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ミトコンドリアDNA(mtDNA)解析関連キット Mitochondrial Assay Kit

掲載日情報:2026/07/30 現在Webページ番号:73651

ミトコンドリアゲノム(mtDNA)は、全長16.5 kbの環状かつイントロンを含まない単数体の二本鎖DNAで、37個の遺伝子をコードしています。mtDNAコピー数(mtDNA-CN)およびmtDNA損傷は、ミトコンドリア機能障害を示す有力なバイオマーカーとして注目されています。mtDNA抽出キットや、mtDNA損傷およびコピー数のモニタリングに有用なRayBiotech社の各種qPCRアッセイキットをご紹介します。

Mitochondrial DNAとは

ミトコンドリアゲノム(mtDNA)は、全長16.5 kbの環状かつイントロンを含まない単数体の二本鎖DNAであり、37個の遺伝子をコードしています。
mtDNAコピー数(mtDNA copy number、mtDNA-CN)は、ミトコンドリア機能障害を示すバイオマーカーであり、全死亡率や、心血管疾患、慢性腎臓病、がんなどのさまざまな加齢関連疾患との関連が報告されています。
ミトコンドリアが正常に機能するためには、mtDNAの完全性が維持されていることが不可欠です。過度の酸化ストレスは、スーパーコイル構造の消失を伴うmtDNAの損傷を引き起こすことがあります。mtDNA損傷の蓄積は、加齢した組織におけるエネルギー不足に加え、神経変性疾患、心血管疾患、がんなどのさまざまなヒト疾患の一因であると考えられています。また、mtDNA損傷は、医薬品や環境毒性物質の遺伝毒性を評価するための有用なバイオマーカーでもあります。



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mtDNA抽出:Mitochondrial DNA Isolation Kit

さまざまな細胞種および組織から、核DNAの混入がほとんどなく、高収量かつ高純度でmtDNAを単離するキットです。

特長

  • 高品質なmtDNAを単離できます。
  • 核DNAの混入ががほとんどない、高純度なmtDNAを単離できます。
  • 高収量かつ高純度です。
  • 複数の細胞種に対応しています。
  • 簡便に使用できます。
  • 12試料を約1.5時間で処理できます。
  • 得られた高純度のmtDNAは、酵素処理、サザンブロッティング、クローニング、PCR解析および増幅など、幅広い下流のアプリケーションに使用できます。
  • 単離方法:磁気ビーズ

操作方法概略

  1. 細胞試料は回収・洗浄を行い、組織試料はホモジナイズ後、洗浄を行う。
  2. Cell lysis buffer 1を用いて試料を溶解し、氷上でインキュベーションした後、Cell lysis buffer 2を加え、氷上でさらにインキュベーションする。
  3. 遠心分離を行い、上清(ミトコンドリア画分)を分取した後、Protease KおよびDNA lysis bufferを加えて、56℃でインキュベーションし、ミトコンドリアを溶解する。
  4. 磁気ビーズを加え、室温でインキュベーションし、mtDNAを結合させる。
  5. Wash buffer A、BおよびCを順次用いて洗浄する。
  6. Elution bufferを用いてmtDNAを溶出する。
  7. 得られたmtDNAは直ちに下流のアプリケーションに使用できる。直ちに使用しない場合は-20℃以下で保存する。
画像内容説明

使用例

画像内容説明
図1. HeLa細胞、NIH/3T3細胞およびCHO細胞からの高品質なmtDNAの単離

図中に記載の細胞から市販のゲノムDNA単離キットを用いてゲノムDNA(All)を単離し、さらにRayBio Mitochondrial DNA Isolation (Bead-Based) Kit(#MT-ISO)を用いてmtDNA(mt)を単離した。
A:単離したDNA試料(Allおよびmt)と、100 bp DNA Ladderマーカー(M)をそれぞれ1.0%アガロースゲルにローディングし、電気泳動を行った。
B:HeLa細胞由来のゲノムDNA(All DNA)およびmtDNAを用いて、核遺伝子(GAPDH)およびミトコンドリア遺伝子(D-loop、DL)をPCRで30サイクル増幅した。増幅した試料を用いて、アガロースゲル電気泳動を行った。
これらの結果から、本キットで単離したmtDNAが高い完全性および純度を有することが示された。

キット内容

  • Cell lysis buffer 1~2
  • DNA lysis buffer
  • Protease K
  • Magnetic bead solution
  • Binding buffer 1
  • Wash buffer A~C
  • Elution buffer

