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免疫アッセイの非特異的結合や夾雑物による干渉を抑制するバッファー LowCross-Buffer

掲載日情報：2025/05/27 現在Webページ番号：70081

キャンドアバイオサイエンス /
CANDOR Bioscience GmbH
[メーカー略称：CND]

ELISAやイムノブロッティングなどの免疫アッセイにおける抗体の非特異的結合、交差反応およびマトリックス干渉を最小化し、検出感度や信頼性を向上することができる試料や抗体の希釈用バッファーです。

※ ☞ CANDOR Bioscience社のその他のイムノアッセイ用バッファーについてはこちらをご覧下さい。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

ELISAでの感度の比較

LowCross-Buffer製品外観

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非特異的結合の阻害効果 低 中 高
品名 LowCross-Buffer MILD LowCross-Buffer LowCross-Buffer STRONG
包装 50 ml 125 ml 500 ml 50 ml 125 ml 500 ml 50 ml 125 ml 500 ml
商品コード 101050 101125 101500 100050 100125 100500 102050 102125 102500


LowCross-Bufferの種類の選択ガイド

  • LowCross-Buffer（非特異的結合の阻害効果：中）は、「親和性フィルター」として機能し、抗体とそれぞれの抗原との間の高親和性相互作用には影響を与えずに、低～中親和性相互作用を選択的に阻害します。これにより、「真の」シグナルは変化せずに、バックグラウンドと干渉が低減します。
  • 一部の抗体は標的に対する親和性が低いため、LowCross-Buffer条件下ではうまく機能しません。このような抗体を用いたアッセイでは、LowCross-Buffer MILD（非特異的結合の阻害効果：低）のご使用をお勧めします。
  • 一部のアッセイでは、標準のLowCross-Bufferを使用しても大きなバックグラウンドや干渉が生じ、問題となることがあります。これらのアッセイでは、不要な相互作用をより多く除去できるLowCross-Buffer STRONG（非特異的結合の阻害効果：高）のご使用をお勧めします。

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特長

  • リン酸塩を含まない調製済みのバッファーで、試料や抗体の希釈バッファーとして使用できます。
  • 抗体の非特異的結合、マトリックス干渉による悪影響、および抗体の低～中程度の親和性による交差反応を最小化します。
  • 血清や血漿試料由来のマトリックス効果を減少し、測定物質の検出には影響を及ぼさないため、検出感度および信頼性を向上することができます。
  • Ready-to-useで、そのまま希釈用バッファーとして使用できます*。
  • pH：7.2±0.2
  • 保存料：＜0.0014％（w/w） [CMIT/MIT（3：1）の反応質量換算の含有率]

＊ ELISAおよびタンパク質アレイでは、1：2またはそれ以上に希釈して使用することができます。標準試料と試料は、厳密に同じ希釈率で処理する必要があります。一次抗体および二次抗体の希釈に使用する場合は、抗体の製品データシートの推奨希釈率に従って、希釈率を決定して下さい。
※ 本製品はアッセイバッファーとして使用可能ですが、ELISAのウェルやメンブレンなどの表面は別にブロッキング試薬で処理する必要があります。ブロッキング試薬には、The Blocking Solution（#110050（50 ml）、#110125（125 ml）、#110500（500 ml））のご使用をお勧めします。

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用途

  • ELISA：試料および検出用抗体の希釈
  • 免疫組織染色：一次抗体、二次抗体の希釈
  • ウエスタンブロッティング：一次抗体、二次抗体の希釈
  • タンパク質アレイ：試料および検出用抗体の希釈
  • 洗浄バッファーとしても使用できます。特にイムノPCRなどの困難なアッセイや干渉の影響を受けやすいアッセイには有用です。

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比較例

ELISA

感度の向上

ELISAでの感度の比較

LowCross-Buffer不使用（左）の場合に比べて、使用した場合（右）では、測定範囲が拡大し、さらにLOD：0.051→0.022、LOQ：0.152→0.065へと低減し、感度の向上を確認した。免疫前血清における交差反応の排除とバックグラウンドの低下が確認できた。

  • 抗原コートの有無（プレート）
    1～4列：有
    5列：無
  • 試料
    1～4列（A～G）：免疫血清（1：50～1：36,450）
    1～4列（H）：未免疫血清
    5列（A～G）：未免疫血清（1：50～1：36,450）
    5列（H）：未免疫血清

疑陽性の削減

偽陽性の削減

LowCross-Buffer不使用（上）の場合のコントロールウェル（A1～A12）とブランクウェル（H1～H12）において偽陽性のウェルの存在が観察されたが、LowCross-Buffer使用（下）の場合では偽陽性はほとんど確認できなかった。

※ Dr. Ch. Specht（PARA BioScience社、グローナウ）提供

CV（％）の低減

CV（％）の低減

PBS/BSA Tween（左）とLowCross-Buffer（右）を使用し、ヒト血漿の干渉をCV（％）で比較した（n=96、全測定範囲を通して決定した）。LowCross-Bufferを使用した場合、干渉効果の抑制によるCVの大幅な低減が観察された。このため、FDA（米国食品医薬品局）が、"Guidance for Industry-Bioanalytical Method Validationで規定している、正確性および精度が最大15％の基準を満たすことができた。
※ Dr. P. Rauch（CANDOR Bioscience社）提供

