革新的なタンパク質S-パルミトイル化修飾解析キット ^RapidSPALM, Protein S-Palmitoylation Detection Kit

^RapidSPALM（ラピズパーム）, Protein S-Palmitoylation Detection Kitは、タンパク質の可逆的脂質翻訳後修飾として知られるS-パルミトイル化修飾を多面的に解析できるキットです。化学的特徴の乏しいS-パルミトイル基を独自の多機能タグに変換することで、相対定量、修飾個数判定、精製・同定、修飾率算定ができます。対象試料として動物組織・培養細胞および植物組織と広く適用でき、独自開発のプロトコルにより従来技術に比べ簡便、迅速かつ高感度にS-パルミトイル化修飾を検出できるため、大幅な実験労力・時間削減が可能です。
※ 本キットのアプリケーションデータについてはこちらをご覧下さい。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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BDL社は、タンパク質のS-パルミトイル基（以下、S-アシル基を含む）を独自の多機能タグ（Multifunctional-tag、以下MfTagと略）に、わずか2時間の短時間かつ高選択的に交換する新規化学変換手法Rapid Substitution of Protein S-Acylation for Multifunctional-tag（^RapidSPALM、ラピズパーム）を開発しました。MfTagに変換することで、下記の解析が可能です。

※ 本キットのアプリケーションデータについてはこちらをご覧下さい。

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本製品^RapidSPALMは、反応キット部分（#F017A）と精製キット部分（#F017B）からなります。まず、反応キットを用いて任意の試料中（培養細胞、動物組織、植物など）のS-パルミトイル化修飾を独自のMfTagに変換します。本キットのMfTagは分子量約5 kDaの単一分子量の高分子構造体をベースに黄色蛍光基（yFL）およびアフィニティ精製用のHook基が付加されています。Hook基は精製キットに含まれるLoopアフィニティカラムにより迅速かつ簡便、そして高純度で精製することができ、精製終了後は還元剤により簡単にMfTagを除去することができます。

^RapidSPALM反応キット部分では段階的な化学修飾反応により、S-パルミトイル基をMfTagに変換します。^RapidSPALMはS-パルミトイル化修飾検出手法として知られるAcyl-Biotin Exchange（ABE）法やAcyl-PEGyl Exchange Gel Shift（APEGS）法を基に独自に見出した試薬類およびプロトコルを採用することで、特異性の向上、反応工程の短縮および感度向上を実現しました。

① タンパク質変性処理
各化学修飾反応の効率を上げるため、タンパク質を強力な変性剤と加熱により変性させます。

② 還元処理
タンパク質中のジスルフィド結合を還元し、フリーのシステインにします。

③ フリーシステインのブロッキング
S-パルミトイル化修飾に無関係なフリーシステインを、システイン特異的修飾試薬でブロッキングします。

④ S-パルミトイル基の選択的切断
S-パルミトイル基-システイン間のチオエステル結合を高活性ヒドロキシルアミン誘導体（high performance hydroxylamine、以下hpHAと略）により切断します。この際に、特異性コントロールとしてhpHA未処理（Tris処理）を用意します。

⑤ MfTagの標識反応
hpHAにより遊離したシステインにMfTagを標識します。③のブロッキングが不十分の場合、hpHA未処理の試料においてもMfTagが標識されるため、hpHA未処理の試料を並行して用意し、特異性判定に使用します。また、ネガティブコントロールとしてMfTag標識試薬未処理の試料も用意します。

⑥ 脱塩処理
クロロホルムメタノール沈殿法（CMppt）により、未反応試薬の除去およびタンパク質成分の粗精製を行います。

上記のプロセスを経て、1つの試料に対し2種類のネガティブコントロールを含む3種類の処理hpHA(-)/MfTag(-)、hpHA(-)/MfTag(+)およびhpHA(+)/MfTag(+)を調製します。

^RapidSPALM精製キットのHook&Loopアフィニティ精製は非タンパク質性の低分子間相互作用を利用しています。非タンパク質性の相互作用のため、完全変性条件下での結合が可能で、アフィニティビーズ自体への非特異吸着が非常に低く抑えられます。また、全工程スピンカラムでの提供のため、カラムへの溶液添加とスピンダウンの繰り返しだけで簡便に精製が行えます。

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従来手法（ABE）は一般的にS-パルミトイル基とビオチンの交換反応に約1日、精製ステップに数時間程度必要とされています。^RapidSPALMは、反応キット部分が約2時間、精製キット部分が約1時間で完結することができます。

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＊ 作業時間は1アッセイの場合の目安です。

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※ 各種アプリケーションデータについてはこちらをご覧下さい。

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本製品^RapidSPALMは、反応キット（#F017A）と精製キット（#F017B）からなります。^RapidSPALM実施のためには、反応キットが必須で、精製キットはオプションになります。以下の表をご確認の上、目的の解析に必要な場合は、精製キットを併せてご購入下さい。
また、^RapidSPALMにおいて、SDS-PAGE実施時の還元・非還元は重要なため、目的に応じた推奨条件をよくご確認下さい。
※ 精製キットだけでは^RapidSPALM実験はできませんのでご注意下さい。
※ 各種アプリケーションデータについてはこちらをご覧下さい。

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※ 反応キットの1 assayは、1試料から2種類のネガティブコントロールを含む3つの処理（－/－、－/+、+/+）の調製できる分の試薬が含まれています。
※ 精製キットは1つの試料につきネガティブコントロールを含む2つの処理（－/+、+/+）の実験実施を推奨するため、24 columnsで12アッセイ分に相当します。
※ 各製品のキット内容は製品マニュアル（下記価格表中のPDF）をご確認下さい。

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