グルタチオン S-トランスフェラーゼ活性測定キット QuantiChrom Glutathione S-Transferase Assay Kit

本アッセイは、GSHとGST基質であるCDNB（1-クロロ-2,4-ジニトロベンゼン）との間のGSTの酵素反応に基づいています。GSTの触媒によるGS-DNBの形成により、340 nmで分光光度的に検出できるジニトロフェニルチオエーテルが生成されます。その340 nmにおける吸光度の増加率は、試料中のグルタチオン S-トランスフェラーゼ活性に正比例します。

アッセイ条件の下で、1分あたり1 μMのCDNBとの結合する酵素量を1ユニットと定義します。

脱切片前に組織をPBS（pH 7.4）で洗浄し、血液を除去する。組織50 mgを冷却した100 mM リン酸カリウム（pH 7.0）＋2 mM EDTA 250 μlに入れ、Dounce homogenizerで破砕する。細胞を溶解するために、破砕組織を-80℃で冷凍する。冷凍後、融解し、試料を10,000×gで15分間遠心分離し、上清を除去する。

4℃、2,000×g、5分間の遠心分離により約4×10⁶細胞を得る。接着細胞の場合、タンパク質分解酵素を用いての細胞回収を避け、天然ゴムまたはプラスチックのスクレーパーを用いる。細胞を100 mMリン酸カリウム（pH 7.0）＋2 mM EDTA溶液中でホモジェナイズまたは超音波処理する。4℃、10,000×gで15分間遠心分離し、上清を除去する。

※ すべての試料は-20～-80℃で1ヶ月間以上保存することができます。

※ キットには、透明平底96 wellマイクロプレートは含まれていません。別途ご用意下さい。カイネティック反応のため、Working reagent（WR）を標準試料や試料に迅速に追加し、軽くかつ完全に混合する必要があります。そのため、マルチチャンネルピペットの使用を推奨します。