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物質の濃度勾配が形成できる細胞遊走/ケモタキシスチャンバー CellDirector 2D / 3D

掲載日情報:2021/08/30 現在Webページ番号:7407

チャンネル内で走化性因子や分化誘導因子などの濃度勾配を形成し、細胞の遊走、分化などに及ぼす影響を観察できるチャンバーです。チャンネル部分はガラス製のため、正立/倒立顕微鏡下での観察が可能です。生細胞イメージングや、経時撮影によるケモタキシス(走化性:chemotaxis)および細胞遊走の記録・解析に最適です。二次元細胞培養用の「2D」と、三次元細胞培養用の「3D」の2種類の製品があります。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


製品の種類

品名をクリックすると製品の詳細、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 CellDirector 2D CellDirector 3D
製品外観 CellDirector 2D

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CellDirector 3D

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商品コード 11-001-10 10-001-10
細胞培養環境 二次元(2D) 三次元(3D)
サイズ φ42✖14H mm
アッセイ数 10 assays
培養容量 200μl 8μl
濃度勾配の定常化に要する時間 15分 ~12時間
最大実験時間 16時間 32時間
透過波長 300~1,200 nm
対物レンズとの最短作動距離 0.17 mm

37℃でVEGFAを用いた場合

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Boyden chamber(従来法)とCellDirectorの比較

Boyden chamber(ボイデンチャンバー)システム

従来から幅広く用いられている方法で、膜細孔を介して、連続的に変化する濃度勾配の環境下で細胞遊走を測定します。この方法では、エンドポイントのデータのみ取得することができます。

Boyden chamberなどの従来の細胞遊走分析法はエンドポイント法であることから、様々な制限があります。濃度勾配は十分に確立されていないことから、生細胞のトラッキングは不可能で、走化性は細胞自体のランダムな細胞遊走と区別することができないのが欠点です。

CellDirectorシステムのアドバンテージ

CellDirectorシステムでは、細胞遊走性や濃度勾配の制御が可能です。タイムラプスイメージングにより、実験の開始から終了までを通して細胞遊走のデータを取得できます。

CellDirectorアッセイは、走化性環境を完全に制御して生理学的細胞培養条件を模倣することが可能で、走化性や形態学的細胞応答研究に最適です。

CellDirectorシステム

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CellDirectorシステム

Boyden chamber(ボイデンチャンバー)システム

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Boyden chamberシステム

特長 CellDirector Boyden chamber
単一細胞の分析
濃度勾配の完成度と制御
遊走速度、距離、方向性のデータの取得
走化性とランダムな細胞遊走との区別
生細胞のトラッキングと個々の移行経路の取得
複雑な三次元(3D)細胞培養の分析

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CellDirector共通の特長

濃度勾配の形成

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濃度勾配の形成

CellDirector内は、流体の流れが正確に制御され、成長因子、ホルモン、ペプチドまたは薬剤などの水溶性分子の濃度勾配を形成するのに使用されます。

高い互換性

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組織培養モデルにおける高い互換性

CellDirectorアッセイは、二次元(2D)および三次元(3D)組織培養モデルでの勾配形成に利用できます。CellDirectorは、ガス透過性があり、細胞培地が継続的に交換されるために優れた細胞培養条件を提供します。

簡便性

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簡便性(ロードが簡単)

CellDirectorの使用方法は簡単です。選択した細胞外マトリクスでコーティングし、次に細胞を注入します。 流体の流れは、操作が簡単なシリンジポンプによって制御されます。廃棄物は、CellDirector内に収集されます。

データの収集と分析

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データの収集と分析

CellDirectorシリーズは、直立顕微鏡と倒立顕微鏡の両方に互換性があります。薄いスライドガラス越しに細胞をモニターすることができ、優れた画質が得られます。走化性細胞の挙動を捉えるための標準的な方法としてタイムラプス顕微鏡法が使用されます。無料のTracking Tool PRO softwareを使用して、データを分析およびプロットします。

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キット内容

  • CellDirector
  • Syringe

別途シリンジポンプFysion 100(#90-001)と吸引ポンプVacuum 104, 120V US Plug(#92-001)が必要です。


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CellDirector 2D

特長

  • 接着細胞を用いた二次元培養環境下で、標的因子の濃度勾配に対する細胞の反応性を観察できるチャンバーです。
  • チャンバー内は3つのチャンネルに分かれており、中央のチャンネルで濃度勾配が生じます。残り2つのチャンネルでは因子の濃度が0%または100%であるため、コントロールが容易に得られます。
  • チャンネルはガス透過性のため、長時間の培養、観察が可能です。
CellDirector2D_principle

