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プラスミドが傷つきにくいコンピテントセル DynaCompetent Cells LowInSeq

掲載日情報:2020/10/16 現在Webページ番号:68230

ゲノム中のDNA型転移因子(Insertion Sequence Element, IS)の活性を低下させた大腸菌コンピテントセルです。遺伝子クローニングやプラスミド調製に有用です。
本製品は株式会社バイオパレットの特許技術である“切らないゲノム編集®” Target-AID®によって開発されました。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


プラスミドの大腸菌への導入・増幅時に実はこんな問題が起きています


Problem-in-Ecoli

そこでこちら...
DynaCompetent Cells LowInSeq
本製品はDH5αを元株として,大腸菌ゲノム中のISのうち,IS2,IS5,IS10,ISEc63(類似配列)のトランスポザーゼ翻訳領域中にTarget-AID®を用いて終止コドンを導入し,ISの活性を低下させた*1 大腸菌コンピテントセルです。

*1 ISの活性は低下しているものの,ISが転移しないことを保証するものではありません。

LowInSeq-Structure

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プラスミドへのIS挿入が減少

IS-insertion-frequency

プラスミドに対するIS挿入頻度の低下の確認
本製品および大腸菌DH5α株をアンピシリン耐性プラスミド(30 kb, pUC Ori)で形質転換し,7回の継代培養を行った。
1, 3, 7回目の継代培養時にプラスミドを精製し,HiSeqでの次世代シークエンシングを行い,プラスミドのうちIS*2の挿入されたものの概算比率を推定した*3, 4
DH5α株に対して本製品ではプラスミドへのISの挿入が抑制された。
*2 IS:IS1, IS2, IS3, IS4, IS5, IS10, IS30, ISEc5, IS609, ISEc63の合計数。
*3 DH5α株は7回継代培養時点で計算上100%を越えており,1つのプラスミドに2つ以上のISが挿入されたことが示唆される。
*4 別途,DH5α株に同プラスミドを挿入し,7回の継代培養後9クローンを単離し,サンガーシークエンシングを行ったところ,すべてのクローンにISEc63類似配列が挿入されており,プラスミドへのIS挿入率の高さが裏付けられた。


IS-insertion-Band-Pattern

上記のプラスミドをBamHⅠで消化し,アガロースゲル電気泳動を行った。
本プラスミドのBamHⅠサイトは2つであり,本来2本のバンドが生じるが,継代回数を重ねることによりDH5α株ではバンドパターンに変化が確認された。プラスミドへのISの挿入が示唆される。
一方,本製品で継代したプラスミドでは,バンドパターンの変化が抑制されていた。


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仕様

  • 形質転換効率:>1 × 108 CFU/μg(pUC19)
  • 10×1 ml SOC medium添付

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価格

[在庫・価格 :2020年11月30日 08時51分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
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  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
DynaCompetent Cells LowInSeq
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説明文
プラスミドが傷つきにくいクローニング用コンピテントセル。ゲノム編集によりDNA型転移因子(Insertion Sequence Element)の活性を低下させている。
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ

製品記事 ダイナコンピテントセル(DynaCompetent Cells)選択ガイド
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[在庫・価格 :2020年11月30日 08時51分現在]

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DynaCompetent Cells LowInSeq

文献数:0

説明文 プラスミドが傷つきにくいクローニング用コンピテントセル。ゲノム編集によりDNA型転移因子(Insertion Sequence Element)の活性を低下させている。
法規制等
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掲載カタログ

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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