サブクローニング不要で部位特異的変異導入が行えるキット GenEdit Site-Directed DNA Mutagenesis Kit
掲載日情報：2013/10/28 現在Webページ番号：8132
高効率かつ迅速に、部位特異的変異導入が行えるキットです。クローニングベクターを使用せず、50 kbp以下の鋳型プラスミドの標的領域に、挿入、欠失、置換などの変異を直接導入できます。
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特長
- 米国特許を取得しているUnrestricted Mutagenesis and Cloning (URMAC)法をベースにしたキットです。鋳型プラスミドと2種類のプライマー（SP：Starter Primer、OP：Opener Primer）＊を用いて、3回のPCRと2回の環状化反応により、標的部位に変異が導入されたPCR産物を得ます（下図参照）。ライゲーション反応により鋳型プラスミドにクローニングし、E. coliに形質転換して変異導入体を得ます。
- PCRは標的領域のみで行うため、プラスミドの他の領域に増幅エラーが生じることはなく、正確性（Fidelity）は99.9％以上です。また、使用するポリメラーゼもFidelityの高いホットスタートタイプです。
- キットに含まれる試薬はほとんどが調製済みで、分注済みのキャップが色分けされており、調製や添加ミスを防ぐことができます。
- 形質転換用のコンピテントセルFBT5α Super Competent Cell（5×108～5×109 cfu/1μg pUC18）が付属しています。
| 鋳型プラスミドのサイズ | ＜ 50 kbp |
|---|---|
| 挿入配列のサイズ | ＜ 100 bp |
| 欠失配列のサイズ | ＜ 10,000 bp |
| クローニング用制限酵素サイト | 必要 |
| PCR産物のサイズ | 150 ～ 12,500bp（推奨サイズ：500～4,000 bp） |
＊鋳型プラスミドおよびプライマーは別途ご用意下さい。プライマーの設計には、First Biotech社ウェブサイトの "Project Design Tool" にある、専用アプリケーション（Project Design Manager）をご利用下さい。
※12 kbpまでの小サイズのプラスミドを鋳型として用いる場合は、「EZ-Mutation Site-Directed DNA Mutagenesis Kit」（詳細はこちら）をご使用下さい。
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操作方法概略
SP (Starter Primer)の設計例
標的領域（Target）の両側に配置されるよう制限酵素サイト２か所（X、Y）を決定し、プライマーペアを設計する。
OP (Opener Primer)の設計例
SPにより増幅され、環状化したP2に対し、変異を導入するプライマーペアを設計する。図は欠失変異の例。
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キット内容
- Premixed PCR reagent
- Premixed circularization reagent
- pUC18 control plasmid
- Control starter primer
- Control opener primer
- Control restriction enzymes and buffer
- T4 DNA ligase
- T4 DNA ligase buffer
- RNase and DNase free water
- FBT5α super competent cell
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月20日 00時00分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Site-directed DNA Mutagenesis Kit, GenEdit (8reactions) |
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Site-directed DNA Mutagenesis Kit, GenEdit (16reactions) |
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Site-directed DNA Mutagenesis Kit, GenEdit (24reactions) |
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Site-directed DNA Mutagenesis Kit, GenEdit (80reactions) |
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[在庫・価格 ：2024年04月20日 00時00分現在]
Site-directed DNA Mutagenesis Kit, GenEdit (8reactions)
文献数： 0
- 商品コード：201321
- メーカー：FBT
- 包装：1kit
- 本製品は取扱中止になりました
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
| 掲載カタログ |
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Site-directed DNA Mutagenesis Kit, GenEdit (16reactions)
文献数： 0
- 商品コード：201322
- メーカー：FBT
- 包装：1kit
- 本製品は取扱中止になりました
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| 保存条件 | 法規備考 | ||
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Site-directed DNA Mutagenesis Kit, GenEdit (24reactions)
文献数： 0
- 商品コード：201323
- メーカー：FBT
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Site-directed DNA Mutagenesis Kit, GenEdit (80reactions)
文献数： 0
- 商品コード：201324
- メーカー：FBT
- 包装：1kit
- 本製品は取扱中止になりました
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| 法規制等 | |||
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