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ラージスケールでの長い遺伝子のノックインに最適なクローズドエンドdsDNA GenWand 二本鎖DNA受託作製サービス

掲載日情報:2023/08/24 現在Webページ番号:70868

二本鎖DNA(dsDNA)は、高い編集効率で遺伝子をノックインするためのCRISPR相同組換え修復(HDR)テンプレートとして使用されます。GenScript社のGenWand dsDNAは、非相同末端結合のリスクを緩和、およびノックイン精度の向上のために、共有結合的に末端をクローズドエンドとしたdsDNAの受託作製サービスです。スクリーニング、プロセス最適化および最大グラムレベルでのスケールアップにお勧めします。

CRISPR HDRベース遺伝子編集のメカニズム

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CRISPR HDRベース遺伝子編集のメカニズム

CRISPR/Cas9技術は、ターゲットDNA部位へ正確な二本鎖切断(DSBs)を生じさせるために汎用されています。ガイドRNA(gRNA)は、Cas9と複合体を形成した後、ターゲットDNA上のプロトスペーサー隣接モチーフ(PAM)配列を認識します。Cas9は、そのエンドヌクレアーゼ機能を発揮してDSBsを生じさせます。これは修復に2つのメカニズムを引き起こします。1つは非相同末端結合(NHEJ)で、DSB部位に変異を導入します。もう1つは相同組換え修復(HDR)で、ドナーDNAを切断部位に挿入し、遺伝子ノックインを作製できます。

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GenWand dsDNAとは

GenWand dsDNAの長所

  • PCR産物と比較して、低毒性、および高いノックイン効率を示します。
  • クローズドエンド構造によるNHEJ(非相同末端結合)発生を緩和します。
  • 不要なプラスミド配列の導入の回避します。
  • 長い配列のノックインを必要とする実験に理想的です。
  • ラージスケールでのスクリーニングとスケールアップに理想的です。
Open-end dsDNA vs Close-end dsDNA-figure_B

GenWand dsDNAとPCR dsDNAとの比較

GenWand dsDNAとPCR dsDNAとの比較 GenWand dsDNAとPCR dsDNAとの比較
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HEK293細胞のRAB11A locusにエレクトロポレーションで5 μgのPCR dsDNAおよびGenWand dsDNAを用いた場合のGFPのKI効率の比較

GenWand dsDNAは、PCRによって作製されたdsDNAよりも80%以上も高い(38% vs 21%)導入効率を示した。

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特長

  • プラスミドベースの生産プロセスで作製します。
  • 2~10 kbの作製に対応します。
  • μg~gレベルでの生産に対応します。
  • 不純物を最小限にする包括的な品質管理下で製造します。
  • エンドトキシン除去プロセスを搭載、エンドトキシン量 < 10 EU/mgを保証します。
  • さまざまな研究段階に応じた品質グレード(研究用)に対応いたします。
  • 50 μg/itemから承ります。

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費用概算


長さ(bp) 研究グレード 前臨床グレード
2,000~5,000 ¥252,000~ ¥287,000~
5,000~10,000 ¥308,000~ ¥350,000~

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製品仕様


品質試験の仕様 検出法 出荷判定基準 研究グレード 前臨床グレード
純度 アガロースゲル電気泳動 シングルバンド
配列の精度 サンガーシークエンシング 100%の配列アラインメント確認
光学密度(O.D.) 260 nm / 230 nm(分光光度計) ≧2.0
260 nm / 280 nm(分光光度計) 1.8~2.0
バイオバーデン TSAプレートでインキュベーション コロニー形成無し
エンドトキシン 定性TALアッセイ <10 EU/mg
タンパク質残留物 micro BCAタンパク質アッセイキット ≦50 μg/mg

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ご注文方法/価格/納期

追加のQCやその他のカスタマイズについてはご相談下さい。詳細は、下記当社受託・特注品担当までお問い合せ下さい。


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