バックグラウンドの低減

バックグラウンドの低減

AP標識検出用抗体を使用した場合、試料なしでは捕捉用抗体と非特異的かつ直接的に結合する（左）。LowCross-Bufferを用いることにより非特異的な結合を抑制し、アッセイのバックグラウンドが大幅に低減した（右）。両図は、試料を添加しないブランク値を示している。
※ M. Braun, PhD. H.-P. Wendel（胸部、心臓、血管外科クリニック,テュービンゲン大学病院研究所）提供

マトリックス効果の排除

マトリックス効果の排除

ウサギ血漿中のCRP（C-reactive protein）の検出におけるマトリックス効果を示した。血漿中のマトリックスタンパク質は、測定試料であるCRPをマスクする。LowCross-Bufferの使用により、測定試料のマスクを除き、感度と検出限界は3倍に向上することがわかる。
※ A. Zellmer, Dr. P. Rauch（CANDOR Bioscience社）提供

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Protein Array

バックグラウンドの低減

Protein Array

LowCross-Bufferを不使用（左）または使用（右）してスライド上に複数の測定試料に対する抗体をスポットし、それぞれのS/N比を測定した。LowCross-Bufferの不使用の場合のS/N比が3.42に対して、使用した場合のS/N比は17.26となり、著しい向上が見られた。
※ Dipl. Chem. N. Dankbar（ヴェストファーレン・ヴィルヘルム大学）提供

ウエスタンブロッティング

非特異的結合の抑制

ウエスタンブロッティング

LowCross-Buffer（左）またはTTBS （右）を使用し、サイトケラチン4、5、および6をウエスタンブロッティングで分析し、非特異的な結合と交差反応を検出した。LowCross-Bufferを使用した場合では、予想されるバンドが明確に検出された。


  • Lane 1、1'：肝細胞ライセート
  • Lane 2、2'：HeLa細胞ライセート

※ Dr. D. Sperling （MACHEREY-NAGEL社, ドイツ・デューレン）提供

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イムノPCR

非特異的結合の抑制（Lane 5～7）

イムノPCR

LowCross-Bufferを不使用（左）または使用 （右）し、Staphylococcus属由来のエンテロトキシンAをイムノPCRを用いて検出した。LowCross-Bufferを使用した場合、不使用の場合に見られた非特異的な結合による偽陽性の結果は完全に低減された。


※ A. Fischer, PhD. K. Becker（医療微生物学研究所, ミュンスター大学病院、ドイツ）提供

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HAMA-ELISA

HAMA（Human Anti-Mouse Antibodies）およびRF由来の干渉に対するLowCross-Bufferの有効性を確認するために、市販のHAMAおよびRF陽性のヒト血液試料（in. vent diagnostica社、ドイツ）を試料として、LowCross-Bufferを不使用（左）または使用した場合（右）において、HAMA-ELISA Kit（Medac社、ドイツ、CE認証済み）でHAMA血清およびRF由来の干渉を定量した。

HAMAによる干渉の抑制

HAMAによる干渉の抑制

リウマチ因子（RF）による干渉の抑制

リウマチ因子（RF)に対する活性

HAMA陽性ヒト血清パネル

HAMAは、マウスの免疫グロブリンを認識するヒト抗体で、測定において疑陽性や疑陰性の要因となる。
HAMAによる干渉に対するLowCross-Bufferの有効性を確認するために、in.vent diagnostica社（ドイツ）とScantibodies社（米国）のHAMA陽性ヒト血液血清パネルを試料として用いた。下図では、HAMA-ELISAで陽性と判定された血清試料のデータのみを示しているが、LowCross-Bufferを使用して効果を示さなかったHAMA陽性血清はなかった。LowCross-Bufferにより、HAMA陽性試料の干渉をバックグラウンドレベル（＜40 ng/ml、HAMA ELISAマニュアルに基づく指標）にまで低減した。

CV（％）の低減

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FAQ

Q-1. LowCross-Buffer固有の効能は何ですか？☟

Q-2. どうしてLowCross-Bufferはマトリックス効果を低減できるのですか？☟

Q-3. LowCross-Bufferをどのように使用すべきですか？☟

Q-4. LowCross-Bufferを希釈する必要はありますか？☟

Q-5. LowCross-Bufferはモノクローナル抗体やポリクローナル抗体とともに使用できますか？☟

Q-6. バッファー組成は、酵素的な検出の呈色反応に影響を及ぼしますか？☟

Q-7. サンドイッチELISAでHRP標識二次抗体を使用する際に高いバックグラウンドが出てしまいます。その理由とLowCross-Bufferが改善に役立つか教えて下さい。☟

Q-8. タンパク質アレイにおいて蛍光色素とともにLowCross-Bufferを使用できますか？☟

Q-9. LowCross-Bufferは何回くらい凍結および融解できますか？☟

Q-10. ウエスタンブロッティングのメンブレンやELISAプレートなどの表面において、ブロッキング溶液をLowCross-Bufferに変更することは可能ですか？☟


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（テクニカルサポート 試薬担当）

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