COVID-19創薬研究用ライブセルアッセイ Pseudo Host／Pseudo SARS-CoV-2 BacMam System
掲載日情報：2020/10/05 現在Webページ番号：69524
BacMam改変型バキュロウイルスベクターを用いることで、様々な細胞で蛍光標識ACE2を発現させることができます。この「Pseudo Host（偽型宿主細胞）」と、新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）スパイクタンパク質発現BacMam「Pseudo SARS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）」を組み合わせることにより、SARS-CoV-2を使わずにスクリーニングが可能になります。
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- 使用例
- 製品外観
- Pseudo Host／Pseudo SARS-CoV-2 BacMam Systemを用いたウイルス侵入の解析
- MEMO Pseudo Host（偽型宿主）とPseudo SARSS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）
- Pseudo SARS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）
- Pseudo Host（偽型宿主）
- 蛍光色素の特性
- プロトコル
- 価格
使用例
ACE2発現A549細胞によるBacMam Pseudo SARS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）濃度の減少
抗スパイク抗体によるBacMam Pseudo SARS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）の阻害
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製品外観
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Pseudo Host／Pseudo SARS-CoV-2 BacMam Systemを用いたウイルス侵入の解析
Pseudo Host／Pseudo SARS-CoV-2 BacMam System
赤／緑レシオメトリックアッセイ
偽型宿主は、ACE2タンパク質と赤色蛍光タンパク質の両方をHEK 293細胞に導入して作製します。作製した偽型宿主にmNeonGreen蛍光タンパク質を発現する偽型ウイルスに導入し、その後24時間に渡り正常に侵入すると緑と赤の比率が高くなります。一方、侵入の遮断に成功すると、緑と赤の比率が低くなります。自動蛍光プレートリーダーにより蛍光を検出し、ウイルス侵入の阻害化合物またはタンパク質をスクリーニングすることができます。
緑色蛍光アッセイ
上記のレシオメトリックアッセイには2日を要し、2つの異なる蛍光タンパク質が含まれます。単一チャネルでウイルスの侵入を検出可能で、より高速なシグナルを作製するために、ACE2タンパク質とフルオロフォアを形成するmNeonGreenの両方を発現する偽型宿主を作製します。mNeonGreenの2番目の部分を発現する偽型ウイルスのBacMamベクターは、偽型宿主が偽型ウイルスと相互作用により完全に機能する蛍光タンパク質を生成します。
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MEMO Pseudo Host（偽型宿主）とPseudo SARSS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）
BacMamとは
BacMamは、蛍光センサーを発現する遺伝子をパッケージングした改変型バキュロウイルスで、初代培養、細胞株、iPSC由来細胞を含むほとんどの哺乳類細胞を効率的に形質導入することができます。ライフサイエンスおよび創薬の研究者は、長年にわたりBacMamを用いて標的レセプター、遺伝的にコード化されたバイオセンサー、およびその他の構造物を目的細胞に一過性に導入してきました。Montana Molecular社のバイオセンサー、レセプター, および光遺伝学ツールは、BacMamにパッケージ化されており、様々な利点を有しています
Pseudo Host（偽型宿主）とは
BacMam偽型ウイルスは、ACE2およびTMPRSS2タンパク質を発現するヒト気道細胞および他の初代細胞に侵入します。しかし、すべての細胞がこれらのACE2タンパク質を発現するわけではありません。偽型宿主への偽型ウイルスの導入のため、BacMam発現ベクター中で赤色および緑色の蛍光ACE2およびTMPRSS2を組み込んでいます。ACE2・TMPRSS2発現BacMamで細胞を形質導入した翌日には、Pseudo Host／Pseudo SARSS-CoV-2アッセイの準備が整います。偽型ウイルスが細胞に侵入すると核に明るい蛍光が発生し、ウイルス侵入が阻止された場合にはこのシグナルが抑制されます。偽型宿主を作製する重要なメリットは、ハイスループットスクリーニングと互換性のある標準的な細胞株を使用し、化合物のスクリーニングを行うことができることです。通常の場合、ワークフローまたは安全規制要件の変更を最小限に抑えることができ、数日以内に阻害物質のスクリーニングを行えます。
Day 1：偽型宿主細胞の構築
Pseudo SARS-CoV-BacMam（偽型SARS-CoV-2）とは
Pseudo SARS-CoV-2は、スパイクタンパク質についてで偽型化したBacMamベクターです。偽型ウイルスは、ACE2タンパク質およびTMPRSS2タンパク質との相互作用を通じて宿主細胞に入ります。細胞内に入ると、BacMamは複製されずに宿主細胞の核で明るい赤色または緑色の蛍光を発現する遺伝的にコード化された蛍光レポーターを有しています。一方、ウイルス侵入がブロックされると、宿主細胞の核は暗くなります。
Day 2：偽型ウイルスアッセイ
SARS-CoV-2プロテアーゼバイオセンサーの構築
偽型宿主に導入するBacMamベクターは、SARS-CoV-2 Mproプロテアーゼの蛍光バイオセンサーと切断部位を発現するように設計されます。偽型宿主は、SARS-CoV-2への暴露から数分以内に明るい緑色の蛍光を発します。
参考文献
- Tai, W., et al., Cell. Mol. Immunol., doi:10.1038/s41423-020-0400-4 (2020). [download⇒
]
抗体スクリーニング
