昆虫細胞ライセートを用いた無細胞系タンパク質大容量合成キット RTS 100 Insect Disulfide & Membrane Kit
掲載日情報：2016/02/29 現在Webページ番号：64588
昆虫細胞ライセートを用いる無細胞系のタンパク質大容量合成キットです。翻訳後修飾が行われる真核生物由来タンパク質を迅速かつ高収率に合成することができます。得られたタンパク質は特性研究、機能分析または構造解析に用いることができます。
※E. coli 発現系を利用した無細胞系タンパク質大容量合成キット、機能性ジスルフィド結合形成するタンパク質合成キットや、無細胞系小麦胚芽発現システムなどもあります。
RTS 100 Insect Membrane Kitを用いたタンパク質の高レベル発現用ベクタ－：RTS X4.0 Insect Vectorは、こちらをご覧下さい。
RTS無細胞系タンパク質合成システムのシリーズ全体の製品構成については「RTS 無細胞タンパク質合成キット」をご覧下さい。
| お知らせ これまで5 PRIME社(メーカー略称：FPR)より販売しておりました無細胞系タンパク発現システム RTS （Rapid Translation System）は、2015年4月1日よりbiotechrabbit社(メーカー略称：BRG)が独占販売することになりました。商品コードの対応表は「RTS system（Rapid Translation System）に関するお知らせ」をご覧下さい。 |
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- 使用例
- 特長
- 操作フロー
- ワークフロー
- 鋳型DNAの作製
- RTS 100 Insect Disulfide Kit (BR1401401, BR1401402) のPCRによる鋳型DNAの作製フロー
- 最適コンストラクトの検討例
- RTS 100 Insect Disulfide Kit (BR1401401, BR1401402)の使用例
- キット内容
- 価格
- RTS pIX4.0 Insect Vector
使用例
RTS 100 Insect Membrane Kitを用いた翻訳後修飾タンパク質を含む発現例
6×His tag付プロテインキナーゼとカンナビノイドレセプター（CNR1）を、Penta-His HRPを用いて可視化した。14C標識アミノ酸を用いて凝固因子とOGCP（mitochondrial 2-oxoglutarate/malate carrier）を2回合成し、観察した。
左：Penta-His HRPコンジュゲートで可視化した6×Hisタグ付タンパク質
中央：14Cラベルアミノ酸により合成した凝固因子
右：14Cラベルアミノ酸により合成した細胞膜タンパク質OGCP (mitochondrial 2-oxoglutarate/malate carrier)とPenta-His HRP conjugateで可視化したCNR1(cannabinoid receptor)
14C標識アミノ酸存在下、RTS 100 Insect Membrane Kitを用いて合成した、翻訳後修飾（糖化）を伴う糖タンパク質EPO（Erythropoietin）および脱糖鎖酵素処理EPOのSDS-PAGE分析例。脱糖鎖処理を行なったEPOでは電気泳動の移動距離が増加する。
左：endoglycanase H（Endo H)処理を行なったEPO
中央：脱糖鎖酵素未処理のEPO
右：peptide N-glycosidase（PNGase F）処理を行なったEPO
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特長
| 品名 | RTS 100 Insect Disulfide Kit | RTS 100 Insect Membrane Kit | ||
|---|---|---|---|---|
| 商品コード | BR1401401 | BR1401402 | BR1401501 | BR1401502 |
| 使用回数 | 10 reactions | 96 reactions | 5×50μl | 20×50μl |
| 昆虫細胞の由来 | Spodoptera frugiperda（ヨトウガ） | |||
| 活性型タンパク質収率 | ≦20μg/ml | ≦40μg/ml | ||
| 合成時間 | 4時間 | 3.5時間 | ||
| 適合する鋳型DNA | 直鎖状DNA、プラスミドDNA | |||
| タンパク質発現機構 | 転写・翻訳結合型 | 転写→翻訳連結型 | ||
| 主な特長 |
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| 適用 | Fab抗体フラグメントおよびジスルフィドタンパク質の合成 | 翻訳後修飾を伴う真核生物タンパク質のin vitro での高収率生成 | ||
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操作フロー
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ワークフロー
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鋳型DNAの作製
| 操作手順 | 方法＆推奨製品 | 商品コード | |
|---|---|---|---|
| 最小単位配列 5'...XXXXXTAATACGACTCACTATAG... 3'* |
|
BR1400901 | |
| 鋳型DNAの構築 | プラスミドDNAの作製 |
|
BR0700201 BR0701201 Sambrook et al.** |
| PCR産物の作製 |
|
BR1402201 BR1402401 |
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| 最適コンストラクトの同定 | |||
* 赤字：Ｔ7プロモーター部分
下線部：転写開始部位
** Sambrook, J., et al., Molecular Cloning-A laboratory Manual 2nd Ed. Cold Spring Harbor. Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1989).