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1回のCellDirector2D実験で、勾配領域と2つの制御領域からの生細胞応答を分析します。

CellDirector 2D内の濃度勾配の形成

CellDirector 2D使用例

中央のチャンネルで濃度勾配が形成される。

適用

  • 内皮細胞の遊走
  • 好中球の遊走
  • がん細胞の遊走
  • 各種細胞の分化

原理

CellDirector2D_figureA

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CellDirector 2D

CellDirector2D_figureB

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細胞外マトリクスを排液口から注入し、チャンネル内をコーティングした後、細胞懸濁液を注入する。接着細胞は、チャンネル底部に接着し、二次元的な環境となる。

CellDirector2D_f

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シリンジポンプを用いて、標的因子を含む培地と、含まない培地を各チャンネルに注入する。拡散により中央のチャンネルにおいて濃度勾配が生じ、標的因子に対する細胞の反応を観察できる。両側のチャンネルにおいて、濃度勾配が存在しないコントロール下での細胞の状態を観察できる。

使用例

ヒト好中球のIL-8濃度勾配に対する細胞遊走の分析

CellDirector 2Dを使用し、ヒト好中球がIL-8の安定した濃度勾配に向かって移動することを確認した。CellDirector 2Dには、濃度勾配領域だけでなく、0%および100%の走化性物質を含む制御領域も含まれている。

ヒト好中球のIL-8濃度勾配に対する細胞遊走の分析

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CellDirector 3D

特長

  • ゲルマトリックスなどの三次元培養環境下で、標的因子の濃度勾配に対する細胞の反応性を観察できるチャンバーです。より生体内に近い条件での実験、観察が可能です。
  • 接着細胞、浮遊細胞のほか、スフェロイドや胎生小器官のような組織も使用できます。
  • 正確な流量により、三次元ゲルマトリックス中の濃度勾配をコントロールできます。
  • チャンネルはガス透過性のため、長時間の培養、観察が可能です。
CellDirector3D_principle

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細胞、スフェロイド、または小さな組織試料が三次元マトリックスに埋め込まれ、線形勾配がマトリックスを介して形成されてin vivoのような条件下での細胞応答を可能にします。

CellDirector 3D内で濃度勾配が形成される様子

CellDirector3D_figureA

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中央の細胞培養領域で濃度勾配が形成される。

CellDirector3D_figureB

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時間経過とともに変化する濃度勾配。12時間後には定常化し直線性が見られる。

適用

  • 器官形態形成
  • 幹細胞の移動と分化
  • 軸索誘導
  • 微生物のMICの決定
  • 血管新生における出芽(sprouting)

原理

CellDirector3D_workflow_1

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CellDirector 3D

CellDirector3D_workflow_2

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チャンバー内には2つのチャンネルがあり、チャンネル間に細胞培養領域がある。細胞とマトリクス溶液の混合液を細胞培養領域に注入し、ゲル化させる。細胞(接着性細胞、浮遊細胞、スフェロイド、胎児器官など使用可能)は、三次元マトリクス内に埋没した状態になる。

CellDirector3D_workflow_3

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シリンジポンプを用いて、標的因子を含む培地と、含まない培地を各チャンネルに注入する。拡散により中央のチャンネルにおいて濃度勾配が生じ、約12時間後には直線性のある濃度勾配が形成される。

使用例

左に増加するVEGFA(0~20 ng/ml)の濃度勾配で48時間成長したマウス胎児腎臓(E13.5)

血管新生は、主により高濃度の成長因子に面する腎臓の側で誘導された。

VEGFA(0~20 ng/ml)の濃度勾配で48時間成長したマウス胎児腎臓(t=0)

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t=0時間

VEGFA(0~20 ng/ml)の濃度勾配で48時間成長したマウス胎児腎臓(t=48)

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t=48時間

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操作方法概略

CellDirector操作方法概略

  1. インキュベーター中で細胞を培養する。
  2. 培養細胞をCellDirector内にロードする。
  3. チューブを取り付けて定常濃度勾配を適用する。
  4. CellDirectorを顕微鏡に取り付けて画像を収集する。
  5. 画像分析により走化性の結果を得る。

