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細胞ベースのヒト小腸/大腸モデル作製キット RepliGut Kit

掲載日情報:2025/03/03 現在Webページ番号:72105

小腸および大腸それぞれ3つの領域由来の細胞から腸の単層モデルを簡単に作製できる、ヒト小腸/大腸モデル作製キットです。化合物の消化管毒性、動態(吸収、代謝、排出)、有効性、バリア機能への影響、抗炎症作用の評価など、臨床前薬物試験や創薬のスクリーニングに最適です。オルガノイドなどの複雑な構造を有するモデルに比べ、RepliGut Kitで作製した単層モデルは再現性の高いアッセイシステムを構築できます。

腸管組織からバイオバンク(凍結)の作製 RepliGut Kitによる培養 ヒト小腸/大腸モデルの作製
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RepliGut Kitの製品概要

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RepliGut Kitの製品概要

Altis Biosystems社ではヒトドナー組織から小腸(十二指腸、空腸、回腸)および大腸(上行結腸、横行結腸、下行結腸)の腸上皮幹細胞を採取し、増殖、凍結してストックしています。キットには細胞の他、専用培地(増殖培地および成熟化培地)、バッファー、プレート、トランスウェル(生体模倣スキャフォールドコート済み)などモデル作製に必要な試薬が含まれており、簡便かつ再現性の高い小腸/大腸の単層モデルを作製できます。



Web面談を承ります

製品の概要やアプリケーション例などをご説明いたします。まだご使用が決まっていない方もお気軽にご相談下さい。

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創薬研究と腸モデルについて

創薬研究における薬物動態

腸は、栄養素や水分の消化吸収を主な働きとするとともに、薬物の吸収・代謝・排泄にも関与します。そのため、腸における薬物動態の評価は創薬研究において重要な検討項目となっています。


薬剤による消化管毒性

経口あるいは全身投与される治療薬による消化管毒性は、最も一般的な有害事象です。消化管毒性を引き起こす薬剤は、多くの場合、消化管の増殖幹細胞や前駆細胞など上皮細胞のバリア機能に影響を与えます。消化管上皮のバリア機能の低下は、下痢、炎症、感染など、広範な臨床症状を引き起こします。これらの障害は、前臨床開発の後期になるまで発見されないことが多く、新薬開発における1つの課題となっております。


炎症性腸疾患

腸に関連する疾患である炎症性腸疾患(IBD)は世界中で大きな健康問題となっており、米国だけでも推定160万人が羅患してます。炎症性腸疾患には多くの治療法がありますが、効果がないことが多く、有害な副作用を引き起こすこともあります。


腸モデル

現在、腸の創薬における評価系では、ヒト結腸がん由来の株化細胞であるCaco-2や動物モデルが広く用いられています。しかし、各種トランスポーター・代謝酵素・受容体の発現量の違いや種差など、ヒト生体との差異があり、実際のヒト腸の薬物動態や消化管毒性、炎症性疾患を模倣できていません。また近年、動物愛護の観点から動物実験の代替となる評価モデルが期待されています。

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RepliGutのシステム(腸モデル)

プロトコル概要

細胞を融解し、トランスウェル上に直接播種します。独自の分化/成熟化培地を用いて培養することにより、増殖期を経て、腸上皮の主要な細胞型(吸収上皮細胞、杯細胞、内分泌細胞など)に分化します。


培養日数
増殖細胞 吸収上皮 胚細胞 内分泌細胞

作製モデルの特性

作製したモデルは、腸上皮に特有の極性のある単層構造を有し、バリア機能の役割を担うタイトジャンクションの形成、および微繊毛の形成が見られます。


極性のある単層構造 極性のある単層構造

Monolayer in cross section:

  • Apical(Actin)
  • Nuclei
  • Basal(Integrin-β4)
タイトジャンクションの形成 Tight Junction Proteins(E-cadherin、Nuclei) Tight Junction Proteins(ZO-1、Nuclei) Tight Junction Proteins(Occludin、Nuclei
  • E-cadherin
  • Nuclei
  • ZO-1
  • Nuclei
  • Occludin
  • Nuclei
微繊毛の形成 Microvilli Microvilli

