ウイルスを使わず、シングルコピーをワンステップでゲノムに導入 phiC31 Integrase Vector System
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：7553
目的遺伝子を導入するドナーベクターと、phiC31インテグラーゼ発現プラスミドを用いて、ウイルスを使用せずに一段階反応で目的遺伝子をゲノムに組み込めるシステムです。
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原理
1. 目的遺伝子をattBドナープラスミドにクローニングし、PhiC31 Integrase Expression Plasmid（#FC200PA-1）とコトランスフェクションする
2.細胞内でPhiC31 Integraseが一過性発現し部位特異的な組換えが生じる
（ドナープラスミドのattBとゲノムのpseudo attP間）
3. pseudo attPサイトはゲノム中の転写活性部位に存在することが多いため、導入遺伝子は安定的に発現する
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phiC31インテグラーゼとは
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phiC31インテグラーゼは、バクテリオファージphiC31ゲノム内にコードされる配列特異的セリンリコンビナーゼで、ファージゲノム内のattP siteと宿主バクテリアゲノム内のattB siteの2つの34 bp配列（attachment site：att）間の組換えを触媒します。 このインテグラーゼは、哺乳類細胞を含む多くの細胞で効果的に機能することが知られています。phiC31インテグラーゼ存在下で、ドナープラスミドを含むattBは、ネイティブattP siteと類似の配列をもつsite（pseudo-attP site）を組換えることにより、目的遺伝子内に一方向で結合することができます。またphiC31インテグラーゼは、どのようなサイズのドナープラスミドでもシングルコピーとして結合することができ、コファクターを必要としません。導入遺伝子は、安定的に発現します。 |
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特長
- 非ウイルス性ベクターです。
- 転写活性化部位にて組換えを起こします。また、組換えはシングルコピーです。
- 導入する遺伝子のサイズに制限がありません。
- トランスフェクション法により、容易に安定細胞株を樹立できます。
- 幹細胞やin vivoモデル動物にも、適用可能です。
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使 用 例
コロニーカウンティングアッセイ
HEK293細胞に、市販のトランスフェクション試薬を用いて、pFC-PGK-MCS-pA-EF1-GFP-T2A-Puro phiC31 Donor Vector（#FC551A-1）とphiC31 Integrase Expression Plasmid（#FC200PA-1）をトランスフェクションした。Puromycinを添加し、11日間培養した後、細胞をメチレンブルーで染色し、コロニーカウンティングアッセイを行った。
HEK293細胞にpFC-PGK-MCS-pA-EF1-GFP-T2A-Puro phiC31 Donor Vector（#FC551A-1）とphiC31 Integrase Expression Plasmid（#FC200A-1）をトランスフェクションした。Puromycinを添加し培養した後、位相差顕微鏡像とGFP蛍光画像を観察した。
大多数の細胞がGFPを発現していることがわかる。
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phiC31インテグラーゼ発現プラスミド
[在庫・価格 ：2024年04月26日 20時55分現在]
[在庫・価格 ：2024年04月26日 20時55分現在]
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phiC31ドナーベクター
[在庫・価格 ：2024年04月26日 20時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||
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pFC-EF1-MCS-pA-PGK-RFP-T2A-Puro PhiC31 Donor Vector |
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pFC-PGK-MCS-pA-EF1-GFP-T2A-Puro PhiC31 Donor Vector |
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pFC-CMV-MCS-pA-SV40-Neo PhiC31 Donor Vector |
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pFC-CMV-GFP-SV40-Neo Positive Control Donor Vector |
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pFC-MCS-pA-SV40-Neo PhiC31 Donor Vector |
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[在庫・価格 ：2024年04月26日 20時55分現在]
pFC-EF1-MCS-pA-PGK-RFP-T2A-Puro PhiC31 Donor Vector
文献数： 0
- 商品コード：FC550A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥155,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
デュアルプロモーターを有するphiC31ドナーベクター。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年6月1日号 p.35 ニュース2017年6月15日号 p.29
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- 商品コード：FC551A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥155,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
デュアルプロモーターを有するphiC31ドナーベクター。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年6月1日号 p.35 ニュース2017年6月15日号 p.29
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- 包装：10μg
- 価格：¥155,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
シングルプロモーター（CMV）を有するphiC31ドナーベクター。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年6月1日号 p.35 ニュース2017年6月15日号 p.29
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- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥155,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
ポジティブコントロール用のphiC31ドナーベクター。GFPを発現する。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年6月1日号 p.35 ニュース2017年6月15日号 p.29
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文献数： 0
- 商品コード：FC500A-1
- メーカー：SBI
- 包装：10μg
- 価格：¥155,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
phiC31ドナーベクター。プロモーターレスのため，MSCで任意のプロモーターや遺伝子を組込むことが可能。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2018年6月1日号 p.35 ニュース2017年6月15日号 p.29
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