赤色蛍光による脂肪滴高感度イメージングに加え、脂肪滴の脂質組成解析にも使用可能！ LipiDye^® RED ＜Lipid Droplet Live Imaging Red＞

• 脂肪滴（Lipid droplet）とLipiDye^®シリーズについて
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• 使用文献
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脂肪滴（Lipid droplet）とLipiDye^®シリーズについて

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特長

• 脂肪滴に選択的に濃縮される性質に加え、脂肪滴の疎水環境下で蛍光強度が増大するため、細胞質などでの発光が抑えられ、脂肪滴に対して高いS/N比を示します。
• 非脂肪細胞に存在する微小な脂肪滴（1 μm以下）を検出可能です。
• 高い光安定性を有しており、長時間の生細胞イメージングに適しています。
• 推奨使用濃度（0.1～5 μM）では、ほとんど細胞毒性を示しません。
• 生細胞、固定細胞のいずれにも使用可能です。生細胞染色後に固定処理することも可能です。
• STED超高解像度顕微鏡にも適用可能です。
• Ex/Em：470～560 nm / 550～700 nm（下記参照）
• 蛍光寿命イメージング顕微鏡（FLIM）を用いることで、脂肪滴の脂質組成を評価できます。

蛍光波長（励起・検出波長）について

吸収極大は470～520 nmですが、520～560 nm領域の光源でも励起可能です。詳細は、励起・蛍光スペクトルおよび励起波長適用性のデータをご参照下さい。青色系色素や緑色系色素との多重染色も可能ですが、波長選択には注意が必要です。特に、緑色系色素（FITC、GFPなど）との多重染色において、488 nmレーザーで緑色系色素を励起する場合には、LipiDye^® REDも同時に励起されます。そのため、多重染色で緑色系色素を選択的に検出するためには、520 nm以上の蛍光をカットするバンドパスフィルターをご使用下さい。
なお、多重染色でLipiDye^® REDを選択的に検出するには、514 nmまたは532 nmレーザーで励起したうえで、560 nm以下の蛍光をカットするフィルターをご使用下さい。

光源例

• レーザー光を用いる場合：458 nm、473 nm、488 nm、514 nm、532 nm、561 nm
  561 nmレーザーでは、ほかのレーザーと比較して蛍光強度が弱いため、実験ごとに試薬濃度などの条件の最適化を推奨しています。
• 光源＋フィルターを用いる場合：一般的なAlexa Fluor 555用またはRFP用フィルターが利用可能です。
• STED超高解像度顕微鏡を用いる場合：推奨励起光488 nmレーザー、STED光775 nmレーザー

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参考データ

励起／蛍光スペクトル

励起波長適用性

光安定性

蛍光寿命イメージングによる脂肪滴の脂質組成解析

トリアシルグリセロール（TAG）の一種であるトリオレイン（TO）とジアシルグリセロール（DAG）の一種であるジオレイン（DO）の構成比を変えた人工脂肪滴を作製し、それぞれをLipiDye^® REDで染色して蛍光寿命イメージング顕微鏡（FLIM）を用いて解析した。その結果、DOの比率が高くなるほど蛍光寿命は短くなり、TOの比率が高くなるほど蛍光寿命は長くなることが分かった（τ = 4.1 ns～7.5 ns）。このことから、LipiDye^® REDの蛍光寿命を指標として、脂肪滴のDAG/TAG比を評価できることが示された。蛍光寿命を疑似カラーで表示している。

細胞毒性

生細胞・固定細胞染色

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アプリケーションデータ

血清培地交換後の観察

STED超高解像度顕微鏡による微小脂肪滴の可視化

非脂肪細胞の蛍光強度および蛍光寿命イメージング

さまざまな細胞種での蛍光寿命イメージング

3T3-L1細胞から分化誘導した脂肪細胞（3T3-Adi）、未分化3T3-L1細胞、HepG2細胞、Huh-7細胞、COS-7細胞、およびHeLa細胞をLipiDye^® RED（0.5 μM）で染色し、蛍光寿命イメージングを行った（励起 488 nm、蛍光 560～750 nm）。3T3-Adi以外の細胞については、脂肪滴形成を誘導するため、オレイン酸で1日間処理した後に観察を行った。肝がん由来細胞であるHepG2細胞およびHuh-7細胞では、脂肪滴由来の蛍光寿命は一様ではなく、脂肪滴ごとにDAG/TAGの脂質組成が異なることが示唆された。一方、これら以外の細胞では蛍光寿命は均一であり、全体としてTAGの割合が高い脂質組成であることが示された。

脂肪滴分解における加水分解酵素の影響を評価

Adipose triglyceride lipase（ATGL）をsiRNAでノックダウンしたHuh-7細胞においてLipiDye^® REDの蛍光寿命イメージングを行ったところ、WT Huh-7細胞では不均一であった蛍光寿命が、ATGLノックダウンによって長い蛍光寿命へと均一化された。また、HepG2細胞をATGL阻害物質NG-497で処理した場合にも、同様の現象が観察された。これらの結果から、脂肪滴の脂質組成の不均一性は、ATGLによる脂肪滴の加水分解に伴うDAG割合の増加に起因する可能性が示唆された。

脂肪滴分解（Lipolysis）誘導による脂肪滴の脂質組成変化の追跡

3T3-L1細胞から分化誘導した脂肪細胞（3T3-Adi）に、アデニル酸シクラーゼ活性化物質であるForskolinを添加して脂肪滴分解（Lipolysis）を誘導し、LipiDye^® REDによる蛍光寿命イメージングのタイムラプス解析を100分間行った。薬剤処理後、時間の経過に伴って脂肪滴の蛍光寿命は不均一となり、さらに短縮した。これらの結果から、脂肪滴分解に伴ってDAGの割合が増加していることが示唆された。

脂肪滴分解（Lipolysis）誘導による脂肪滴の脂質組成変化の評価

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使用文献

1. Wang, J., et al., "Single-Cell Fluorescence Analysis of Lipid Droplet Compositional Dynamics during Triacylglycerol Catabolism", J. Am. Chem. Soc.、 147, 41514-41523(2025). [PMID:41065230]

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価格

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