下の図をクリックすると、それぞれの製品のワークフローをご覧いただけます。

CellDirector 2D-Short User Guide

CellDirector 2D-Short User Guide

CellDirector 3D-Short User Guide

CellDirector 3D-Short User Guide

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操作例動画

CellDirecter製品ラインナップ

CellDirectorは、方向性を有する濃度勾配環境下において、細胞の遊走、および形態学的変化の研究の支援するための細胞ベースのアッセイです。

マウス好中球の遊走の分析

CellDirector 2DとTracking Tool Pro softwareを使用し、走化性タンパク質MIP-2であるマクロファージ炎症性タンパク質-2への好中球の遊走の分析方法を解説します。

CellDirecter 2D操作方法概略

典型的なCellDirecter 2Dの実験-細胞応答分析において、二次元細胞培養で安定した濃度勾配を実現する設定方法を解説しています。

CellDirecter 3D操作方法概略

CellDirecter 3Dの実験において、三次元細胞培養で安定した濃度勾配を実現する設定方法を解説しています。

2D生細胞トラッキングにおける濃度勾配の形成

CellDirector2Dでは、濃度勾配が迅速に形成されます。このビデオでは、濃度勾配チャネルと、1回のCellDirector2D実験における2つの制御チャネルの典型的なトラッキングの結果を示しています。

ランダムと方向性を持つ細胞遊走の区別方法

CellDirector 2Dを使用すると、実験でランダムな細胞遊走と方向性のある細胞遊走を簡単に区別することができます。一方、ボイデンタイプの遊走アッセイを使用すると、この重要な情報が失われる理由を説明しています。

Tracking Tool PROを用いた自動細胞トラッキングの導入

Tracking Tool PRO softwareは、自動化による細胞トラッキングと分析のための使いやすいソフトウェアです。手動で細胞のトラッキングを行う場合と比較して、分析に費やす時間を大幅に削減でき、またその一方で高品質な精度とユーザーによる制御も兼ね備えています。

CellDirector 3Dへの細胞の播種

CellDirector 3Dにおいては、細胞の播種は標準のピペットを使用して細胞とマトリックスの混合物 8μlをゆっくりと注入するだけの迅速かつ簡単な操作で行うことができます。


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関連製品 Tracking Tool PRO software(無償ソフトウェア)

Tracking Tool PRO softwareは、CellDirector遊走アッセイと一緒に使用される細胞遊走および走化性分析ツールです。ユーザー登録により、無償でダウンロードしてご使用いただけます。このソフトウェアには、細胞のトラッキング、分析、プロットに必要なものがすべて含まれています。直感的で使いやすいように設計されており、手動によるトラッキングを高い時間効率で正確に実行できるワークフローを備えています。

使用例

Gradientech Tracking Tool_figureA

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Gradientech Tracking Tool_figureB

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Gradientech Tracking Tool_figureC

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特長

  • 単独で直感的に使用でき、セットアップを迅速、かつ簡便に行うことができます。
  • 最先端の自動細胞トラッキングシステムで、分析品質と精度を維持し、時間を節約できます。
  • tiffおよびjpegの画像シーケンスを処理することができ、すべてのタイプの顕微鏡で画像を取得することができます。
  • すべての作業を単一のプロジェクトファイル(.gtt)に保存でき、保存した作業に戻り、いつでもカスタマイズを行えます。
  • 特定のエリアの選択が可能で、数回のクリックで、濃度勾配の様々な部分の細胞応答を分析することが可能です。
  • 高解像度のプロットを実行でき、エクスポートしたプロットは、すぐに論文に使用できます。

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アプリケーションノート

下の画像をクリックすると、それぞれのアプリケーションノート(アプリケーションノート)をご覧いただけます。

CellDirector 2D

Chemotaxis of cancer cells
Chemotaxis of mouse neutrophils
Chemotaxis of human neutrophils

CellDirector 3D

Angiogenesis
Antibiotic Susceptibility Testing
Chemotaxis of human neutrophils

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FAQ

(クリックで開閉します)

Q-1. どのような因子や化合物で濃度勾配が形成できますか?

