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細胞生存率測定キット ROCKLAND社 Cell Survival Assay Kitシリーズ

掲載日情報：2020/06/18 現在Webページ番号：69527

ロックランドイムノケミカルズ /
Rockland Immunochemicals, Inc.
[メーカー略称：RCK]

放射線、化学療法や毒物による細胞生存率、または細胞死を様々な原理に基づき、比色法により測定するキットです。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

KLD-001-figure2

HCT116に対し、0～50μMのシスプラチンで24時間処理後、CellCountEZ Cell Survival Assay Kit（#KLD-001）で生細胞数を測定した。


KLD-001-figure3

HCT116に対し、0～1,000μMのH2O2で3日間処理後、CellCountEZ Cell Survival Assay Kit（#KLD-001）で生細胞数を測定した。


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製品の種類

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品名 Cell Survival Assay
CellCountEZ Oxphos Intracellular ThiolEZ
商品コード KLD-001 KLD-002 KLD-004
測定原理 HEDS → ME（OPPC）*1 細胞内総チオール量*2
アッセイフォーマット 96 well plate 6 well plate 6 well plate
アッセイ数 1,000 assays 100 assays 100 assays
測定物質 ME（培地中） 総チオール（細胞内）
測定方法 比色
細胞破砕・溶解 不要 要
測定波長 412 nm
（補正波長：650 nm）		 412 nm 412 nm
測定範囲（in medium） 0～40,000 cells/100μl*3 0～800,000 cells/1 ml*4 0～80,000 cells/1 ml*4
キット内容*5 Reagent 1, 2, 3 Reagent 1, 2, 3, 4, 5 Reagent 1, 2, 3

＊1 酸化的ペントースリン酸化回路（OPPC, Oxdative pentose phosphate cycle）において、ヒドロキシジスルフィド（HEDS, Hydroxy disulfide）の生物還元反応によりメルカプトエタノール（ME, mercaptoethanol）へ変換する反応です。HEDSからMEの産生量は、細胞内で産生されたMEが能動的輸送システムにより速やかに細胞外に排出されるため、細胞溶解を必要とせずに細胞外の培地中から簡便に測定できます。
＊2 グルタチオンとシステインの総量を細胞内総チオール量として測定します。
＊3 96 well plateで、15％FBSを含む培地中で播種後20時間培養
＊4 6 well plateで、15％FBSを含む培地中で播種後20時間培養
＊5 キットにより内容は異なります。

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HEDS Pathwayとは

OPPC経路

HEDSの細胞相互作用に関与する様々な経路の概略図


  • Pathway 1：HEDSは、グルタチオン（GSH）と自発的、またはグルタチオン-S-トランスフェラーゼ（GST）の触媒反応により、GSHとMEの混合ジスルフィド（MESSG）を生成する。
  • Pathway 2：MESSGは、GSHと反応し、グルタレドキシン（GRX）の触媒作用によりMEおよびグルタチオンジスルフィド（GSSG）を生成する。
  • Pathway 3：GSSGは、NADPHと反応、グルタチオンレダクターゼ（GRase）の触媒作用によりGSHを生成する。
  • Pathway 4：GSSGからGSHへの変換、つまりGSHリサイクルには、酸化的ペントースリン酸回路（OPPC）によるNADPHリサイクル（NADP+・NADPH）が必要となる。
    •

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チオールモジュレーターに曝露された細胞内のチオールの恒常性に関与する経路

OPPC経路

チオールモジュレーターは、GSHおよびシステインと自発的に反応するか、グルタチオン-トランスフェラーゼ（GST）による触媒反応により、グルタチオンのジスルフィド（GSH）またはシステインを生成する場合がある。また、チオールモジュレーターは、GSHと反応し、グルタレドキシン（GRX）の触媒作用により、酸化GSH（GSSG）および他の分子と混合したジスルフィドを生成することもある。チオールモジュレーター、さらに生体還元または合成によってGSHを活性化する可能性がある。

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CellCountEZ Cell Survival Assay Kit（#KLD-001）

製品概要

CellCountEZのコンポーネント試薬は溶解性が高く、膜透過性です。そのアッセイ方法はHEDSからMEへの生物変換に基づいており、細胞外の培養液へ輸送される前に生細胞によって細胞内で変換されます。そのため、同一培養系で他の細胞試験を組み合わせて実施することができます。

使用例

KLD-001-figure1

細胞数依存的な生細胞活性値の測定

  • 使用細胞：HCT116
  • 培地：最大15％FBS含有培地100μl
  • 培養スケール：96 wellプレート
  • 培養時間：20時間

バックグラウンドOD（細胞播種せず）は、0.391、0.381、0.368であった。0～40,000細胞において、r2値は、1.000、0.997、0.997といずれも高い線形応答が得られた。