偽型SARS-CoV-2ウイルス（Pseudo SARS-CoV-2）は、SARS-CoV-2と同じトポロジーでウイルス表面膜に全長スパイクタンパク質を提示するエンベロープウイルスです。このスパイクタンパク質は非常に濃縮されており、膜に対して垂直に配向します。そのため、複数の抗体結合部位が利用可能で、構造的に適切な方法で提示されます。オリジナルの武漢の参照標本で特定された配列とヨーロッパで最初に出現し武漢株と急速に置き換わった新しいD614G変異体の2種類のバージョンの利用が可能です。
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Pseudo SARS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）
製品の種類
商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。
| 品名 | Pseudo SARS-CoV-2 Reporter | ||
|---|---|---|---|
| Green | Red | ||
| 蛍光標識色素 | mNeonGreen | Santaka Red | |
| 測定波長 | Ex 506 nm／Em 517 nm | Ex 558 nm／Em 603 nm | |
| 商品コード | C1110G | C1110R | |
| キット内容 | Pseudo SARS-CoV-2 | ●（Green NLS） | ●（Red NLS） |
| Sodium butyrate | ● | ● | |
特長
- 生細胞における宿主と病原体の相互作用を検出することができます。
- ACE2を介するウイルス侵入の阻害物質の特定できます。
- SARS-CoV-2スパイクD614Gに対する中和抗体のスクリーニングも行えます。
- BSL-1の安全要件で費用効果の高いスクリーニングが行えます。
- プロモーター：CMV
- 適用：ハイコンテントイメージング、蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー、蛍光プレートリーダー
※ キットには96 well黒色透明底面マイクロプレート（細胞接着因子）は含まれていません。測定には、蛍光プレートリーダーが必要です。
※ キットには96 well黒色透明底面マイクロプレート（細胞接着因子）は含まれていません。測定には、蛍光プレートリーダーが必要です。
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Pseudo Host（偽型宿主）
緑色蛍光色素（mNeonGreen）または赤色蛍光色素（Santaka Red）標識したACE2を発現するBacMamベクターです。気道細胞やHEK293を含む様々な哺乳動物細胞に導入して「Pseudo Host（偽型宿主）」に転換することができ、24時間以内に蛍光プレートリーダーやイメージングシステムで解析が可能になります。また、Pseudo SARS-CoV-2 Reporterと組み合わせることにより、Pseudo SARS-CoV-2ウイルス侵入アッセイを行うことができます。
※ 本製品は、接着性のA549細胞において、蛍光プレートリーダーでの検出に最適化されています。浮遊細胞や、他の細胞対応にも適合させることができますが、TMPRSS2（#C1130N）、ニューロピリン-1（#C1140R）、またはカテプシン-L（#C1150N）などの追加の宿主因子が必要になる場合があります。
使用例
製品の種類
商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。
| 品名 | Angiotensin Converting Enzyme 2 (ACE2) | ||
|---|---|---|---|
| Green | Red | ||
| 蛍光標識色素 | mNeonGreen | Santaka Red | |
| 測定波長 | Ex 506 nm／Em 517 nm | Ex 558 nm／Em 603 nm | |
| 商品コード | C1100G | C1100R | |
| キット内容 | Fluorescent labeled ACE2 in BacMam | ●（mNeonGreen） | ●（Santaka Red） |
| Control Fluorescent Protein in BacMam | ●（mNeonGreen） | ●（Santaka Red） | |
| Sodium butyrate | ● | ● | |
偽型宿主（Pseudo Host）の作製フロー
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蛍光色素の特性
蛍光特性
※ キットには96 well黒色透明底面マイクロプレート（細胞接着因子）は含まれていません。測定には、蛍光プレートリーダーが必要です。
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プロトコル
下図をクリックすると、Pseudo Host／Pseudo SARS-CoV-2 BacMam Systemのプロトコル（）をご覧いただけます。
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価格
Pseudo SARS-CoV-2（偽型SARS-CoV-2）
[在庫・価格 ：2024年04月26日 19時15分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||
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Pseudo SARS-CoV-2 Green Reporter |
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Pseudo SARS-CoV-2 Green Reporter |
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Pseudo SARS-CoV-2 Red Reporter |
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本製品は取扱中止になりました | 0 | ||
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Pseudo SARS-CoV-2 Red Reporter |
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本製品は取扱中止になりました | 0 | ||
[在庫・価格 ：2024年04月26日 19時15分現在]
Pseudo SARS-CoV-2 Green Reporter
文献数： 0
- 商品コード：C1110G
- メーカー：MOM
