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動物実験では見えない、ヒト腸のリアルな反応をラボで再現 RepliGut Immune Co-Culture Kit

掲載日情報:2025/10/10 現在Webページ番号:72561

RepliGut Immune Co-Culture Kitは、ヒト大腸上皮細胞と免疫細胞(THP-1細胞由来マクロファージ)のin vitro共培養用キット*1です。腸管上皮と免疫細胞の相互作用を再現することで、ヒト臨床により近い炎症反応やバリア機能の評価を可能にします。炎症性腸疾患(IBD)をはじめとする腸関連疾患の研究や創薬スクリーニングにおいて、モデル動物では再現が難しいヒト特有の炎症反応やサイトカイン応答、バリア機能の変化を評価することができます。


RepliGut Immune Co-Cultureによる共培養モデル

RepliGut Immune Co-Culture Kitによる共培養モデル
上部チャンバー上で腸上皮細胞を培養し、下部チャンバー内の免疫細胞(THP1由来マクロファージ)と共培養できます(図. Healthy)。LPSとIFN-γの刺激により炎症を誘導し、マクロファージの活性化、上皮バリア破壊、TEER(経上皮電気抵抗)低下、細胞生存率低下、サイトカイン放出といった自然免疫応答を再現できます(図. Inflamed)。


Altis Biosystems社 RepliGut Kit(腸モデル)について

RepliGut Kit概要

RepliGut Kitはヒト小腸・大腸モデルを作製するためのキットです。ヒトドナー由来の腸上皮幹細胞(小腸:十二指腸、空腸、回腸/大腸:上行結腸、横行結腸、下行結腸から選択)や専用培地など、モデル作製に必要な細胞や試薬が含まれており、簡便に、かつ高い再現性でヒト小腸・大腸の単層モデルを作製できます。

RepliGut kit概要

操作方法概略

細胞をトランスウェルに播種し、専用培地で培養することで、増殖期(0~5日)から成熟化(6日~)を経て、上皮バリア機能を有する単層を形成します。わずか2週間以内に各種実験結果が得られます。

操作概略

作製したモデルの特性(細胞腫)

細胞は増殖期の後、成熟期において腸上皮特有の吸収上皮、杯細胞、内分泌細胞に分化します。

作製モデルの特性(細胞腫)

単層構造の形成

成熟した細胞は極性のある単層構造を有します。

単層構造の形成

タイトジャンクションの形成

バリア機能の役割を担うタイトジャンクションを形成します(下左図:タイトジャンクションのマーカー分子の免疫染色像、下右図:TEER値測定例)。

タイトジャンクションの形成

微絨毛の形成

微繊毛の形成が確認できます。

微絨毛の形成

薬物代謝酵素/トランスポーターのCaco-2細胞との発現比較

Caco-2細胞と比較して代謝酵素(CYP3A4、CYP2C19、UGT1A1)やトランスポーター(SLC15A、ABCB1)など、薬物代謝・吸収に重要なタンパク質が発現しています。

薬物代謝酵素/トランスポーターのCaco-2との発現比較
  • RG Day2:RepliGut Planar Kit 培養2日目=増殖期
  • RG Day9:RepliGut Planar Kit 培養9日目=成熟期(タイトジャンクション形成)
  • RG Day11:RepliGut Planar Kit 培養11日目=成熟期(タイトジャンクション形成)

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特長

  • 健常および炎症状態を再現
    LPS+IFN-γ刺激により、健常および炎症状態の腸環境を再現
  • ヒトにより近いモデル
    初代ヒト腸管上皮細胞とTHP-1細胞由来マクロファージの共培養により、ヒト結腸の免疫上皮界面を再現
  • 多様な定量評価が可能
    TEER(経上皮電気抵抗)によるバリア機能評価、細胞生存率アッセイ、サイトカイン放出(G-CSF、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αなど)の測定
  • 高い再現性とスケーラビリティ
    96ウェルフォーマットに対応し、バッチ間の再現性も高く、スクリーニングに最適
  • 高い信頼性
    FDA承認薬であるアダリムマブやトファシチニブによる炎症抑制効果が確認された信頼性の高いモデル

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アプリケーション

炎症性腸疾患(IBD)治療薬候補のスクリーニング、腸上皮-免疫相互作用の解析、炎症時のバリア破綻や修復メカニズムの研究、バリア機能・毒性評価、炎症バイオマーカー探索、ハイスループット創薬研究などでご利用いただけます。以下にアプリケーションの一例を紹介します。

マクロファージの活性化によるバリア機能への影響

横行結腸(Transverse Colon/TC)単独もしくは横行結腸+THP1細胞の共培養モデルにLPS+IFN-γを用いて刺激した。TC+THP1細胞の共培養モデルにおけるLPS+IFN-γ刺激は、TEERの劇的な低下を引き起こし、腸の炎症をモデル化できることがわかる。