KLD-001-figure4

放射線測定による細胞のME量の変化

  • 使用細胞：HCT116
  • 線量：0～8 does
  • 培養スケール：96 wellプレート




KLD-001-figure5

フェニルアルシンオキシドの容量依存的細胞毒性分析

  • 使用細胞：HCT116
  • a：フェニルアルシンオキシド 0～20μM処理
  • b：亜ヒ酸 0～60μM処理
KLD-001-figure6

異なる細胞によるHEDS, WST-1, XTTアッセイの比較

  • a：HCT116
  • b：H129
  • c：MCF7

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Oxphos Cell Survival Assay Kit（#KLD-002）

製品概要

組織培養および全血中の細胞のグルタチオンリサイクル能力／グルタチオン機能およびグルコース依存性抗酸化能力を測定できる, 培地ベースの代謝プローブoxphosを用いています。哺乳類の細胞が生体還元機構を通じてHEDSをMEに迅速かつ効率的に変換する能力に基づいています。全哺乳動物細胞および全血のグルタチオン機能／リサイクル／グルコース依存性抗酸化能を定量化できる唯一のアッセイです。老化、酸化ストレス、抗酸化スクリーニング、化学療法反応、および毒物学研究に有用です。

使用例

KLD-002-figure1

細胞数依存的な生細胞活性値の測定

  • 使用細胞：大腸がん細胞
  • 培地：最大15％FBS含有培地100μl
  • 培養スケール：6 wellプレート
  • 培養時間：20時間

バックグラウンドOD（細胞播種せず）は、0.231～0.235であった。0～800,000細胞において、r2値は、0.964、0.973、0.965といずれも高い線形応答が得られた。

KLD-002-figure2

ヒト血液（患者#1）を用いた直線性の検証

  • 血液量：0,10, 20, 40, 60, 80, 100μl
  • 懸濁液：200μl（in total saline）
  • Reagent 6：10μl
  • インキュベーション時間：2時間




KLD-002-figure3

ヒト血液（患者#2）を用いた直線性の検証

  • 懸濁液：200μl（in total saline）
  • 血液量：0,10, 20, 40, 60, 80, 100μl
  • Reagent 6：10μl
  • インキュベーション時間：2時間
KLD-002-figure4

ヒト血液（患者#3）を用いた直線性の検証

  • 懸濁液：200μl（in total saline）
  • 血液量：0,10, 20, 40, 60, 80, 100μl
  • Reagent 6：10μl
  • インキュベーション時間：2時間

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Intracellular ThiolEZ Cell Survival Assay Kit（#KLD-004）

製品概要

チオール促進物質や酸化物質の存在下または非存在下において、グルタチオンとシステインを含む総細胞内チオールを測定するキットです。天然の抗酸化物質のグルタチオンは主要なチオールであり、酸化ストレス時に健康な組織の細胞損傷を抑制します。また、がん治療薬や放射線によって起きる損傷の修復や、一般的に用いられるいくつかのがん化学療法薬の解毒にも関与します。システインの存在比は、グルタチオンの1/10です。老化研究、酸化ストレス、抗酸化スクリーニング、化学療法反応、および毒物学研究に有用です。

使用例

KLD-004-figure1

細胞数依存的な生細胞活性値の測定

  • 使用細胞：HT116

r2値は、0.989、0.999、0.988といずれも高い線形応答が得られた。

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価格

[在庫・価格 ：2024年04月24日 00時00分現在]

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CellCountEZ Cell Survival Assay Kit
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別名：Toxicity Proliferation and Survival Assay，cell proliferation and cell survival assay，cell viability kit，cell survival kit，cellular viability，cellular survival，HEDS assay，hydroxyethyl disulfide assay，quantifying cell growth and survival
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別名：Total intracellular thiol Assay，glutathione and cysteine assay，cell viability，cell survival，cellular viability，cellular survival，antioxidant assay
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説明文 別名：Toxicity Proliferation and Survival Assay，cell proliferation and cell survival assay，cell viability kit，cell survival kit，cellular viability，cellular survival，HEDS assay，hydroxyethyl disulfide assay，quantifying cell growth and survival
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説明文 別名：Glutathione recycling，glutathione function，and glucose dependent antioxidant capacity assay，cell viability，cell survival cellular viability，cellular survival，antioxidant assay
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説明文 別名：Radiation dosing assay，Gamma radiation assay，dosimetry solution for gamma radiation，cell death assay，cell survival，to measure ionizing radiation.
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お問い合わせ先

（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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細胞の解析