HOME>
試薬>
遺伝子工学>
タンパク質発現システム>
レポーターシステム>
3CLglow ＜Live Cell Assay for SARS-CoV-2 3CL Protease＞
HOME>
試薬>
タンパク質／酵素>
タンパク質解析>
酵素阻害物質スクリーニング／定量キット>
3CLglow ＜Live Cell Assay for SARS-CoV-2 3CL Protease＞
生細胞を用いてSARS-CoV-2の3CL Protease（Mpro）活性を測定できるキット 3CLglow ＜Live Cell Assay for SARS-CoV-2 3CL Protease＞
掲載日情報：2021/05/31 現在Webページ番号：70257
生細胞を用いて、SARS-CoV-2の3CL Protease（Mpro）の酵素活性を測定できるキットです。キットには3CL Proteaseと、3CL Proteaseと反応することで緑色蛍光を生じるバイオセンサー 3CLglowを発現する2種類のBacMam（改変型バキュロウイルス）が含まれています。ライブセルイメージングや蛍光プレートリーダーにより、3CL Proteaseの活性や阻害物質の評価・スクリーニングを行うことができます。またバイオセンサー発現用BacMamは、恒常的に赤色蛍光タンパク質も発現します。赤色蛍光を指標に試験化合物導入による細胞毒性／健康状態への影響をモニタリングすることも可能です。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
※ 本製品は、HEK293T細胞での実験に最適化されています。他の細胞での使用には最適化が必要です。
本製品のHEK293細胞への導入例
左上・左下：3CLglowのみを導入した細胞
右上・右下：3CLglowと3CL Proteaseを導入した細胞ポリプロテイン
追加しました。
- 3CL ProteaseとBacMamについて
- 特長
- 3CLglowの構造
- エンドポイントアッセイ例
- カイネティックアッセイ例
- キット内容
- 関連製品：COVID-19創薬研究用ライブセルアッセイ
- 価格
3CL ProteaseとBacMamについて
3CL Proteaseとは
SARS-CoV-2のウイルス複製は、3CL Protease (3CLpro, Main Protease ; Mpro）に依存しています。3CLproは、SARS-CoV-2のポリタンパク質1abを適切な部位で切断することによって、ウイルス複製に関わる非構造タンパク質（Non Structural Proteins ; NSPs）を生成します。3CLproを阻害した場合、ウイルス複製は阻害されます。3CLproはそれ自身、非構造タンパク質（NSP5）に含まれており、少なくともSARS-CoV-1においてはポリタンパク質1abからそれ自身が自動的に切断されます。
[参考文献] Muramatsu, T., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 113(46):12997–13002 (2016).
BacMamとは
BacMamは、蛍光センサーを発現する遺伝子をパッケージングした改変型バキュロウイルスで、初代培養、細胞株、iPSC由来細胞を含むほとんどの哺乳類細胞を効率的に形質導入することができます。ライフサイエンスおよび創薬の研究者は、長年にわたりBacMamを用いて標的レセプター、遺伝的にコード化されたバイオセンサー、およびその他の構造物を目的細胞に一過性に導入してきました。Montana Molecular社のバイオセンサー、レセプター, および光遺伝学ツールは、BacMamにパッケージ化されており、様々な利点を有しています
追加しました。
特長
- キットには3CL Proteaseと、3CL Proteaseの蛍光バイオセンサーを発現するためのBacMamが含まれています。
- エンドポイントアッセイおよびカイネティックアッセイのいずれも行うことが可能です。
- 測定波長
緑色蛍光：励起 506 nm（485～505 nm）／蛍光 517 nm（515～535 nm）
赤色蛍光：558 nm（540～580 nm）／蛍光 603 nm（600～700 nm）
追加しました。
3CLglowの構造
3CL Proteaseのバイオセンサーである3CLglowは、蛍光タンパク質mNeonGreenに3CL Protease認識領域とInhibitor tagが付加されています＊1。Inhibitor tagによって機能的な蛍光タンパク質としての立体構造形成が阻害され、蛍光が抑制されていますが、3CL ProteaseによってInhibitor tagが切除されると蛍光タンパク質の立体構造が変化して緑色蛍光を発します。
＊1 参考文献：Shaner, N. C., et al., Nat. Methods, 10(5):407-409(2013).