マクロファージの活性化によるバリア機能への影響

臨床承認されたIBD薬による腸管バリア機能の検証

炎症状態下(下図青グラフ)の共培養モデルにおいて、アダリムマブもしくはトファシチニブの投与はTEER値の低下を抑制し、上皮バリアの完全性を維持する。

臨床承認されたIBD薬による腸管バリア機能の検証

抗炎症療法の探索に向けたハイスループット腸-免疫共培養モデル(ポスター)

画像をクリックするとポスター(PDF)をご覧になれます。

抗炎症療法の探索に向けたハイスループット腸-免疫共培養モデル

使用文献

  • Peddibhotla, S., et al., bioRxiv, (2025). [PMID:40462955]

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別途必要な細胞・試薬

本製品には、RepliGut Planar 96 Well Transverse Colon(#RGP-96W-TC)とRepliGut Co-Culture THP-1 96 Well(#RGP-96W-TC-CCT)が含まれます。なお、THP-1細胞は別途ご購入いただく必要があります(下記参照)。また、THP-1 細胞については、事前の増殖、セルバンクの作製、継代などの作業が必要です。各キットに含まれる試薬などについては、RepliGut Planar 96 Well Transverse ColonもしくはRepliGut Co-Culture THP-1 96 Wellの価格表にあるデータシートをご確認下さい。

試薬名 Altis社推奨品のメーカーおよび商品コード(#)
THP-1 Cells ATCC®, ATCC® No.TIB-202TM
RPMI-1640 Medium ATCC®, ATCC® No.30-2001TM
GlutaMAX Gibco, #35050061
Primocin InvivoGen, #ant-pm-05
Fetal Bovine Serum (FBS) ATCC®, ATCC® No.30-2020TM
2-Mercaptoethanol (2-ME) Gibco(Thermo Fisher Scientific), #21985023
PMA (Phorbol 12-myristate 14-acetate) Sigma Aldrich(Merck), #5.00582
LPS (Lipopolysaccharide) InvivoGen, #tlrl-peklps
IFN-γ (Interferon gamma) Peprotech(Thermo Fisher Scientific), #AF-300-02

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プロトコル


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同意書

本製品をご購入いただく際には、専用のAltis Biosystems社 RepliGut Kitシリーズご購入に際する同意書をご提出いただく必要があります。同意書の内容を十分にご確認いただき、ご了承のうえ、ご署名下さい。ご署名および必要事項をご記入いただいた同意書は、メール(jutaku@funakoshi.co.jp)またはFAX(03-5684-6539)にて当社受託・特注品担当へお送り下さい。ご不明な点は、当社受託・特注品担当にお問い合わせ下さい。

有効期限について

本製品は、有効期限が非常に短い(メーカー出荷から1か月)製品です。お手元に届いたらできるだけ早く実験を開始することを推奨します。
すぐに実験が始められない場合は、製品を適切に保管し有効期限内に細胞の培養を開始して下さい。有効期限を過ぎて培養を開始した場合、製品の保証対象外となります。予定納期はメーカー出荷から2週間程度ですが、天候などの不可抗力な事情により延着し、製品到着後の有効期限が短くなる可能性があります。


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関連製品


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価格

[在庫・価格 :2025年10月15日 20時55分現在]

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詳細 商品名
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納期 文献数
RepliGut Planar Kit, 96 Well, Transverse Colon, Co-Culture THP1 for Commercial
3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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説明文
※受注発注品。※企業・営利団体にご所属の方に販売できる製品です。※ご注文時に専用の同意書の提出が必要です。※本商品は有効期限が非常に短いため、お手元に届いたらできるだけ早く実験を開始することを推奨します。
法規制等
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3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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※受注発注品。※国公立機関・大学にご所属の方にのみ販売できる製品です。※ご注文時に専用の同意書の提出が必要です。※本商品は有効期限が非常に短いため、お手元に届いたらできるだけ早く実験を開始することを推奨します。
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文献数: 0

説明文 ※受注発注品。※企業・営利団体にご所属の方に販売できる製品です。※ご注文時に専用の同意書の提出が必要です。※本商品は有効期限が非常に短いため、お手元に届いたらできるだけ早く実験を開始することを推奨します。
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納期 文献数
IFN-gamma, Human, Recombinant, Animal Free
2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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説明文
アニマルフリー:動物由来成分を含まない(Animal-free)。,産生:E.coli,純度:≥ 98% by SDS-PAGE gel and HPLC analyses.
別名:Immune Interferon, type II interferon, T cell interferon, MAF
別包装品 別包装品あり
法規制等
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2~3週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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説明文
アニマルフリー:動物由来成分を含まない(Animal-free)。,産生:E.coli,純度:≥ 98% by SDS-PAGE gel and HPLC analyses.
別名:Immune Interferon, type II interferon, T cell interferon, MAF
別包装品 別包装品あり
法規制等
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[在庫・価格 :2025年10月15日 20時55分現在]

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IFN-gamma, Human, Recombinant, Animal Free

文献数: 0

説明文 アニマルフリー:動物由来成分を含まない(Animal-free)。,産生:E.coli,純度:≥ 98% by SDS-PAGE gel and HPLC analyses.
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。