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ミニサークル作製用製品 Minicircle DNA System

掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：4900

システムバイオサイエンス /
System Biosciences, LLC
[メーカー略称：SBI]

目的遺伝子を発現するMinicircleを作製するためのベクターと宿主E. coli株です。

※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


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Minicircleとは

Minicircle（MC）は非ウイルス性のDNAで、ΦC31を介した分子内組換えにより、元となるプラスミド（Parental Plasmid）DNAから作製されます。通常のプラスミドDNAと異なりバクテリア由来の複製開始点や抗生物質耐性遺伝子を有していません。また、メチル化やサイレンシングなどの影響を受けないため、Minicircleからの発現は長期間に渡って持続します。


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特長

  • 作製したMinicircleは、ウイルスを用いずにReady-to-useでそのままトランスフェクションに使用でき、宿主細胞のゲノムに組み込まれることもありません。
  • 作製したMinicircleは、in vivoおよびin vitroでのトランスフェクションに使用できます。
  • Minicircleによるタンパク質発現は、通常のプラスミドを用いた場合よりも、高効率かつ長期間（最大14日間）発現が持続します。
  • 元となるプラスミド（Parental Plasmid）や、Minicircleに組み込まれないバックボーン部分の混入がなく、免疫応答を引き起こす恐れはありません。
  • プロモーターやレポーター遺伝子の異なる製品を多数ラインナップしています。
  • 別売品のMC-Easy Minicircle DNA Production Kitは、Minicircleの作製および目的細胞への導入を、高品質かつ再現性高く行うのに有用な培地や試薬類をセットにした製品です。

Minicircle作製受託サービスはこちらをご覧下さい。


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使用例

in vitroでの目的遺伝子の長期間発現

Minicircle DNA Systemのin vitroでの目的遺伝子の長期間発現

1μgのミニサークルDNA（pMC.CMV-MCS-EF1-GFPSV40PolyA, #MN511A-1）をHEK293細胞にトランスフェクションしたところ、1週間以上に渡り、強力に遺伝子発現が行われた。


in vivoでの目的遺伝子の長期間発現

Minicircle DNA Systemのin vivoでの目的遺伝子の長期間発現

（A）2μgおよび4μgのミニサークルDNA（CMV-GFP-Luc）をマウス尾部から高圧で導入（Hydrodynamic法）したところ、48時間後に優れたタンパク質発現を示した。
（B）プラスミドDNAを用いて導入された遺伝子は急速に発現が失われるが、ミニサークルDNAによって導入された遺伝子は数週間持続し、強力な発現を維持する。上記画像では、40μgのミニサークルDNAをHydrodynamic法でマウスに導入した。


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操作方法概略

  1. Parental Plasmidに目的遺伝子を挿入する。
  2. 宿主E. coli ZYCY10P3S2T株にParental Plasmidを導入し、MC-Easy Minicircle DNA Production Kitに含まれるMinicircle Growth Mediumを用いて培養する。
  3. Arabinoseまたは、MC-Easy Minicircle DNA Production Kitに含まれるInduction Mediumを添加すると、E. coli株内でΦC31インテグラーゼが発現し、Minicircleが作製される。また、SecⅠエンドヌクレアーゼが発現し、Parental Plasmidおよびバックボーンが分解される。
  4. 市販のプラスミド精製キットでMinicircleを精製する。
  5. MC-Easy Minicircle DNA Production Kitに含まれるMinicircle-safe DNaseを用いて、混入したParental plasmidおよびE. coliゲノムDNAを分解する。
  6. MC-Easy Minicircle DNA Production Kitに含まれるPrecipitation bufferおよびDNA Centrifugal filter columnを用いて、酵素を除去する。
  7. MC-Easy Minicircle DNA Production Kitに含まれるMC-Fectionを用いて、Minicircleを目的細胞に導入する。
Minicircle DNA SystemによるMinicircle（MC）作製

E. coli ZYCY10P3S2T株にArabinoseを添加すると、Parental Plasmid（PP）からMinicircle（MC）が作製されていることがわかる。



Minicircleを作製するためのベクター


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Minicircle作製用ベクターおよび宿主E. coli株ご購入時のご注意

Minicircle作製用ベクターおよび宿主E. coli株（価格表に「書類」が表示されている製品）は、大学・官公庁の研究所（Academic）にご所属の方が基礎研究目的で使用される場合にのみご購入いただけます。ご注文の際は、System Biosciences社使用目的確約書に必要事項をご記入の上、販売店担当者にお渡し下さい。

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Parental Plasmid

[在庫・価格 ：2025年03月23日 00時00分現在]

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（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

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