A-1. 水溶性分子であれば、どのような物質でも濃度勾配を形成できます。創薬研究における候補物質や、増殖因子(VEGF、FGFなど)、ペプチド、ホルモン、モルフォゲン、代謝産物、ビタミンなどが挙げられます。



Q-2. どのような試料が使用できますか?

A-2. あらゆる種類の接着細胞、初代培養細胞、細胞塊(小さいもの)、in vitroで培養可能な組織片などが使用できます。



Q-3. CellDirectorのサイズは?

A-3. CellDirectorは直径約4 cmです。サイズの小さな培養ディッシュと同様に、一般的な顕微鏡ホルダーにセットします。



Q-4. CellDirector Rubyで三次元培養を行う場合、どのような基質が使用できますか?

A-4. 溶液状であれば、あらゆる種類の基質を注入でき、チャンネル内で重合させて使用できます(例:Collagen Ⅰなど)。



Q-5. CellDirector 2Dで二次元培養を行う場合、細胞接着を促進するために、チャンネル内を基質などでプレコーティングできますか?

A-5. はい、可能です。CellDirector 2Dに細胞をアプライする前に、ゼラチンやフィブロネクチン溶液などを注入するだけで、簡単にプレコーティングできます。



Q-6. CellDirectorを用いたアッセイで、どのようなデータが得られますか?

A-6. 経時観察やビデオ撮影が可能な顕微鏡を使用することにより、標的因子の濃度勾配存在下における細胞の反応性を確認できます。これにより、細胞遊走、細胞増殖、アポトーシスや分化における細胞形態変化のデータを取ることができます。アッセイ後に細胞染色を行うことも可能です。詳細については、当社テクニカルサポート(機器担当)まで、お問い合わせ下さい。



Q-7. CellDirectorを使用する際に必要な物を教えて下さい。

A-7. シリンジを2本セットできるシリンジポンプが必要です。操作が簡単なGradientech社のFusion 100(#90-001)をお勧めします。また、長時間アッセイを行う際、チャンネル内に気泡が生じるのを防ぐため、小型のバキュームポンプ(#91-001)も必要です。



Q-8. CellDirectorは再利用できますか?滅菌処理済みですか?

A-8. CellDirectorは、エチレンガスを用いて滅菌処理されています。試料間のコンタミネーションを防ぐため、一回使い切りとして下さい。



Q-9. 形成された濃度勾配を、目で見て確認できますか?

A-9. 濃度勾配の様子は、標的因子を蛍光標識して用いるか、蛍光マーカー(Gradient Marker FITC (#80-001) / TRITC(#81-001))を使用することにより、蛍光顕微鏡下でリアルタイムに確認できます。Gradient Markerは、FGF2やVEGFA、EGFなど可溶性の増殖因子と同様の濃度勾配を形成すると考えられます。



Q-10. 濃度勾配を形成したい標的因子が、基質に結合するかを確認できますか?

A-10. 標的因子を蛍光標識することにより、濃度勾配形成の様子や、因子そのものの挙動を蛍光顕微鏡下で確認できます。基質への結合性については、標的因子が基質内を拡散する際にどの程度凝集するかで確認できます。詳細については、当社テクニカルサポート(試薬担当)までお問い合わせ下さい。



Q-11. CellDirectorの観察には、どのような種類の顕微鏡が必要ですか?

A-11. CellDirectorは優れた光透過性(300~1,200 nm)を有しているため、一般的な顕微鏡で観察可能です。最新の共焦点顕微鏡や、FRET、FRAP、FLIPなどの画像加工技術にも適用可能です。対物レンズとの最短作動距離は0.3 mmです。



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価格

CellDirector 2D/3D

[在庫・価格 :2024年03月29日 17時15分現在]

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CellDirector 2D, Chemotaxis Analysis System in 2D Cell Culture
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製品記事 細胞遊走(Migration)/細胞浸潤(Invasion)製品特集
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CellDirector 2D, Chemotaxis Analysis System in 2D Cell Culture

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  • 商品コード:11-001-10
  • メーカー:GRD
  • 包装:10pieces
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Fusion 100
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Fusion 100

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  • 商品コード:90-001
  • メーカー:GRD
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Vacuum 104, 120V US Plug

文献数: 0

  • 商品コード:92-001
  • メーカー:GRD
  • 包装:1unit
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  • 商品コード:70-001
  • メーカー:GRD
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 機器・消耗品担当)

kiki@funakoshi.co.jp

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