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RTS 100 Insect Disulfide Kit (BR1401401, BR1401402) のPCRによる鋳型DNAの作製フロー
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最適コンストラクトの検討例
A：RTS Linear Template Kit Plus（#BR0701201）を用いて表記のタグ付タンパク質を発現し小スケールのin vitro 転写反応に添加した。N末端タグはmellitinシグナルペプチドを代わりに直接合成タンパク質に添加することができる。
B：TFII変異体をRTS 100 Insect Disulfide & Membrane Kitを用いて合成し、メンブレンに転写、SDS PAGEによって分離、抗His抗体、Strep-tag抗体、化学発光基質混合液を用いて可視化した。T：総タンパク質、S：可溶性画分。
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RTS 100 Insect Disulfide Kit (BR1401401, BR1401402)の使用例
1. 活性型ジルフィド結合タンパク質の発現解析
1 + 5：anti-lysozyme Fab (L + H chain co-expression)
2 + 6：anti-lysozyme scFv
3 + 7：anti-CD4 Fab (L + H chains)
2. Micrococcus lysodeikticus 細胞溶解物懸濁液を用いたOD450の吸光度の減少による、抗リゾチーム Fab抗体のリゾチーム活性阻害作用の測定
■：抗リゾチームFab抗体添加量に対するリゾチーム活性阻害反応
○：エリスロポイエチンのコントロール反応
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キット内容
| 品名 | RTS 100 Insect Disulfide Kit | RTS 100 Insect Membrane Kit | ||
|---|---|---|---|---|
| 商品コード | BR1401401 | BR1401402 | BR1401501 | BR1401502 |
| 使用回数 | 10 reactions | 96 reactions | 5×50μl | 20×50μl |
| Insect extract | ● | ● | ||
| Reaction buffer | ● | ● | ||
| Energy mix | ● | ● | ||
| RNase-free water | ● | ● | ||
| Positive-control DNA | ● | ● | ||
| Brij-35 solution | ● | － | ||
| Microtiter reaction plate, 96well | ● | － | ||
| Silicon mat for 96 well plate | ● | － | ||
| Transcription buffer | － | ● | ||
| NTP mix | － | ● | ||
| Enzyme mix | － | ● | ||
| DyeEx 2.0 spin columns | － | ● | ||
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月19日 08時35分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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RTS 100 Insect Disulfide Kit (10reactions) |
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本製品は取扱中止になりました | 0 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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RTS 100 Insect Disulfide Kit (96reactions) |
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本製品は取扱中止になりました | 0 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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RTS 100 Insect Membrane Kit (5reactions) |
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RTS 100 Insect Membrane Kit (20reactions) |
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[在庫・価格 ：2024年04月19日 08時35分現在]
RTS 100 Insect Disulfide Kit (10reactions)
文献数： 0
- 商品コード：BR1401401
- メーカー：BRG
- 包装：1kit
- 本製品は取扱中止になりました
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
RTS 100 Insect Disulfide Kit (96reactions)
文献数： 0
- 商品コード：BR1401402
- メーカー：BRG
- 包装：1kit
- 本製品は取扱中止になりました
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
RTS 100 Insect Membrane Kit (5reactions)
文献数： 0
- 商品コード：BR1401501
- メーカー：BRG
- 包装：1kit
- 価格：¥61,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | 4℃,-80℃,凍結禁止 | 法規備考 | |||||
| 掲載カタログ |
ニュース2020年11月1日号 p.6 ニュース2019年9月1日号 p.25
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| 製品記事 |
RTS 無細胞タンパク質合成キット |
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| 関連記事 | |||||||
RTS 100 Insect Membrane Kit (20reactions)
文献数： 0
- 商品コード：BR1401502
- メーカー：BRG
- 包装：1kit
- 価格：¥213,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | -20℃,-80℃,凍結禁止 | 法規備考 | |||||
| 掲載カタログ |
ニュース2020年11月1日号 p.6 ニュース2019年9月1日号 p.25
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| 製品記事 |
RTS 無細胞タンパク質合成キット |
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| 関連記事 | |||||||
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RTS pIX4.0 Insect Vector
RTS 100 Insect Membrane Kitを用いたタンパク質の高レベル発現用ベクタ－です。T7プロモーター、3’UTR、T7ターミネーターおよび最適化された線形化部位より構成されており、効率的な翻訳の開始が行われます。
■RTS X4.0 Insect Vectorの特長
- 簡便な発現コンストラクトの調製に、全てのリーディングフレーム内のマルチクローニングサイトおよび翻訳終始コドンがあるため、簡便に発現コンストラクトの調製を行うことができます。
- T7ターミネーターに結合した最適化された3‘UTRにより、核外ヌクレアーゼによるによる分解から保護し、安定的なRNAの産生ができます。
- in vitro 転写に効果的な平滑末端線形化のため、複数の制限部位から構成されています。
- 選択マーカー：アンピシリン耐性
■RTS X4.0 Insect Vectorの価格
[在庫・価格 ：2024年04月19日 08時35分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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RTS pIX4.0 Insect Vector |
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[在庫・価格 ：2024年04月19日 08時35分現在]
RTS pIX4.0 Insect Vector
文献数： 0
- 商品コード：BR1400901
- メーカー：BRG
- 包装：25μg
- 価格：¥92,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 |
RTS 無細胞タンパク質合成キット |
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| 関連記事 | |||
追加しました。
製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。