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AChEトレーサーを用いた競合法によりcAMPを測定するキット cAMP ELISA Kit/cAMP Select ELISA Kit

掲載日情報:2017/01/16 現在Webページ番号:9001

試料中のCyclic AMP(cAMP)をアセチルコリンエステラーゼ(Acetylcholinesterase、AChE)トレーサーを用いた競合法により高感度かつ特異的に比色定量するCayman Chemical社のELISA Kitです。アセチル化試薬(無水酢酸、Acetic anhydride)が付属するキット (#581001)とアセチル化試薬が付属しないキット(#581002)、アセチル化処理不要で高感度な測定が可能なキット(#501040)があり、用途に応じてフレキシブルにお選びいただけます。


Adenosine 3',5'-cyclic monophosphate(Cyclic AMP、cAMP)とは

Adenosine 3',5'-cyclic monophosphate(Cyclic AMP、cAMP)は、細胞内シグナル伝達の中心的なセカンドメッセンジャーであり、細胞膜上のレセプターとリガンドの結合時に引き起こされる細胞内の変化を仲介するシグナル伝達経路の重要な構成要素です。cAMPは、膜結合型アデニル酸シクラーゼによりATPから合成されます。リガンドまたはホルモンが特異的Gタンパク質共役型受容体に結合すると、GTP結合タンパク質(GsまたはGi)が活性化され、アデニル酸シクラーゼを刺激または阻害します。cAMPは、リン酸化または脱リン酸化を促進することにより、さまざまな酵素または酵素カスケードを活性化または阻害します。cAMPシグナルはホスホジエステラーゼによるcAMPからAMPへの加水分解によって中和されます。



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Cyclic AMP ELISA Kitの製品ラインナップ

検量線例の画像をクリックすると拡大図を、商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

品名 Cyclic AMP ELISA Kit*1 Cyclic AMP ELISA Kit
without Acetic Anhydride*2
Cyclic AMP Select ELISA Kit
商品コード 581001 581002 501040
アセチル化試薬 アセチル化不要
フォーマット*3 96ウェルプレート(Strip/Solidプレート選択可)
サイズ*4 1プレートまたは5プレート
測定原理 競合ELISA法
測定方法 比色
測定試料 血漿、尿、培養上清、細胞抽出液、組織ホモジネート
測定波長 405~420 nm
測定時間 18時間(インキュベーション)+90~120分(呈色反応)
検量線例 Acetylated cAMP #581001 Non Acetylated cAMP #581002 cAMP Select #501040
測定範囲 0.078~10 pmol/ml 0.3~750 pmol/ml 0.09~200 pmol/ml
IC50(Mid-Point、50% B/B0 0.5 pmol/ml 15~25 pmol/ml 4~8 pmol/ml
感度(80% B/B0 0.1 pmol/ml 3 pmol/ml 0.6 pmol/ml

*1 測定範囲・IC50・感度はアセチル化処理時の値です。アセチル化処理不要のプロトコルにも対応できます。
*2 測定範囲・IC50・感度はアセチル化未処理時の値です。別途、無水酢酸を用意し、アセチル化処理を行うことで、高感度プロトコルでの測定が可能です。
*3 96ウェルプレートが分割可能なストリップタイプと、96ウェルプレートが一体型のソリッドタイプがあります。
*4 96ウェルプレート1枚と96ウェルプレート1枚分の試薬が含まれる96 tests包装と96ウェルプレート5枚と96ウェルプレート5枚分の試薬が含まれる480 tests包装があります。



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特長

  • アセチル化試薬(無水酢酸、Acetic anhydride)が付属するキット(#581001)とアセチル化試薬が付属しないキット(#581002)、アセチル化処理不要で高感度な測定が可能なキット(#501040)があり、用途に応じてフレキシブルにお選びいただけます。
  • アセチルコリンエステラーゼ(Acetylcholinesterase、AChE)標識したcAMPを用いて、競合ELISA法により定量します。
  • トレーサーであるcAMP-AChE複合体の酵素活性によりEllman試薬が黄色を呈色します(吸収極大波長:412 nm)。
  • 反応停止液を使用する必要がなく、90分~120分の適当な時間でプレートの測定を行うことができます。
  • 特異性が高く、AMPやATPなど各種ヌクレオチドに対する交差反応性が低い製品です。

