ヒトiPS細胞から分化させた脊髄運動ニューロンの前駆細胞 ヒトiPS細胞由来Spinal Motor Neuron

ヒトiPS細胞から分化させた脊髄運動ニューロンの前駆細胞です。付属のサプリメントを用いて培養することにより、脊髄運動ニューロンへの成熟を迅速に行えます。

※ 本製品は、HIV、HBV、HCVが陰性であることを確認していますが、取り扱いには十分にご注意下さい。
※ その他の「ヒトiPS細胞から分化させた各種神経細胞の前駆細胞」については、こちらの記事をご覧下さい。
※ 本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。

＊ 必要な試薬、培地類の詳細については、製品添付のプロトコルをご確認下さい。
※ 細胞数についてはお問い合わせ下さい。

脊髄運動ニューロンの形態

脊髄運動ニューロンは接着性細胞であり、培養開始後1週間以内に多数の神経突起伸長を示す。
カルセイン染色（緑色）は、培養下の脊髄運動ニューロンの精巧なプロセスを明らかにした。

特異的マーカーの発現確認

本製品（#BX-0100）はニューロンの純度が高く（＞90％）、また70％以上の運動ニューロンで構成される。
ニューロンの共通マーカーであるMAP2（緑色）および運動ニューロン特異的マーカーであるFOXP1（赤色）の標識により、本製品の純度の高さが明らかになった。

多電極アレイ（MEA）による機能チェック

本製品（#BX-0100）は、多電極アレイ（MEA：Multi-electrode array）のデータで証明されるように、培養2週間後に顕著な電気生理学的活性を示した。

■カルシウム流入アッセイ（Calcium Influx Assay）

活動電位は、興奮性シナプスにおけるシナプス前細胞の大規模なカルシウム流入およびシナプス後細胞のカルシウムの著しい上昇に関連するため、カルシウム濃度の変化はニューロンの活動に密接に関係しています。これは、ニューロンを刺激するか、または自発振動を示す成熟したネットワークを形成する適切な条件下でニューロンを培養することにより、実験的に観察できます。カルシウムの流入は、市販されている様々なカルシウム感受性蛍光色素を使用して測定可能です。

本製品（#BX-0100）を96ウェルプレートで3週間培養した後、Calbryte-520（AAT Bioquest社）で処理した。FDSS/μCell Functional Drug Screening System（Hamamatsu社）を用いて、自発振動をすべてのウェルで同時に記録した。

■MEA（Multi-electrode array）アッセイ

多電極アレイ（MEA）は、ニューロンが活動電位を発するときに生じる細胞外電圧の変化を測定します。この測定により、培養細胞に存在するニューロンネットワークのパターンだけでなく、個々のニューロンの発火パターンが明らかになります。測定は非侵襲的であり、繰り返し行うことができます。

※ 本製品（#BX-0100）を用いたMEAアッセイの詳細なプロトコルは、こちらからダウンロードいただけます。

本製品（#BX-0100）をAxion Biosystems MEAプレート上で数週間培養し、1週間後から定期的に記録した。
経時的な活性電極の数（左図）、平均発火頻度（中央図）、および同期指数（右図）により、培養中の数週間にわたる脊髄運動ニューロンの活動の進行が明らかになった。

スパイク活動のラスター表示（Raster plot）は、培養20日目に観察されたネットワークバーストを示す。結果として生じる活動は、スパイクパターンの様々なパラメーターを解析できる。

別途輸送費（￥70,000）が必要となります。