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薬物代謝酵素/トランスポーターのCaco-2との発現比較

Drug metabolism and transporter gene expression analysis

Caco-2と比較して代謝酵素(CYP3A4、CYP2C19、UGT1A1)やトランスポーター(SLC15A、ABCB1)など、薬物代謝・吸収に重要なタンパク質が発現しています。

  • RG Day2:RepliGut Kit 培養2日目=増殖期
  • RG Day9:RepliGut Kit 培養9日目=成熟期(タイトジャンクション形成)
  • RG Day11:RepliGut Kit 培養11日目=成熟期(タイトジャンクション形成)

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特長

  • 小腸/大腸の複数領域のモデル作製可能:小腸から大腸までそれぞれ3つの領域(小腸:十二指腸、空腸、回腸/大腸:上行結腸、横行結腸、下行結腸)の細胞を選択できます。
  • Easy to Use:必要な細胞、培地、プレートなどすべて付属しています。
  • 単層構造:腸のモデルとして利用される腸オルガノイドは、複雑な構造と制御が難しい細胞の表面積から安定したアッセイ系を構築するのが困難ですが、本モデルは単層構造であるため、再現性の高いアッセイ系の構築が可能です。また、極性細胞である腸上皮細胞の頂端面と基底面のどちらからでもアクセスすることができます。
  • 目的に合わせて選べるプレート:12ウェルプレートおよび96ウェルプレートの2種類のフォーマットから選択が可能です。また、トライアルサイズ(96ウェルプレート×0.5)もあります。

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製品ラインナップ

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。なお、本製品をご購入いただく際には専用の同意書をご提出いただく必要があります。

組織 領域 商品コード
12ウェルプレート 96ウェルプレート トライアルキット
小腸 十二指腸(Duodenum) RGP-12W-DUO RGP-96W-DUO
空腸(Jejunum) RGP-12W-JEJ RGP-96W-JEJ RGP-96W-JEJ-Trial
回腸(Ileum) RGP-12W-ILE RGP-96W-ILE
大腸 上行結腸(Ascending Colon) RGP-12W-AC RGP-96W-AC
横行結腸(Transverse Colon) RGP-12W-TC RGP-96W-TC RGP-96W-TC-Trial
下行結腸(Descending Colon) RGP-12W-DC RGP-96W-DC


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適用例

消化管毒性、抗炎症作用の評価、ADME(吸収・分布・代謝・排泄)、宿主微生物相互作用などでご利用いただけます。詳細例はメーカーウェブよりご確認下さい。
以下のバナーをクリックするとメーカーウェブにリンクします。


消化管毒性 炎症 ADME
The Development of Human Primary Culture Systems to Model Inflammatory Signaling in Crohn’s Disease and Ulcerative Colitis Characterization of reproducibility and biological variability in a stem cell-derived human intestinal  epithelium model for applications in inflammation A sensitive and specific human primary stem cell-based in vitro assay for predicting gastrointestinal toxicity risk of therapeutic agents

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使用例

消化管毒性の試験例


臨床において重大な消化器系の副作用があることが知られるBortezomibとColchicineを用いて消化管毒性を検証した。

細胞の解凍からTEERおよびイメージングまでのタイムライン

経上皮電気抵抗(TEER)測定およびハイコンテントイメージング(総細胞数をDAPI、増殖細胞をEdU陽性細胞として測定)にて、バリア機能および細胞毒性を評価した。


細胞の解凍からTEERおよびイメージングまでのタイムライン

細胞の解凍からTEERおよびイメージングまでのタイムライン

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RepliGutシステムを用いた消化管毒性評価

バリア形成の測定(TEER測定)と細胞数の定量により、化合物の消化管毒性を最高血中濃度(Cmax)の2 log以内で検出できた。また、Colchicineの毒性は増殖細胞に限定されたのに対し、Bortezomibは非特異的に消化管上皮を破壊する作用があることが示された。