追加しました。
エンドポイントアッセイ例
エンドポイントアッセイのスケジュール例
3CL Protease阻害物質GC376を用いた解析例
HEK293T細胞を3CLglowおよび3CLpro Enzyme BacMamで処理し36時間培養後、GC376を添加して緑色蛍光強度の変化を調べた。細胞培養モデルにおけるGC376のSARS-CoV-2に対する複製阻害活性（EC50=0.9μM）＊2と同様の結果が示された（IC50=3μM）。
＊2 参考文献：Vuong, W., et al., Nat. Commun., 11(1):4282(2020).
追加しました。
カイネティックアッセイ例
HEK293T細胞を3CLglowおよび3CLpro Enzyme BacMamで処理し18時間培養後にGC376を添加した（n=3）。GC376添加直後から30分間隔で、22時間後まで緑色／赤色蛍光強度を測定した。GC376の濃度依存的に緑色蛍光強度が低下し3CL proteaseの活性が抑制されていることが分かる。一方、赤色蛍光はいずれの条件でも時間経過とともに蛍光強度が上昇していることから、GC376処理による細胞毒性は見られないことが分かる。
追加しました。
キット内容
| キット内容 | 濃度 | 説明 |
|---|---|---|
| 3CLglow BacMam | 2×1010 VG/ml in ESF921 Insect Culture Medium | 3CLproバイオセンサーと恒常的に赤色蛍光タンパク質を発現させるBacMam。 |
| 3CLpro Enzyme in BacMam | 2×1010 VG/ml in ESF921 Insect Culture Medium | CMVプロモーター制御下で3CLpro Enzymeを発現させるBacMam。 |
| Sodium butyrate | 500 mM in H2O | BacMamの発現を維持するための培地添加物。 |
※ 本製品に細胞や細胞培養用の96ウェルプレート（細胞接着性の黒色透明底プレートを推奨）は含まれていません。
追加しました。
関連製品：COVID-19創薬研究用ライブセルアッセイ
BacMam改変型バキュロウイルスベクターを用いることで、様々な細胞で蛍光標識ACE2を発現させることができます。この「Pseudo Host（偽型宿主細胞）」と、新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）スパイクタンパク質発現BacMam「Pseudo SARS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）」を組み合わせることにより、SARS-CoV-2を使わずにスクリーニングが可能になります。スパイクタンパク質には、オリジナルの武漢型のものと欧州型D614G変異体の2種類があります。
※ 詳細はこちらをご覧下さい。
追加しました。
価格
[在庫・価格 ：2024年04月27日 00時00分現在]
| 詳細 | 商品名 |
|
文献数 | ||
|---|---|---|---|---|---|
|
3CLglow |
|
0 | |||
|
3CLglow |
|
0 | |||
[在庫・価格 ：2024年04月27日 00時00分現在]
3CLglow
文献数： 0
- 商品コード：C1160G
- メーカー：MOM
- 包装：5ml
- 価格：¥166,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
SARS-CoV-2 3CL protease (3CLpro, Mpro) および3CL protease活性を評価する蛍光バイオセンサーを哺乳類培養細胞で発現するバキュロウイルスベクター。3CL protease阻害物質の評価に利用できます。蛍光タンパク質：mNeonGreen。 |
||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
| 掲載カタログ |
|
||
| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
3CLglow
文献数： 0
- 商品コード：C1160G
- メーカー：MOM
- 包装：30ml
- 価格：ご照会ください
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
SARS-CoV-2 3CL protease (3CLpro, Mpro) および3CL protease活性を評価する蛍光バイオセンサーを哺乳類培養細胞で発現するバキュロウイルスベクター。3CL protease阻害物質の評価に利用できます。蛍光タンパク質：mNeonGreen。 |
||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
| 掲載カタログ |
|
||
| 製品記事 | |||
| 関連記事 | |||
追加しました。
製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。