- 包装：5ml
- 価格：¥166,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 |
新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）のスパイクタンパク質を外套するシュードタイプバキュロウイルスです。培養細胞を用いた中和抗体のスクリーニングに利用できます。スパイクタンパク質：武漢株, レポーター遺伝子：mNeonGreen。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 4℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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Pseudo SARS-CoV-2 Green Reporter
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- 商品コード：C1110G
- メーカー：MOM
- 包装：30ml
- 価格：ご照会ください
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 |
新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）のスパイクタンパク質を外套するシュードタイプバキュロウイルスです。培養細胞を用いた中和抗体のスクリーニングに利用できます。スパイクタンパク質：武漢株, レポーター遺伝子：mNeonGreen。 |
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| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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Pseudo Host（偽型宿主）
[在庫・価格 ：2024年04月26日 19時15分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||
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Angiotensin Converting Enzyme 2 (ACE2)-Green |
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Angiotensin Converting Enzyme 2 (ACE2)-Green |
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Angiotensin Converting Enzyme 2 (ACE2)-Red |
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0 | |||
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Angiotensin Converting Enzyme 2 (ACE2)-Red |
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0 | |||
[在庫・価格 ：2024年04月26日 19時15分現在]
Angiotensin Converting Enzyme 2 (ACE2)-Green
文献数： 0
- 商品コード：C1100G
- メーカー：MOM
- 包装：5ml
- 価格：¥94,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 |
。 哺乳類培養細胞でACE2を発現させるバキュロウイルスベクターです。レポーター遺伝子：mNeonGreen。 |
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| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
| 掲載カタログ |
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- 価格：¥189,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 |
。 哺乳類培養細胞でACE2を発現させるバキュロウイルスベクターです。レポーター遺伝子：mNeonGreen。 |
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| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 法規備考 | ||
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- 商品コード：C1100R
- メーカー：MOM
- 包装：5ml
- 価格：¥94,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 |
。 哺乳類培養細胞でACE2を発現させるバキュロウイルスベクターです。レポーター遺伝子：Santaka Red。 |
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| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 4℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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Angiotensin Converting Enzyme 2 (ACE2)-Red
文献数： 0
- 商品コード：C1100R
- メーカー：MOM
- 包装：30ml
- 価格：¥189,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：カルタヘナ該当品
| 説明文 |
。 哺乳類培養細胞でACE2を発現させるバキュロウイルスベクターです。レポーター遺伝子：Santaka Red。 |
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| 法規制等 | カルタヘナ該当品 | ||
| 保存条件 | 4℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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