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迅速性、簡便性、感度が向上した5-mC/5-hmC定量キット MethylFlash Global DNA Methylation (5-mC/5-hmC) ELISA Easy Kit

掲載日情報:2022/03/02 現在Webページ番号:80610

5-メチル化シトシン(5-mC)または5-ヒドロキシメチル化シトシン(5-hmC)を、ELISAを用いた比色法により簡便、迅速かつ高感度で定量できるキットです。従来のMethylFlash MethylatedColorimetric:#P-1034, Fluorometric:#P-1035)/ Hydroxymethylated DNA Quantification KitColorimetric:#P-1036, Fluorometric:#P-1037)に比べて、操作の簡便性の向上、測定時間の半減、また感度や再現性の向上など、大幅に性能が向上しています。

使用例

MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit(#P-1030)使用例

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MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit(#P-1030)使用

MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation(5-hmC ELISA Easy Kit(#P-1032)使用例

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MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation
(5-hmC)ELISA Easy Kit(#P-1032)使用

各種動物、組織のDNAメチル化の定量

HPLC-MSで得られた値と近い結果が得られている。

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DNAのメチル化とは

DNAメチル化は、DNAメチルトランスフェラーゼ(DNMT)により、メチル基がシトシン環の5位の炭素原子へ共有結合で付加されて起こるDNAメチル化の結果、5-メチル化シトシン(5-mC)となることで起きます。体細胞においては、5-mCは、ジヌクレオチドCpGの配列のメチル化にほぼ限られ、胚性幹(ES)細胞では、非CpG中にも5-mCが存在します。表現型や遺伝子発現における主要なエピジェネティックな修飾として、5-mCの生物学的重要性は広く認識されています。例えば、5-mC含有量の全体的な減少(DNAの低メチル化)は、様々な環境影響によるメチル欠乏がである可能性が高く、またがんなどの多数の生物学的プロセスにおける分子マーカーとして期待されています。5-ヒドロキシメチル化シトシン(5-hmC)、5-ホルミル化シトシン(5-fC)および5-カルボキシシトシン(5-caC)などいくつかの新しい修飾ヌクレオチドが胚性幹細胞だけでなく、ヒトおよびマウスの組織でも検出されています。哺乳動物においては、これらの修飾ヌクレオチドは、TETファミリーの酵素により媒介される5-メチル化シトシンの反復的酸化反応により生成されます。修飾シトシンは、DNAのメチル化構造やパターンに影響を与え、遺伝子機能調節において重要な役割を果たしていることが明らかになっています。

DNAのメチル化とは

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従来品との操作方法の比較

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従来品 新製品
MethylFlash Methylated(#P-1034
/ Hydroxymethylated(#P-1036
DNA Quantification Kit(Colorimetric
MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)(#P-1030
/ Hydroxymethylation(5-hmC)(#P-1032
ELISA Easy Kit(Colorimetric
従来品

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新製品

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蛍光法のMethylFlash Methylated(#P-1035)/Hydroxymethylated(#P-1037DNA Quantification KitFluorometric)の操作方法は、左の従来の比色法の測定キットの場合とほぼ同様ですが、蛍光試薬による検出となります。



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従来品との仕様の比較

5-mC(5-メチル化シトシン)測定キット

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製品のステータス 従来品 新製品
品名

MethylFlash Methylated DNA
5-mC Quantification Kit

矢印

MethylFlash Global DNA
Methylation(5-mC) ELISA Easy Kit

Colorimetric Fluorometric Colorimetric
商品コード P-1034 P-1035 P-1030
測定法 比色 蛍光 比色
必要試料量*1 50~200 ng 20~200 ng 20~200 ng
標準曲線範囲 0.5~10.0 ng/μl(メチル化率 0.25~5%*2 0.1~5 %(メチル化率)
検出感度*2 0.2%(メチル化率) 0.05%(メチル化率) 0.05%(メチル化率)
測定時間 約4時間 2時間
測定波長 450 nm 励起530 nm/蛍光590 nm 450 nm
使用文献
(メーカー製品ページ)
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測定試料 培養細胞、新鮮/凍結組織、パラフィン包埋組織、血漿/血清、体液などから抽出したDNA

使用文献情報の閲覧方法のご案内

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5-hmC(5-ヒドロキシルメチル化シトシン)測定キット

