微小骨格筋組織の形成、三次元培養に 微小骨格筋組織／神経細胞培養デバイス　OMEGA^MP / OMEGA^NMJ

OMEGA^MP製品外観

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製品ラインナップ

品名	☞ OMEGAMP	☞ OMEGANMJ
適用	微小骨格筋三次元培養デバイス	神経筋接合デバイス
製品概要	筋原性前駆細胞などから、チャンバー内の2本の柱（ピラー）間に三次元構造を持つ微小骨格筋組織の形成が可能です。	神経細胞培養用チャンバーと筋細胞培養用チャンバーがマイクロ流路で接続された構造を持ち、神経筋接合部の形成が可能です。

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OMEGA^MP

長期培養	多用途	フォーマットの選択が可能
迅速に着手できる	培養に直接アクセス	優れたコストパフォーマンス

特長

• 短期間で細胞がプレート表面から剥離しやすい単層培養と比較して、三次元構造の形成により、安定して長期間培養、骨格筋組織を維持することができます。
• 成熟した微小骨格筋組織の収縮運動の観察が可能です。
• 初代培養細胞、iPS細胞由来、株化細胞由来の筋原性前駆細胞を培養することができます。
• オープントップの構造で、簡単に培地の交換ができ、また筋組織の電気刺激の実験などが可能です。
• 直径約2 cmで、本デバイスが収められる容器内（12ウェルプレートなど）にセットして使用します。
• シリコーン樹脂（PDMS）製です。

OMEGAMPの外観		OMEGAMPの構造図

製品の種類

品名	OMEGAMP	OMEGA96-MP
商品コード	eN-omp-001	eN-o96mp-001
製品外観	🔍	🔍
最大チャンバー容量	40 μl	280 μl
播種量	25～30 μl
チャンバー表面積	約0.25 cm2
ピラーの高さ	2.7 mm
ピラーの幅	1 mm
チャンバーピッチ	9 mm
PDMS底面の厚さ	約200 μm
本体サイズ	直径：21.25 mm（円形）	外径：127.7 × 85.4 × 14.2（w/o lid） mm
チャンバー数	2／Device	96チャンバー
包装数	4枚入り	1 plate

キット内容

• OMEGA^MPデバイス本体 ×4
• 12 well プレート ×1

OMEGA^MPを用いた骨格筋微小組織の培養例

操作例

A. デバイスの準備とコーティング

1. 無菌条件下で、滅菌したはさみなどでOMEGA^MPが入ったバッグを切る。
2. 滅菌したピンセットなどでデバイスをバッグから取り出す。
3. 12ウェルプレートのウェル（またはOMEGA^MPがちょうど入る容器）に、デバイス本体をセットする。
4. OMEGA^MPを入れたウェルに、5%でPBSに溶解したPluronic F-127（コーティング溶液の一例）を2 mlずつ加える。
5. OMEGA^MPを収めたマイクロプレートをパラフィルムでシールし、4℃で12時間以上インキュベートする。

B. 筋原性前駆細胞の播種

6. あらかじめ冷却したピペットチップを用い、氷上でハイドロゲルを準備する。以降、5.で冷却したOMEGA^MP本体も冷却状態を維持するため氷上で取り扱う。
7. トロンビンを含まないハイドロゲルを氷上に準備しておく（各デバイスあたり100 μl～、1チャンバーあたり25～30 μl使用）。
8. 用いる細胞を、7.0×10⁶～10×10⁶ cells/mlになるようにペレットの形で準備する。例えば、1チャンバーあたり10×10⁶ cells/mlの細胞懸濁液を30 μl添加する場合、細胞数は2チャンバーで6.0×10⁵ cellsとなる。試料は氷上で取り扱う。
9. 調製した細胞ペレットに1デバイス（2チャンバー）あたり50 μlの冷却したハイドロゲルを加え、各細胞をよく混合する。
10. OMEGA^MPの各チャンバーからコーティング溶液を取り除き、冷PBSで一度washする。デバイス内にPBSが残らないようにする。
11. トロンビン（0.2 U/mg of fibrinogen）を細胞とハイドロゲルの混合物に加え、すぐに冷却したピペットチップによるピペッティングで混合する。
12. 続けて25～30 μlの混合物をOMEGA^MPの各チャンバーに加える。チャンバー内でハイドロゲル溶液が水平であることを確認し、またチャンバー内のピラー（柱）の高さより溶液の高さが低くなるように調整する。
13. 37℃で5～10分間インキュベートし、ハイドロゲルをゲル化させる。その間にMyoblast Seeding Media（製品データシート参照）を調製する。
14. OMEGA^MPデバイスが完全に培地に沈む形で各チャンバーに2 mlのMyoblast Seeding Mediaを加える。
15. 37℃のインキュベーターで16～24時間培養する。

C. 分化と培養の維持

16. 16～24時間経過後、チャンバーの壁面に培養ゲルが接触していないことを確認する。接触している場合は、ピペットチップ等で慎重に引き離す。
17. 微小骨格筋組織が形成されてきたら、培地を除去し、PBSで一度washする。新たに調製したMyoblast Differentiation Media（製品データシート参照）を2 ml添加する。
18. 培養継続中は、2日毎に半量のMyoblast Differentiation Media（1 ml）を交換する。

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OMEGA^96-MP

OMEGA^96-MPの外観および構造図

OMEGA96-MPの外観		OMEGA96-MPの構造図

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OMEGA^NMJ

長期培養	生理学的な関連性	フォーマットの選択が可能
迅速に着手できる	培養に直接アクセス	優れたコストパフォーマンス

特長

• マイクロ流路を介した神経細胞培養用チャンバーと骨格筋培養用チャンバーの接続により、各チャンバー内の神経細胞と筋組織の共培養が可能です。
• マイクロ流路内に軸索は侵入できますが、細胞体は侵入できないため、神経細胞と筋組織が物理的に離れた状態で共培養が可能です。
• 運動ニューロンから伸長した軸索と微小骨格筋組織による神経筋接合部が形成でき、より生体内に近い条件で実験できます。
• マイクロ流路を介して接続された両チャンバー内の培養液量を不均一にすることで、片側のチャンバーを流体的に隔離することができます。

製品の種類

品名	OMEGANMJ Starter Kit	OMEGANMJ Refill Kit	OMEGANMJ Refill Kit Plus
商品コード	eN-onmj-001	eN-onmj-002	eN-onmj-003
製品外観	🔍
神経細胞用チャンバー使用容量	35～200 μl
筋細胞チャンバー容量	40～200 μl
神経細胞用チャンバー表面積	約0.35 cm2
骨格筋細胞播種用チャンバー表面積	約0.25 cm2
ピラーの高さ	2.7 mm
ピラーの平均幅	1 mm
マイクロチャンネル幅	10 μm
マイクロチャンネル長さ	約640 μm
本体サイズ	直径：22 mm（円形）
PDMS底面の厚さ	約200 μm
チャンバー数	2種（骨格筋細胞用・神経細胞用） × 2／Device
包装数	3枚入り

キット内容

　

品名		OMEGANMJ Starter Kit	OMEGANMJ Refill Kit	OMEGANMJ Refill Kit Plus
商品コード		eN-onmj-001	eN-onmj-002	eN-onmj-003
キット内容	OMEGANMJデバイス本体 ×3	●	●	●
	35 mm sterile culture dish ×3	●	●	●
	Evaporation minimizer ×3	●	−	●
	Microscopy adapter×1	●	−	−

適用

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