ミトコンドリア内膜の完全性と脱分極を測定するキット Cayman社 Mitochondrial PT Pore Assay Kit

アポトーシスや代謝ストレスなどによるミトコンドリア内膜の完全性の損失（開口）と膜電位の変化（⊿ψm）の両方を、フローサイトメーターまたは蛍光顕微鏡を用いて測定するキットです。

※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

ネガティブコントロール（左）、FCCP（中央）またはCalcein quenching control（右）で処理したTHP-1細胞
ネガティブコントロール、またはFCCP、Calcein quenching controlにより細胞を処理すると、それぞれ右上部、右下部および左上部において、それぞれ細胞集団を生じる。膜の完全性が喪失されると、TMRE（tetramethylrhodamine ethyl ester）およびCalceinの蛍光の両方が減少し、その結果、左下部に細胞集団が生じる。

ネガティブコントロール（左）、FCCP（中央）またはCalcein quenching control（右）で処理したH9C2細胞の蛍光顕微鏡像
mPTP開口部で膜の完全性がすべて損失されると、TMREおよびCalceinの両方の蛍光が減少する。mPTPの開口は、Cyclophilin A（別売品、#12088）に対する感受性に基づく。核は、Cell-Based Assay Hoechst Dye（別売品、#600332）で染色した。
（画像解析：Cytation 5 Cell Imagingマルチモードリーダー（BioTek Instruments Inc.））

本キットは、Petronilliらにより開発された、Calceinを使用して細胞全体を染色し、次いで塩化コバルトで処理してミトコンドリアマトリックスの外側でCalceinの蛍光を消光させるCalcein/cobalt クエンチング技術と、膜電位差に基づくTMRE（tetramethylrhodamine ethyl ester）色素を併用することにより、ミトコンドリア内膜の完全性と膜電位差の両方の測定します。

ミトコンドリア内膜の完全性が維持されている場合、コバルトイオンはミトコンドリア内膜を通過できないため、ミトコンドリアのマトリックスにおいてCalceinの緑色蛍光が観察されます。ミトコンドリア内膜が損なわれると、コバルトイオンが膜を通過しCalceinの蛍光が消光するため、ミトコンドリアのマトリックスにおいて蛍光は観察されなくなります。TMREは、ミトコンドリアの膜電位が正常の場合にはミトコンドリアのマトリックス内に蓄積する細胞浸透性の蛍光色素で、ミトコンドリア膜の脱分極が起こるとミトコンドリア内のTMRE色素の赤色蛍光も消失します。

※ 測定にはフローサイトメーターまたは蛍光顕微鏡が必要です。それぞれの測定条件については、下表をご参照下さい。