バリアの形成 バリア再生能力
Vehicle Bortezomib
バリアの形成-Bortezomib Total
(DAPI)
バリア再生能力-Vihicle-Total
バリア再生能力-Bortezomib-Total
バリア再生能力-Bortezomib
増殖性
(EdU+)
バリア再生能力-Vihicle-増殖性
バリア再生能力-Bortezomib-増殖性
Vihicle Colchicine
バリアの形成-Colchicineb Totall
(DAPI)


バリア再生能力-Colchicine
増殖性
(EdU+)
バリア再生能力-Vihicle-増殖性 バリア再生能力-Colchicine-増殖性

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抗炎症効果測定の例

炎症性サイトカイン(TNFα)を使用して炎症反応を誘発し、腸のバリア機能(TEER測定)、細胞毒性(LDH試験)、炎症反応(ELISAによるIL-8の測定)を指標として抗炎症剤の有効性を評価した。RepliGutシステムでは細胞融解からわずか3週間で候補薬剤の効果を評価することができる。


アッセイ概略図

アッセイ概略図

実験タイムライン

実験タイムライン

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RepliGut Kitによる腸単層構造を作製し成熟化後、

  •  候補阻害物質の添加
  •  炎症性サイトカイン添加(TNF-α)
  •  測定(細胞毒性:LDH試験、バリア機能評価:TEER測定、炎症応答:ELISAによるIL-8の測定)
を実施した。


細胞毒性 バリア機能 炎症反応
細胞毒性 バリア機能 炎症反応

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プロトコル

以下の画像または資料名をクリックすると、それぞれのプロトコルをご覧いただけます。

培養プロトコル

RepliGut Planar Kit Plating and Culturing Procedure(12-Well Format)

RepliGut Planar Kit Plating and Culturing Procedure(12-Well Format)

RepliGut Planar Kit Plating and Culturing Procedure(96-Well Format)

RepliGut Planar Kit Plating and Culturing Procedure(96-Well Format)

アプリケーション

RepliGut Planar Immunostaining Procedure

RepliGut Planar Immunostaining Procedure

RepliGut Planar Lucifer Yellow Permeability Assay

RepliGut Planar Lucifer Yellow Permeability Assay

Measuring TEER with EVOM

Measuring TEER with EVOM


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ポスター

下の画像をクリックするとRepliGutシステムを用いた評価系の実施例を確認できます。その他の文献情報はこちらをクリックして下さい。


クローン病と潰瘍性大腸炎の炎症シグナルのモデル化

The Development of Human Primary Culture Systems to Model Inflammatory Signaling in Crohn’s Disease and Ulcerative Colitis

炎症反応評価

Characterization of reproducibility and biological variability in a stem cell-derived human intestinal epithelium model for applications in inflammation

消化管毒性評価

A sensitive and specific human primary stem cell-based in vitro assay for predicting gastrointestinal toxicity risk of therapeutic agents

The Development of Human Primary Culture Systems to Model Inflammatory Signaling in Crohn’s Disease and Ulcerative Colitis Characterization of reproducibility and biological variability in a stem cell-derived human intestinal  epithelium model for applications in inflammation A sensitive and specific human primary stem cell-based in vitro assay for predicting gastrointestinal toxicity risk of therapeutic agents

薬剤による腸管障害の評価

Primary Human Small Intestine Monolayers For Assessing Drug-Induced Intestinal Liabilities In Vitro

炎症評価

Characterization of a novel human primary intestinal epithelial monolayer platform in response to a cytokine challenge

Primary Human Small Intestine Monolayers For Assessing Drug-Induced Intestinal Liabilities In Vitro Characterization of a novel human primary intestinal epithelial monolayer platform in response to a cytokine challenge

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キット内容

  • RepliGut growth medium
  • RepliGut maturation medium
  • RepliGut pre-coated transwell plate
  • Sterile phosphate buffered saline(PBS)
  • Cell dissociation solution
  • Region specific human intestinal epithelial cells*1
  • Culture plate sealing tape*2
  • Receiver plate*2