交差反応性

品名 Cyclic AMP ELISA Kit Cyclic AMP ELISA Kit
without Acetic Anhydride
Cyclic AMP Select ELISA Kit
商品コード 581001 581002 501040
物質名
cGMP1.5%<0.01%
Acetylated cGMP0.69%-
Adenosine<0.01%<0.01%
AMP<0.01%<0.01%
Acetylated AMP<0.01%-
ATP<0.01%<0.01%
Acetylated Adenosine<0.01%-
Dibutyryl cAMP-<0.01%


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Cayman Chemical社アッセイキットについて

アセチルコリンエステラーゼ(Acetylcholinesterase、AChE)トレーサーのメリット

Cayman Chemical社の多くのELISAキットでは、主に酵素標識としてアセチルコリンエステラーゼ(Acetylcholinesterase、AChE)による方法が採用されています。AChEアッセイは、発色基質としてアセチルチオコリンを含むEllman試薬を使用します。この酵素反応の最終生産物である5-thio-2-nitrobenzoic acid(5-チオ-2-ニトロ安息香酸)は405~414 nmに最大吸収波長を有し黄色に発色します。AChEは、ELISA法で用いられる他の酵素に比べて以下のような長所を有しています。

  • HRP(Horse Radish Peroxidase)やAP(Alkaline Phosphatase)に比べ代謝回転速度が3倍速く、他の標識酵素に比べてカイネティック測定に適し、また高い感度が得られます。
  • AChEは安定性に優れた酵素で活性が長時間一定に保持され、アッセイ系において広範囲のダイナミックレンジが得られます。幅広いpH域(pH 5.0~10.0)で使用可能で、一般的な緩衝塩または防腐剤によって阻害されません。
  • ターンオーバー時に自己不活性化しません。

アッセイキットの感度の定義について

Cayman Chemical社アッセイキットでは、標準曲線上の80% B/B0の値を感度として定義しています。この値は信頼性が高く、再現可能なデータを提供します。

  • B0(Maximum Binding):任意の遊離分析物の非存在下で、抗体とトレーサーが最大量結合するウェルの吸光度。
  • %B/B0(%Bound/Maximum Bound):B0に対する任意の遊離分析物(試料)またはスタンダードを含むウェルの吸光度の比。
画像内容説明


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操作方法概略

cAMPとcAMP-acetylcholinesterase(AChE)conjugate(cAMP Tracer)のウサギ抗cAMP抗体の結合部位に対する競合を利用しています。

画像内容説明


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キット内容

商品コードをクリックすると、価格表をご覧いただけます。キットコンポーネントの●をクリックすると、キットコンポーネントの単品(別売品)の価格をご覧いただけます。

品名Cyclic AMP ELISA KitCyclic AMP ELISA Kit
without Acetic Anhydride
Cyclic AMP Select ELISA Kit
商品コード581001581002501040
Cyclic AMP Select ELISA antiserum-
Cyclic AMP Select AChE tracer-
Cyclic AMP Select ELISA standard-
Cyclic AMP ELISA antiserum -
Cyclic AMP AChE tracer -
Cyclic AMP ELISA standard -
Potassium hydroxide-
Acetic anhydride--
ELISA buffer concentrate
Wash buffer concentrate
Polysorbate 20
Mouse anti-rabbit IgG coated plate
96-well cover sheet
Ellman's reagent
ELISA tracer dye
ELISA antiserum dye

測定には、マイクロプレートリーダーが別途必要です。


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価格

Cyclic AMP ELISA Kitの価格

[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]

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※Solid Plateは96ウェルプレートが一体型のタイプです。 acetylcholinesterase(AChE)標識したcAMPとの競合EIAにより,比色法(412 nm)でcAMPを定量するキット。感度:3.1 pmol/ml (non-acetylated), 0.1 pmol/ml (acetylated),測定範囲:0.3-750 pmol/ml (non-acetylated), 0.078-10.0 pmol/ml (acetylated),測定試料:血漿,尿,培養上清,検出方法:呈色,測定波長:412 nm,アッセイ法:競合ELISA,アッセイ数:96 solids
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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

Gタンパク質/環状ヌクレオチド