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(糖タンパク質濃縮キット)

スピンフィルターにより簡便に糖タンパク質を抽出・濃縮するキット NuGel Glycoprotein Enrichment PBA Kit
(糖タンパク質濃縮キット)

掲載日情報:2017/02/17 現在Webページ番号:8260

様々な生体試料から,スピンフィルターフォーマットでN-/O-結合型糖鎖を含む異種糖タンパク質を簡便に抽出・濃縮するキットです。独自の技術によりポリマーをシリカにコートしたNuGelに,リガンドのフェニルボロン酸(PBA)を結合させた担体(NuGel PBA)を用いることで非特異的結合が抑制されるため,高純度の糖タンパク質の抽出・濃縮が効率的に行えます。プロテオーム解析に最適です。

NuGel 糖タンパク質のSDS-PAGE

NuGel PBAで異なる動物種の血清または血漿から抽出・濃縮した糖タンパク質のSDS-PAGE

動物種によって異なる糖タンパク質のバンドパターンが確認できる。

糖タンパク質含有率の決定

NuGel PBAからソルビトール溶液により溶出された糖タンパク質量の測定により,各試料中の糖タンパク質含有率を求めた。

試料 糖タンパク質含有率(%)
マウス血漿 33
ラット血清 44
ヒツジ血清 18
ウシ血清 40
ウシ脳ホモジネート 9

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キットの種類

品名 商品コード 使用回数 製品概要
NuGel Glycoprotein Enrichment PBA Matrix NGPBA-10 10 preps 血清または血漿50μl×10(総タンパク1~2 mg/prep)に使用可
NGPBA-50 50 preps 血清または血漿50μl×50(総タンパク1~2 mg/prep)に使用可

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NuGel PBA(担体)とは

MEMOタイトル (クリックで開閉します)

NuGelはシリカに独自のポリマーコーティングにより架橋した担体で,非特異的結合の抑制や広域なpH(pH 2~10)で安定な反応性エポキシ官能基を形成するなど,優れた特長を有しています。本製品は,このNuGelにアミノ基を介してリガンドのフェニルボロン酸(PBA)をポリエポキシ結合により固定化したNuGel PBAを担体として使用しています。レクチンが特定の糖残基に結合する一方で,PBAリガンドは生体分子の1,2-cis-diol基に結合するため,N-/O-結合型糖鎖(Glycan)を含む糖タンパク質を効果的に抽出・濃縮することができます。

商品コードをクリックすると,NuGel PBA単体の価格表がご覧いただけます。

NuGel PBA
包装 カラム容量 商品コード
5 g 10 ml NPBA-05
10 g 20 ml NPBA-10
仕様
Spacer Arm Polymerized hydrophilic carbon chain
孔径 1,000 Å
平均粒径 50μm
pH安定性 2~10
結合特異性 糖タンパク質の1,2-cis-diol基
使用方法 バッチ方式またはカラム充填方式に適応可

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特長

  • cis-diolに特異性が高く,異種糖タンパク質を効果的に抽出・濃縮できます。
  • アルブミンなどの高濃度のタンパク質から糖タンパク質を効果的に分離できます*1
  • ディスポーザブルカラムを使用します。
  • 試料:血液,血清,血漿,組織または細胞培養培地
  • 溶出液:ソルビトール溶液(pH7.5~8.5)(キットに含まれています)

*1 血清アルブミンの非グリコシル化画分の>90%を除去できます。

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キット内容

  • NuGel Glycoprotein Enrichment PBA matrix*2
  • Binding buffer
  • Wash buffer
  • Elution buffer
  • SpinX centrifuge tube filter

*2 NuGel PBA(#NPBA-05, #NPBA-10)は,マトリックス単品でもご購入いただけます。

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操作方法概略

血清50μlまたは総タンパク質1~2 mg用

  1. NuGel Glycoprotein Enrichment PBAマトリックス50 mgをスピンフィルターに添加し,スピンフィルターの壁面を指で軽く叩いて試薬を確実にフィルター内に落とす。
  2. Binding buffer 250μlをスピンフィルターに添加する。5分間ボルテックスし,10,000 rpmで3分間遠心分離する。ろ液(フロースルー)を捨てる。
  3. Binding buffer 200μlを血清50μl(または最大200μlの清浄な組織ライセート)に添加し,試料を調製する。10分間ボルテックスし,次に10,000 rpmで3分間遠心分離し,上清(フロースルー)を除去する。
  4. Wash buffer 350μlを加える。5分間ボルテックスし,10,000 rpmで2分間遠心分離する。 この手順を2回繰り返し,ビーズを糖タンパク質リッチにする。LC-MS分析に使用する場合は,on-bead 消化を行う*3
  5. Elution buffer 300μlを添加する。 10分間ボルテックスし,10,000 rpmで3分間遠心分離する。溶出した糖タンパク質画分は,次の機能性研究またはLC-MS研究にすぐに使用することができる。

*3 LC-MS分析のためのon-bead 消化方法

  1. 最終洗浄ステップ後,5 mM DTT溶液100μlを加えてビーズを完全に浸漬し,60℃で30分間インキュベートする。
  2. 冷却後25 mMヨードアセトアミド100μlをDTT /ビーズ懸濁液に添加混合し,暗所で1時間インキュベートする。
  3. 3分間5000×gで遠心し,上清を除去する。ビーズ,DTTおよびヨードアセトアミドのフィルタースラリーを清潔なチューブに移す。
  4. MSグレードのトリプシン0.025μg/μl溶液100μlをビーズに添加し37℃で一晩on-bead消化する。
  5. 5000×gで3分間遠心分離し,上清のペプチド溶液を保持する。
  6. 10%ギ酸溶液100μlをビーズに加え,37℃で15分間インキュベートし残ったペプチドを抽出する。
  7. 5000×gで3分間遠心分離を行い,この上清を最初の上清に加える。
  8. SpeedVacを使用して最終容量を100μlに減らし,LC-MS / MSを行うまで-80℃で保存する。

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価格

[在庫・価格 :2021年04月17日 00時13分現在]

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NuGel Glycoprotein Enrichment PBA Kit (10preps)
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■NuGel PBA(担体)

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NuGEL Phenyl Boronic Acid
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シスジオール,糖タンパク質精製用。カラム容積:10 ml分(#NPBA-05),20 ml分(#NPBA-10)
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シスジオール,糖タンパク質精製用。カラム容積:10 ml分(#NPBA-05),20 ml分(#NPBA-10)
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NuGEL Phenyl Boronic Acid

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説明文 シスジオール,糖タンパク質精製用。カラム容積:10 ml分(#NPBA-05),20 ml分(#NPBA-10)
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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