*1 キットにより内容は異なります。
*2 96ウェルフォーマットおよびトライアルキットのみ。

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同意書

本製品をご購入いただく際には、専用のAltis Biosystems社 RepliGut Kitご購入に際する同意書をご提出いただく必要があります。同意書の内容を十分にご確認いただき、ご了承のうえ、ご署名下さい。ご署名および必要事項をご記入いただいた同意書は、メール(jutaku@funakoshi.co.jp)またはFAX(03-5684-6539)にて当社受託・特注品担当へお送り下さい。ご不明な点は、当社受託・特注品担当にお問い合わせ下さい。


有効期限について

本製品は、有効期限が非常に短い(メーカー出荷から1か月)製品です。お手元に届いたらできるだけ早く実験を開始することを推奨します。
すぐに実験が始められない場合は、製品を適切に保管し有効期限内に細胞の培養を開始して下さい。有効期限を過ぎて培養を開始した場合、製品の保証対象外となります。予定納期はメーカー出荷から2週間程度ですが、天候などの不可抗力な事情により延着し、製品到着後の有効期限が短くなる可能性があります。


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関連製品 ヒト腸粘液

この他、RepliGut Mucus, Transverse Colon(#HMUC-TC/D5)(初代培養ヒト横行結腸上皮細胞から採取された腸粘液)もあります。

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FAQ

細胞の保存について


実験に関して


培地について


細胞について


Transwellについて


細胞の増殖について


細胞の成熟について


細胞の処理について


TEERについて

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価格

小腸

十二指腸(Duodenum)

[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Small Intestine (Duodenum)
3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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説明文
※受注発注品。※ご注文時に専用の同意書の提出が必要です。※本商品は有効期限が非常に短いため、お手元に届いたらできるだけ早く実験を開始することを推奨します。 小腸(十二指腸)の単層モデル作製キット(12ウェルプレート)。※受注発注品。
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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Small Intestine (Duodenum)
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[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]

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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Small Intestine (Duodenum)

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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Small Intestine (Duodenum)

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空腸(Jejunum)

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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Small Intestine (Jejunum)
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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Small Intestine (Jejunum), Trial Kit
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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Small Intestine (Jejunum)
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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Small Intestine (Jejunum)

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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Small Intestine (Jejunum), Trial Kit

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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Small Intestine (Jejunum)

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回腸(Ileum)

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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Small Intestine (Ileum)
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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Small Intestine (Ileum)

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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Small Intestine (Ileum)

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大腸

上行結腸(Ascending Colon)

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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Ascending Colon
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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Ascending Colon

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横行結腸(Transverse Colon)

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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Transverse Colon
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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Transverse Colon, Trial Kit
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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Transverse Colon
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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Transverse Colon

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下行結腸(Descending Colon)

[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]

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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Descending Colon
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※受注発注品。※ご注文時に専用の同意書の提出が必要です。※本商品は有効期限が非常に短いため、お手元に届いたらできるだけ早く実験を開始することを推奨します。 大腸(下行結腸)の単層モデル作製キット(12ウェルプレート)。※受注発注品。
法規制等
保存条件 室温,4℃,液体窒素中での保存 法規備考
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RepliGut Planar Kit, 96 Well, Descending Colon
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※受注発注品。※ご注文時に専用の同意書の提出が必要です。※本商品は有効期限が非常に短いため、お手元に届いたらできるだけ早く実験を開始することを推奨します。 大腸(下行結腸)の単層モデル作製キット(96ウェルプレート)。※受注発注品。
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[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]

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RepliGut Planar Kit, 12 Well, Descending Colon

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文献数: 0

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[在庫・価格 :2025年04月25日 20時55分現在]

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RepliGut Mucus, Transverse Colon 0.5mL
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初代培養ヒト横行結腸上皮細胞から採取された腸粘液。
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RepliGut Mucus, Transverse Colon 0.5mL

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