスベクター）と添付のSodium butyrateを培地に混ぜて細胞に添加し、室温で30分間インキュベートする。
- 通常の細胞培養条件下で24時間培養する。
- 培地をDPBSに交換する。
- 室温下で20～30分間プレートを静置する。
- SNPまたは他の酸化窒素ドナーを添加する。
- 蛍光プレートリーダーまたは蛍光顕微鏡で継時的に測定および観察を行う。
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関連製品
※商品コードをクリックすると価格表を直接ご覧いただけます。
| Target factor | 標的経路 | プロモーター | 細胞種 | 色 | 蛍光シグナル | 測定方法 | 商品コード | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Plate | Imaging | |||||||
| cAMP | Gs | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | U0200G |
| Downward | ● | ● | D0200G | |||||
| Red | Upward | ● | ● | U0200R | ||||
| Non-neuronal / primary-cilia | Green | Downward | ● | ● | D0201G | |||
| Synapsin* | Neuron / whole cell | Green | Upward | － | ● | U0202G | ||
| Downward | － | ● | D0202G | |||||
| cAMP | Gi | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | X0200G |
| DAG | Gq | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | U0300G |
| Downward | ● | ● | D0300G | |||||
| Red | Upward | ● | ● | U0300R | ||||
| Downward | ● | ● | D0300R | |||||
| PIP2 | Gq | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | D0400G |
| Red | ● | ● | D0400R | |||||
| Ca2+ | Gq | CMV | Non-neuronal / whole cell | Red | Upward | ● | ● | U0600R |
| Voltage | - | CMV | Non-neuronal / whole cell | Green | Upward | ● | ● | U0700G |
| Synapsin* | Neuron / whole cell | － | ● | U0701G | ||||
| Cellular stress | Endoplasmic Reticulum (ER) and ER Unfolded Protein Response | CMV | HEK293 cells (Adherent cells and iPSC-derived lines) | Green Upword Cell Stress Sensor | Upward | ● | ● | U0900G |
| Green Upword Cell Stress Sensor with constitutive red fluorescent protein for ratiometric measurement. | ● | ● | U0901G | |||||
＊Synapsinプロモーターを用いた蛍光バイオセンサーは、神経細胞に特異的に感染して発現されますが、発現量が少ないために一般の蛍光プレートリーダーによる測定は困難でありお勧めしません。神経細胞で蛍光プレートリーダーを用いて解析を行う必要がある場合には、高発現が可能なCMVプロモーターの製品をご使用下さい。ただし、CMVプロモーターの蛍光バイオセンサーは神経細胞に対する特異性がないために、同じ神経系を構成するグリア細胞においても発現することにご留意下さい。
| 蛍光色素の種類 | 励起波長（nm） | 測定波長（nm） |
|---|---|---|
| Green | 450～490 | 510～550 | Red | 550～590 | 600～700 |
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価格
[在庫・価格 ：2025年04月26日 00時00分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
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Green cGENIE (cGMP) assay(10mL) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Green cGENIE (cGMP) assay(30mL) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Green cGENIE (cGMP) assay(60mL) |
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本製品は取扱中止になりました | 0 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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[在庫・価格 ：2025年04月26日 00時00分現在]
Green cGENIE (cGMP) assay(10mL)
文献数： 0
- 商品コード：D0800G
- メーカー：MOM
- 包装：1kit
- 価格：¥231,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 | 。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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Green cGENIE (cGMP) assay(30mL)
文献数： 0
- 商品コード：D0800G
- メーカー：MOM
- 包装：1kit
- 価格：¥462,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 | 。 |
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| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
| 掲載カタログ |
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