P450脱メチル化活性測定キット DetectX P450 Demethylation Fluorescent Detection Kit
掲載日情報：2020/10/09 現在Webページ番号：69577
試料のP450脱メチル化活性を、生成されたホルムアルデヒドを測定することで、P450基質を必要とせずに蛍光法により簡便に測定するキットです。肝ミクロソームやCerosomesなどのP450システムや、脱メチル化によるホルムアルデヒド産生の生物学的システムを試料として、ホルムアルデヒド生成酵素の酵素活性を定量的に測定することができ、活性化物質や阻害物質のスクリーニングにも最適です。
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- P450 2B4システムの検量線例
- Cerosome／Microsome実験例
- P450阻害試験例
- P450の脱メチル化とは
- 特長
- キット内容
- Arbor Assays社アッセイキットデモビデオ
- 価格
P450 2B4システムの検量線例
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Cerosome／Microsome実験例
ラットとヒトの両方の肝臓ネイティブミクロソーム由来の多くのミクロソーム調製物と、PREMAS Biotechから寄贈されたSaccharomyce scerevisiae（CEROSOMES）で共発現したP450をアッセイに用いた。いずれの場合も、ミクロソーム調製物を基質（3A4：1 mMエリスロマイシン、2D6：20 mMデキストロメトルファン、2B4：20 mMベンズフェタミン）とし、NADPHとともに37°Cで60分間インキュベート後にキットに含まれるStop solutionで反応を停止した。次に、個々のP450システムからのホルムアルデヒドの生成をFDRの添加と37°Cで30分間のインキュベーションし、その後蛍光強度により測定を行った。
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P450阻害試験例
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P450の脱メチル化とは
シトクロムP450（CYP、P450）は、基質特異性と触媒活性に関して大幅な多様性を示す酵素を含むヘムに属しています1,2。P450は、酵素反応基質として、外因性および内因性化合物の両方を大量に用い、通常、それらは多成分電子移動反応の一部を形成します（下図参照）。
真核生物のP450酵素による触媒作用には、レドックス（Redox、酸化還元反応）パートナーから電子伝達が行われる2つのステップを含む多段階の反応サイクルが含まれます。ジフラビンタンパク質であるNADPHシトクロームP450レダクターゼ（レダクターゼ）には、FADとFMNの両方が含まれており、触媒サイクルに必要な両方の電子を伝達することができます3。一部のP450反応は、反応サイクルの2番目の電子もシトクロムb5によって送達されます4。哺乳類の薬物代謝システムのP450酵素と補因子は、小胞体の膜に埋め込まれています5。、一般に、薬物間相互作用はシトクロムP450活性の阻害によって生じるため、P450は新薬の開発において重要な役割を果たします。
脂質は、タンパク質精製後のP450依存性活性の再構成に重要な役割を果たします6。P450活性の再構成に関する多くのin vitroの研究においては、脂質成分としてジラウリルホスファチジルコリン（DLPC）を使用しています。酵素活性の再構成の工程には、濃縮インキュベーション（P450、そのレドックスパートナー（NADPHおよびレダクターゼ）および脂質）、それ後の最終アッセイ成分への希釈が含まれますが、そのプレインキュベーションの条件には様々な報告があります7。
参考文献
- Hollenberg, PF., "Mechanisms of Cytochrome P450 and peroxidase-catalyzed xenobiotic metabolism.", FASEB J., 6(2), 686～694 (1992).
- Guengerich, FP., "Common and uncommon cytochrome P450 reactions related to metabolism and chemical toxicity.", Chem. Res. Toxicol., 14, 611～650 (2001).
- White, RE. and Coon, MJ., "Oxygen activation by cytochrome P-450.", Ann. Rev. Biochem, 49, 315～356 (1980).
- Schenkman, JB. and Jansson, I., "The many roles of cytochrome B5", Pharmacol. Ther., 97, 139～152 (2003).
- Ortiz-De Montellano, PR., "Oxygen activation and reactivity in Cytochrome P450.", Structure, Mechanism and Biochemistry, (Ortiz-De Montellano PR ed.), pp 245～303, Plenum. Press, New York (1995).
- Lu, AY., Strobel, HW., and Coon, MJ., "Hydroxylation of benzphetamine and other drugs by a solubilized form of cytochrome P-450 from liver microsomes lipid requirement for drug demethylation.", Biochem. Biophys Res. Comm., 36, 545～551 (1969).
- Causey, KM., Eyer, CS., and Backes, WL., "Dual role of phospholipid in the reconstitution of cytochrome P-450 LM2-dependent activities", Mol. Pharmacol, 38, 134～142 (1990).
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特長
* MyAssays
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キット内容
- Black half area 96 well plate
- Assay buffer
- NADPH
- Stop solution
- Formaldehyde standard
- DetectX formaldehyde reagent
- Plate sealer
※ 測定には蛍光プレートリーダーが必要です。ミクロソーム、バキュロソームシステムまたは組換えP450、レダクターゼおよびシトクロムb5システム、および必要な補因子などは、別途ご用意下さい。
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Arbor Assays社アッセイキットデモビデオ
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価格
[在庫・価格 ：2025年04月25日 20時55分現在]
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P450, Demethylation Activity Kit, Fluorescent, DetectX (2plate) |
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 20時55分現在]
P450, Demethylation Activity Kit, Fluorescent, DetectX (2plate)
文献数： 3
- 商品コード：K011-F1
- メーカー：ARB
- 包装：1kit
- 価格：¥101,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：10日程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | 測定試料：Any P450 system or biological system producing demethylation product, Formaldehyde，測定範囲：12.5 - 400 uM，検出方法：Fluorescent，励起波長：450 nm，蛍光波長：510 nm，総インキュベーション時間：45 Minutes，必要試料量：100 ul，測定波長：510 nm，アッセイ数：2x96 well plate，アッセイ法：Activity Assay，測定因子：P450 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | DetectX アッセイキットシリーズ（Arbor Assays社） |
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| 関連記事 | |||
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