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ピルビン酸脱水素酵素(PDH)活性を測定するキット QuantiChrom Pyruvate Dehydrogenase Assay Kit

掲載日情報:2024/03/05 現在Webページ番号:70223

組織ホモジネートや細胞ライセートのような生体試料に含まれるピルビン酸脱水素酵素(Pyruvate dehydrogenase, PDH)活性を、比色法により迅速かつ簡便に定量するキットです。

QuantiChrom Pyruvate Dehydrogenase Assay Kit(#DPDH-100)の検量線例

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QuantiChrom Pyruvate Dehydrogenase Assay Kit(#DPDH-100)の検量線例

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ピルビン酸脱水素酵素(Pyruvate Dehydrogenase, PDH)とは

PDHはピルビン酸の脱炭酸を触媒し、チアミンピロリン酸(Thiamine pyrophosphate、TPP)依存的な反応を介して、アセチル化ジヒドロリポアミドを形成する酸化還元酵素です。PDHはPDH複合体のE1ユニットであり、最終的にアセチル-CoAを生成します。PDH複合体は、解糖系とクエン酸回路を結び付けています。

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測定原理

本アッセイの測定原理は、フェナジンメトサルフェート(Phenazine Methosulfate、PMS)の共役反応において、テトラゾリウム塩であるMTTが還元され、565 nmに吸収極大を有する還元MTTが形成されることに基づいています。形成された紫色の発色強度は、PDH活性に比例します。

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特長

  • PDH活性を簡便かつ直接的に定量でき、ハイスループット測定が可能です。
  • フォーマット:96ウェルプレート
  • 測定時間:約20分
  • 測定試料:組織ホモジネート、細胞ライセートなど
  • 測定方法比色
  • 測定波長:565 nm
  • 測定範囲:0.87~278 U/L*
  • アッセイ数:100 tests

アッセイ条件下(pH 7.4)で1分間に1 μMのピルビン酸のアセチル化ジヒドロリポアミドへの変換を触媒する酵素活性を1Uと定義します。


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h2 class="hdg-A" PDH活性の算出 /h2

PDH Activity = ΔODS−ΔODB/εmtt・ℓ × Reaction vol.(μl)/t(min)・Sample vol.(μl) × n

= ΔODS−ΔODB/ODCAL−ODH20 × 273/t(min) × n(U/L)

  • ΔODS:インキュベーション20分後の試料のOD値(ODS)から0分の試料のOD値(OD0)を差し引いた値
  • ΔODB:インキュベーション20分後のブランク(酵素無添加)のOD値(ODS)から0分の試料のOD値(OD0)を差し引いた値
  • ΔODCAL:インキュベーション20分後のキャリブレーターのOD値
  • ΔODH20:インキュベーション20分後の水のOD値
  • Reaction vol.:100 μl
  • Sample vol.:20 μl
  • n:試料の希釈係数

εmttおよびは、それぞれモル吸光係数および光路長を示します。


酵素活性の定義

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キット内容

  • Assay buffer
  • PMS solution
  • MTT solution
  • TPP solution
  • Pyruvate
  • Calibrator

キットには透明・平底96ウェルプレートは含まれていません。別途ご用意下さい。
測定にはマイクロプレートリーダーが別途必要です。


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価格

[在庫・価格 :2024年04月29日 13時55分現在]

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QuantiChrom Pyruvate Dehydrogenase Assay Kit
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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