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製品のステータス 従来品 新製品
品名

MethylFlash Hydroxymetylated
DNA Quantification Kit

矢印

MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation(5-hmC)
ELISA Easy Kit

Colorimetric Fluorometric Colorimetric
商品コード P-1036 P-1037 P-1032
測定法 比色 蛍光 比色
必要試料量*1 50~200 ng 20~200 ng 20~200 ng
標準曲線範囲 0.5~10.0 ng/μl
(ヒドロキシルメチル化率 0.1~2%*2
0.2~5.0 ng/μl
(ヒドロキシルメチル化率 0.04~1%*2
0.02~1
(ヒドロキシルメチル化率)
検出感度*2 0.04%(ヒドロキシルメチル化率) 0.01%(ヒドロキシルメチル化率) 0.01%(ヒドロキシルメチル化率)
測定時間 3.75時間 3.3 時間 2時間
測定波長 450 nm 励起530 nm/蛍光590 nm 450 nm
使用文献
(メーカー製品ページ)
EPG_logo EPG_logo EPG_logo
測定試料 培養細胞、新鮮/凍結組織、パラフィン包埋組織、血漿/血清、体液などから抽出したDNA

*1 メチル化DNAまたはヒドロキシメチル化DNAの割合は試料によって異なり、1%(5-mC)または0.6%(5-hmC)以下の場合があるため、100 ngの試料を用いることをお勧めします。
*2 試料量100 ngのとき。

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特長

  • ELISA Easy Kitは、操作の簡略化により、約2時間でアッセイが完了します。
  • 試薬組成の改善により、測定範囲が拡大し、また再現性も向上しています。
  • 低バックグラウンドのため、DNAの変性やプレートのブロッキング操作は必要ありません。
  • 非修飾シトシンと交差せず、5-mCと5-hmC間の交差はほとんどありません。そのため、5-メチル化シトシン(5-mC)および5-ヒドロキシメチル化シトシン(5-hmC)のそれぞれを定量することにより、試料中の5-mCおよび5-hmCの総量を定量できます。

  • キットにはポジティブおよびネガテティブコントロールが含まれており、一本鎖または二本鎖のDNAや動物種に関わらず、DNAのメチル化を定量することができます。
  • 最適化されたポジティブコントロールによって、DNAのメチル化度をパーセンテージで解析でき、また定量性の向上により、HPLC-MS分析測定値と高い相関性が得られます。

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検量線

MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit(#P-1030)の検量線例

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MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit(#P-1030)の検量線例

MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation(5-hmC)ELISA Easy Kit(#P-1032)の検量線例

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MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation
(5-hmC)ELISA Easy Kit(#P-1032)の検量線例

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キット内容

  • Wash buffer
  • Binding solution
  • Negative control
  • Positive control
  • Anti-5-mC/5-hmC antibody
  • Signal indicator
  • Enhancer solution
  • Developer solution
  • Stop solution
  • 8-well assay strips with flame

キットにより組成が異なります。


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FAQ

Q-1. MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit(#P-1030)の製品データシートのPositive controlの説明によると、5-mCの濃度は5%と記載されていますが、計算したところ10%濃度となりました。どちら濃度が正しいですか?

A-1. Positive control(PC)は1μlのストックPC溶液に5 ngの5-mCを含有しています。ストックPC溶液の濃度は、50μg/mlです。したがって、10 ngのPCあたり1 ngの5-mC、すなわち10%の5-mCとなります。最高濃度のスタンダードの場合(5% PC/well)、1μlのストックPC溶液(5 ngの5-mCを含む50 ng DNA)と1μlのストックNC溶液(5 mCを含まない50 ngのDNA)がウエル内に加えられます。したがって、ウェル内の総量(PC+NC)は100 ngとなり、それには5 ngの5-mCのみが含まれるため、ウェル当たりでは5% 5-mCに相当します。ストックPC溶液中の5-mC濃度の計算値は10%ですが、ウェル(最高濃度のスタンダード)では、ストックPC溶液がストックNC溶液を加えて2分の1に希釈されるため、その濃度が半分の5%に希釈されます。


Q-2. Positive control standardの吸光度測定値が、MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit(#P-1030)の製品データシート記載の数値と異なる結果となるのはなぜですか?

