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最大5ターゲットのマルチプレックスRT-qPCRを高感度に行えます UltraPlex 1-Step ToughMix

掲載日情報:2025/02/28 現在Webページ番号:65023

PCR阻害物質を含むRNA試料から、TaqManなどのプローブ法での逆転写とqPCRを1チューブ、ワンステップで行える4×のマスターミックスです。PCR阻害物質に耐性があり、また最大5ターゲットのマルチプレックスRT-qPCRに対応しています。
SYBR Greenを用いたRT-qPCR用キットについてはこちらをご覧下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


RT-qPCR用ToughMixシリーズ一覧

Quantabio社のToughMixシリーズは、PCR阻害物質に耐性があるPCR/qPCRおよびRT-qPCR用マスターミックス製品です。qPCR用マスターミックスについてはこちらをご覧下さい。
品名をクリックすると詳細記事をご覧いただけます。

品名 qScript XLT 1-Step
RT-qPCR ToughMix
qScript 1-Step
Virus ToughMix
UltraPlex 1-Step
ToughMix
eQo 1-Step
ToughMix
特長 使用実績多数 少量RNAから検出可能 高感度・最大5ターゲットの
マルチプレックス解析
室温保存可能・
従来品からさらに改良
マスターミックス濃度 再水和後:4×
(凍結乾燥ビーズ)
逆転写のホットスタート × ○(さらに改良)
PCRのホットスタート
PCR阻害物質への耐性 ○(さらに改良)
マルチプレックス 最大4ターゲット 最大4ターゲット 最大5ターゲット 最大5ターゲット
感度 +++ ++++ ++++ +++++
精製RNAからの検出
粗精製試料からの検出 ×

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特長

  • 4×のマスターミックスで、RNAテンプレートとプローブ以外のすべての試薬が含まれています。
  • cDNA合成とPCR増幅を同一チューブで行うため、インキュベーション間でチューブを開閉する必要はありません。
  • 動植物組織、臨床試料、環境試料、食品などに由来するPCR阻害物質を含むRNA試料からのRT-qPCRに最適です。
  • 1 pgのRNAからでも検出が可能で、RNAウイルスや低存在量の標的RNAの高感度な定量に最適です。
  • 最大5ターゲットのマルチプレックスRT-qPCRに対応しています。
  • マスターミックスに含まれている逆転写酵素qScript XLT reverse transcriptaseは、RNase H活性を低下させ、高温での活性と安定性を向上させたM-MLV reverse transcriptaseです。
  • リファレンス色素(ROX)を含む製品もあります。

マスターミックスの組成

4× reaction buffer containing dATP, dCTP, dGTP, dTTP, magnesium, qScript XLT reverse transcriptase, RNase inhibitor protein, hot-start DNA polymerase, stabilizers, and ROX reference dye
リファレンス色素を含む製品のみ


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使用例

図1:未精製SARS-CoV-2試料からのウイルス遺伝子検出(3ターゲット/2チャンネル検出)

UltraPlexでの2plex Assay E N1遺伝子
UltraPlexでの2plex Assay RNaseP遺伝子
UltraPlexでの保存液のマトリックス効果の検証

スワブ試料からRNA精製を行わずにSARS-CoV-2ウイルス遺伝子を検出する手法の検証として、以下の実験を行った。
A、B: UTM swab solution(COPAN社)にSARS-CoV-2非感染者から採取したスワブを浸し、65℃加熱でウイルスを不活性化した。熱不活性化SARS-CoV-2ウイルス(ATCC® VR-1986HK™)を、この溶液で10,000 copies/μl(橙色)、2,000 copies/μl(灰色)、20 copies/μl(青色)の3種類の濃度に調製した。3種の試料それぞれを溶液でさらに2、4、10倍に希釈した(グラフの横軸は希釈度合い)。希釈した試料に対し、UltraPlex 1-Step ToughMixを用いて3ターゲット(2チャンネル)のマルチプレックスRT-qPCRを行ったところ検出できた。
A:SARS-CoV-2ウイルスE, N1遺伝子(2ターゲットのミックス)、B:ヒトRNase P遺伝子(ポジティブコントロール)

C: eSWAB (COPAN社、橙色)、UTM swab solution(COPAN社、青色)、VTM(Liofilchem社、灰色)の各社ウイルス運搬・保存溶液にスワブを浸して同様の実験を行った。2,000 copies/μlの熱不活性化SARS-CoV-2ウイルスを各溶液でそれぞれ希釈し、マルチプレックスRT-qPCRによる3ターゲット(2チャンネル)検出を行ったところ、ウイルス運搬・保存溶液によるマトリックス効果を受けずに検出できた。
C:ヒトRNase P遺伝子


図2:未精製SARS-CoV-2試料からのウイルス遺伝子検出(3ターゲット/3チャンネル検出)

UltraPlexでの3plex Assay E遺伝子
UltraPlexでの3plex Assay N1遺伝子
UltraPlexでの3plex Assay RNaseP遺伝子

図1(A、B)と同様の実験を、ウイルス運搬・保存溶液:UTM swab solution(COPAN社)、ウイルス量:10,000 copies/μl(青色)、2,000 copies/μl(橙色)、20 copies/μl(灰色)で行った。マルチプレックスRT-qPCRで3ターゲット検出を行った。
A:SARS-CoV-2ウイルスE遺伝子(FAM標識プローブ)、B:SARS-CoV-2ウイルスN1遺伝子(SUN標識プローブ)
C:ヒトRNase P遺伝子(Atto647標識プローブ、ポジティブコントロール)


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対応するリアルタイムPCR装置

品名 商品コード 対応するリアルタイムPCR装置
UltraPlex 1-Step ToughMix 95166 CFX, iCycler iQ, MyiQ, iQ5(Bio-Rad社)
LightCycler 480(Roche Diagnostics社)
Rotor-Gene Q(QIAGEN社)
AriaMx(Agilent Technologies社)
Cielo(Azure Biosystems社)
qTOWER, qTOWER iris(Analytik Jena社)
Q Instrument(Quantabio社)
UltraPlex 1-Step ToughMix, ROX 95167 Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne, StepOnePlus(Thermo Fisher Scientific社)
UltraPlex 1-Step ToughMix, Low ROX 95168 Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio(全モデル)(Thermo Fisher Scientific社)
Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000(Agilent Technologies社)
Douglas Scientific IntelliQube(LGC Biosearch Technologies社)

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価格

リファレンス色素なし

[在庫・価格 :2025年05月01日 08時55分現在]

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UltraPlex 1-Step ToughMix (100×20μL rxns)
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PCR阻害物質を含む血液や植物試料などの試料から,逆転写とPCRを1ステップで行えるRT-qPCR用マスターミックス。最大5遺伝子のマルチプレックスPCRが可能。新型コロナウイルス(SARS-CoV-2, COVID-19)等のRNAウイルスの定量にも使用可能。
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UltraPlex 1-Step ToughMix (100×20μL rxns)

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リファレンス色素ROX

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リファレンス色素Low ROX

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(テクニカルサポート 試薬担当)

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