各種セロタイプのAAVに有効な無毒性の形質導入促進試薬 AAVBlast Transduction Enhancer

細胞株から初代細胞や間葉系幹細胞まで幅広い種類の細胞において、さまざまなセロタイプ（血清型）のAAVの形質導入を促進する化学的なエンハンサーです。熱応答性ゲル化という独自の特性により、ウイルス粒子を確実に保護し、形質導入効率を向上させます。本試薬は非毒性で、in vivo実験にも適合します。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

本製品は、AAV2またはAAV6を用いたさまざまな細胞への形質導入効率を効果的に向上する。

GFPを発現するAAV2（A）およびAAV6（B）に、0.5～10 μlの本製品を添加または非添加（NT）のものを用いてNIH-3T3細胞に導入した。導入72時間後に、フローサイトメトリーによりGFP+細胞の比率を測定した。（さらに表示する☟）

GFPを発現するAAV2またはAAV6に本製品を添加し、プロトコルに従って37℃で10分間インキュベートして複合体を形成させた後に、それぞれの細胞に導入した。導入2時間後に血清含有培地を追加し、72時間後に結果を解析した。GFP⁺細胞の比率はフローサイトメトリーにより決定した。
本製品はさまざまな細胞において、AAV2およびAAV6により導入した遺伝子の発現を効果的に向上することが示された。

GFPを発現するAAV2またはAAV6に本製品を添加し、プロトコルに従って37℃で10分間インキュベートして複合体を形成させた後に、さまざまな細胞株やヒツジ間葉系幹細胞（oMSC）に導入した。導入2時間後に血清含有培地に交換し、72時間インキュベーション後に結果を分析した。細胞株の形質導入効率は蛍光顕微鏡により観察し、oMSCにおけるGFP⁺oMSCの割合はフローサイトメトリーにより測定した。本製品は、さまざまなセロタイプのAAVに容易に適応することが示された。

GFPを発現するAAV2ウイルス粒子に、本製品または他社エンハンサー（VE）をそれぞれのプロトコールに従って複合体化した。導入2時間後に血清含有培地を追加し、72時間後にGFP⁺細胞の割合をフローサイトメトリーにより測定した。本製品は他社製品と比べて、HEK293細胞株およびVero細胞株におけるAAV2の形質導入率の向上についてより優れた結果を示した。

□：NT  ■：VE  ■：AAVBlast

Vero細胞株およびHeLa細胞株は96ウェルプレートで培養し、ヒツジ間葉系幹細胞（oMSC）は24ウェルプレートに播種した。両細胞株およびoMSCに、さまざまな量の本製品とインキュベートしたAAV2を形質導入した。72時間インキュベートした後、それぞれの細胞に対応したアッセイキットにより細胞生存率を測定した。本製品は細胞株の生存率に影響せず、またoMSCにおいては増殖率の向上が見られた。

GFPを発現するAAV2およびAAV6のウイルス粒子に本製品またはPBSを添加し、プロトコルに従って37℃で10分間インキュベートして調製した複合体を4℃または37℃で1か月間保存した。7、15、30日後に複合体をHeLa細胞に形質導入し、導入72時間後に蛍光顕微鏡による観察およびフローサイトメトリーにより測定した。本製品はAAVウイルス粒子を保護し、安定化することが示された。ただし、この実験系において、本製品の添加量の増加による保護の強化は観察されなかった。