様々なプライミング方法に適応した次世代のcDNA合成キット qScript Ultra Flex Kit

一本鎖cDNAを迅速かつ効率的に合成できるキットです。最先端のRNase H欠損逆転写酵素を使用することで、様々なプライミング方法に適応し、かつ熱安定性、迅速性、酵素効率が高く、また阻害物質に対する耐性を兼ね備えています。キットには、RNAテンプレートと目的遺伝子に特異的なプライマーを除いた、必要なすべての試薬が含まれています。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）肝臓組織切片より抽出した分解度の高いRNA試料から、それぞれのMaster mixを使用してランダムプライマーを用いた一本鎖cDNA合成反応を実施し、それぞれの収率をCqで比較した。本製品は、幅広いRNA試料量において、比較した他の3つのMaster Mixに比べて優れた収率でcDNAが得られることが示された。

本製品、およびその他3種類のcDNA合成キットを用い、それぞれの推奨プロトコルに従って阻害物質の存在下と非存在下において、ランダムプライマーを用いて標準的なcDNA合成反応を行った。本製品を用いた場合、阻害物質含有試料においても大きなCqシフトは見られず、数種の阻害物質の存在下でも高収率のcDNA産物を維持することが示された。

本製品または他社の2種類のcDNA合成キットを用い、ラット脳由来total RNA（A）およびヒトtotal RNA（B）を試料とし、それぞれ目的遺伝子特異的プライマー（AはラットDynein、BはヒトSYNE1）を用いて、一本鎖cDNA合成を行った。その後、+HについてはRNase H処理を行った（Master Mix Bは酵素がRNase H活性を有する）。次に、得られたcDNA産物の一部をrepliQa HiFi ToughMixを使用してPCR増幅した（AはラットDyneinの12.5 kb部分、BはヒトSYNE1の17.7 kb部分）。
長鎖cDNA標的配列のPCR増幅の可否とその産物収量は、長鎖cDNAを合成する逆転写酵素の能力を反映している。本製品とrepliQa HiFi ToughtMixを組み合わせた場合、短時間（逆転写はA、B共に10分、PCRは、Aは54分、Bは1時間24分）で、RNase H処理なしでも、高収量で産物が得られる。

Oligo (dT) primer と Random primer、 遺伝子特異的プライマー用のエンハンサーが付属しています。

＊1 qScript ultra reaction mixは、バッファー、マグネシウム、dNTPsおよびqScript Ultra RTを最適に配合したMaster mixです。
＊2 Oligo(dT) primersは、mRNAの3' poly(A)テールに特異的にアニーリングし、長鎖のcDNA合成時に用います。目的遺伝子特異的な逆転写を行う場合は、遺伝子特異的プライマーを別途用意して下さい。
＊3 Random primersは、Oligo(dT) primerよりも得られるcDNA鎖が短くなりますが、3'末端にpoly(A)テールを有さないRNAや、分解した5'側のRNA断片から、より高収量でcDNAが得られます。また、oligo(dT)プライマーとランダムプライマーを組み合わせた混合プライマーを用いることにより、完全で偏りのない1本鎖cDNAを得られます。