A-2. 製品データシートに記載されている標準曲線は、あくまで参照用であり、実際の測定結果を反映するものではありません。実測値は、様々な要因(ピペッティング操作、呈色時間、温度など)に応じて、ユーザーの環境や実験間で異なります。


Q-3. キットバッファーを誤って室温に置いて、数日間、光に晒しました。まだ使用できますか?

A-3. Wash bufferやDeveloper solutionなどの試薬は、温度と光に敏感で、適切に保管(4℃、暗所下)する必要があります。推奨保管条件が一時的に保持できなかった場合は、溶液が透明で色に変化がないことを確認して下さい(例、Developer solutionの場合、青色溶液であること)。特に変化が見られなかった場合では、引き続き使用が可能です。


Q-4. MethylFlash Metylated DNA Quantification Kitは、CpGモチーフ以外に、植物に見られるような非CpG配列からの5-mCも検出することができますか?

A-4. 本製品は、CpGジヌクレオチドと非CpG配列(CHGおよびCHH)の両方からグローバルな5-mC DNAを定量するのに適しています。



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Epigentek Group社のDNAメチル化解析キットシリーズ

ELISAに類似した手法で、5-メチル化シトシン(5-mC)をはじめとした各種修飾核酸を定量できるキットのシリーズです。製品名をクリックすると詳細をご覧になれます。

測定物 測定試料 製品名 検出法 特長
5-メチル化シトシン
(5-mC)
抽出したDNA MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit 比色 より迅速・簡便・高感度に検出
MethylFlash Methylated DNA
(5-mC)Quantification Kit
比色
または
蛍光
使用文献多数あり
5-ヒドロキシメチル化シトシン
(5-hmC)
抽出したDNA MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation(5-hmC)ELISA Easy Kit 比色 より迅速・簡便・高感度に検出
MethylFlash Hydroxymethylated DNA (5-hmC)Quantification Kit 比色
または
蛍光
使用文献多数あり
5-ホルミル化シトシン
(5-fC)
抽出したDNA MethylFlash 5-Formylcytosine(5-fC)DNA Quantification Kit 比色 シトシン、5-mC、5-hmC、5-caCとの交差なし
5-methyl-2-deoxycytidineと
5-methylcytidineの総量
ヒトまたは動物の尿 MethylFlash Urine 5-Methylcytosine(5-mC)Quantification Kit 比色
または
蛍光
メチル化DNAおよびメチル化RNAの分解量の総量を反映

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価格

[在庫・価格 :2024年03月29日 14時15分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit(Colorimetric)(48 reactions)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 115
説明文
精製したDNA中の5-メチルシトシン濃度をELISAを用いた比色法により定量するキット。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2022年11月1日号 p.19
100周年ありがとうキャンペーン p.58

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精製したDNA中の5-メチルシトシン濃度をELISAを用いた比色法により定量するキット。
別包装品 別包装品あり
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掲載カタログ ニュース2021年3月15日号 p.5
ニュース2022年11月1日号 p.19

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精製したDNA中の5-ヒドロキシメチルシトシン濃度をELISAを用いた比色法により定量するキット。
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ニュース2021年3月15日号 p.5

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精製したDNA中の5-ヒドロキシメチルシトシン濃度をELISAを用いた比色法により定量するキット。
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掲載カタログ ニュース2021年3月15日号 p.5

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MethylFlash Global DNA Methylation(5-mC)ELISA Easy Kit(Colorimetric)(48 reactions)

文献数: 115

説明文 精製したDNA中の5-メチルシトシン濃度をELISAを用いた比色法により定量するキット。
別包装品 別包装品あり
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掲載カタログ ニュース2022年11月1日号 p.19
100周年ありがとうキャンペーン p.58

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説明文 精製したDNA中の5-メチルシトシン濃度をELISAを用いた比色法により定量するキット。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年3月15日号 p.5
ニュース2022年11月1日号 p.19

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説明文 精製したDNA中の5-ヒドロキシメチルシトシン濃度をELISAを用いた比色法により定量するキット。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ 100周年ありがとうキャンペーン p.58
ニュース2021年3月15日号 p.5

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説明文 精製したDNA中の5-ヒドロキシメチルシトシン濃度をELISAを用いた比色法により定量するキット。
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年3月15日号 p.5

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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