磁気セパレーターが別途必要です。

価格

[在庫・価格 :2026年07月31日 00時00分現在]

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Mitochondrial DNA Isolation Kit (Bead-Based) (50 tests)
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Mitochondrial DNA Isolation Kit (Bead-Based) (100 tests)
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mtDNAコピー数評価:Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification Kit

TaqManプローブを用いたqPCRアッセイキットです。mtDNA用のプライマーおよびプローブは、各測定動物種ごとのmtDNA上で最も高度に保存された領域の一つを特異的に標的とします。ヒト、マウス、ラット試料それぞれに適した3種類のキットがあります。

製品ラインナップ

商品コードをクリックすると、各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 測定動物種 商品コード
Human Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification Kit Human MTH-CNQ
Mouse Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification Kit Mouse MTM-CNQ
Rat Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification Kit Rat MTR-CNQ

特長

  • 核DNA由来配列の非特異的増幅を抑え、mtDNAを特異的に測定できます。
  • 優れた特異性と増幅効率を有します。
  • 広い直線ダイナミックレンジを実現します。
  • 1回の反応で、mtDNAと核DNA上の単一コピー参照遺伝子を測定・比較し、mtDNAコピー数を算出できます。

使用例

画像内容説明

図2. Human Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification Kitを用いたmtDNAおよびIFNB1の検量線Human Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification Kit(#MTH-CNQ)を用いて、HeLa細胞由来DNAのmtDNA-FAMおよびIFNB1-VIC(核上の単一コピー遺伝子)の増幅を測定した。各濃度(30~100,000 pg/reaction)の結果から検量線を作成した。

画像内容説明

図3. Mouse Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification Kitを用いたmtDNAおよび36B4の増幅曲線Mouse Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification Kit(#MTM-CNQ)を用いて、NIH/3T3細胞由来DNAのmtDNA-FAMおよび36B4-VIC(核上の単一コピー遺伝子)を測定した。各濃度(30~100,000 pg/reaction)の結果から得られた増幅曲線を示した。

キット内容

  • 2×qPCR master mix
  • Primer and probe mix
  • Reference DNA
  • Nuclease-free H2O

キットの測定動物種により異なります。


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mtDNA損傷評価:Mitochondrial DNA Damage Quantification Kit

各測定動物種のミトコンドリアDNA損傷を特異的かつ定量的に測定するための、TaqManプローブを用いたqPCRアッセイキットです。損傷を受けやすいD-loop領域を標的とする長鎖および短鎖のmtDNA増幅系を用い、両者の増幅効率の差からmtDNA損傷率を定量します。ヒト、マウス、ラット試料それぞれに適した3種類のキットがあります。

製品ラインナップ

商品コードをクリックすると、各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 測定動物種 商品コード
Human Mitochondrial DNA Damage Quantification Kit Human MTH-DQ
Mouse Mitochondrial DNA Damage Quantification Kit Mouse MTM-DQ
Rat Mitochondrial DNA Damage Quantification Kit Rat MTR-DQ

特長

  • 低レベルのmtDNA損傷を検出できます。
  • 長鎖PCR法を用いることで、低レベルのmtDNA損傷を高感度に検出できます。
  • さまざまな試料種に対応しています。

使用例

画像内容説明

図4. H2O2誘導性のmtDNA損傷率
0~1,000 μMの過酸化水素(H2O2)に60分間曝露したHeLa細胞からWhole DNAを単離し、PCR増幅によってmtDNA損傷率(%)をHuman Mitochondrial DNA Damage Quantification Kit(#MTH-DQ)を用いて、測定した。その結果、検討したすべてのmtDNA領域において、H2O2濃度の上昇に伴いmtDNA損傷が継続的に増加することが示された。

画像内容説明

図5. NIH/3T3細胞由来DNA試料を用いたFAMおよびJUN増幅の検量線
Mouse Mitochondrial DNA Damage Quantification Kit(#MTM-DQ)を用いて、NIH/3T3細胞由来DNA試料からFAMおよびJUNを増幅した。各濃度(30~100,000 pg/reaction)の結果から検量線を作成した。

キット内容

  • 2×qPCR master mix
  • Primer and probe mix
  • Damaged DNA
  • Non-damaged DNA
  • Nuclease-free H2O

キットの測定動物種により異なります。


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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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