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NGS用ライブラリーをわずか40分で定量するqPCRキット sparQ Universal Library Quant Kit

掲載日情報:2021/07/21 現在Webページ番号:68160

イルミナ社プラットフォーム用のNGS(次世代シークエンシング)ライブラリーを,迅速かつ正確にqPCR(定量的PCR)で定量するキットです。
フローセルに試料をロードする前に,試料中の増幅可能な分子の数を正確に定量することは,NGSのワークフローにおける重要なステップであり,最適なクラスター生成とシークエンシング能力の効率的な使用を可能にします。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


各種qPCR装置に対応のsparQ Universal Library Quant Kit

特長

  • 高速サーマルサイクリングプロトコルの採用により,qPCR装置の動作時間が従来のキットの半分(80分 → 40分)で結果が得られます。
  • 様々なサイズおよびGC含量のNGSライブラリーについて,正確で信頼性の高い定量を行えます。
  • 幅広い濃度範囲で高い増幅効率を示します。
  • DNA,RNAいずれの試料から調製したライブラリーにも対応しています。
  • キットに含まれるsparQ Universal Fast Mastermixが安定した状態ですぐに使用できるため,ピペッティング工程を削減します。
  • 再現性が高く,高精度な測定を可能にします。
  • 幅広いqPCR装置に適用しています。

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qPCRを用いたライブラリー定量について


qPCRを用いたライブラリー定量について

qPCRは,両末端に適切なアダプター配列を持つDNA断片のみを測定するため,ライブラリーの定量において最も高感度かつ正確な方法です。分光光度法,蛍光光度法,マイクロ流体電気泳動法などを用いた他の方法では,汚染物質や,シークエンシングに使用できない断片を検出するなどの要因により,ばらつきや不正確さが生じやすくなっています。


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操作方法概略

操作方法概略

試薬のセットアップは,キット付属のLibrary dilution bufferで希釈したライブラリー試料またはDNA standardを,sparQ universal fast mastermixに加えるだけです。
参照用蛍光色素としてHigh ROXが必要なqPCR装置をご使用の場合は,付属のHigh ROXを添加して下さい。


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幅広い濃度範囲における高効率での増幅

低GC含量(27%)試料の場合

sparQ Universal Library Quant Kitの低GC含量試料でのCt値
sparQ Universal Library Quant Kitの低GC含量試料でのCq値

高GC含量(67%)試料の場合

sparQ Universal Library Quant Kitの高GC含量試料でのCt値
sparQ Universal Library Quant Kitの高GC含量試料でのCq値

低GC含量(27%),高GC含量(67%)のDNA試料から調製したライブラリーについて,それぞれ10倍連続希釈をし,本キットで定量した。
幅広い濃度範囲において,高効率での増幅が行われていることが示された。


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幅広い定量的PCR装置で同等の性能

sparQ Universal Library Quant KitのCFXでの使用例
sparQ Universal Library Quant KitのStepOnePlusでの使用例
sparQ Universal Library Quant KitのQuantStudio7での使用例
sparQ Universal Library Quant KitのQ-Instrumentでの使用例

DNA2種類(BP10,FN10),およびRNA5種類の合計7種類のライブラリーを調製し,本製品およびA社製品を用いて,各定量的PCR装置のプロトコルに従ってそれぞれを定量した。
様々な定量的PCR装置(BioRad社CFX,Thermo Fisher Scientific社(Applied Biosystems)のStepOne PlusおよびQuantStudio 7,Quantabio社Q Instrument)において,両キット共に,一致したライブラリー定量結果を得ることができた。


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他社キットと高い相関性

他社キットと高い相関性

6種類の異なる希釈度のライブラリーを,本キットおよび他社キットを用いて定量した。
qPCR装置の動作時間が,本キットは他社キットの半分(80分 → 40分)だったが,得られた結果に高い相関性が見られた。


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ロット再現性

ロット再現性

低GC含量(Library1),高GC含量(Library2),およびバランスのとれたGC含量(Library3)を希釈した試料の濃度を,3種類の異なるロットのsparQ DNA standardを用いて測定した(4重試験)。
得られた平均定量値の標準偏差はすべて0.13 pM未満であった。


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対応したqPCR装置

参照用色素対応機種
No ROX Bio-Rad社:CFX96,CFX384,Opticon,MiniOpticon,Chromo4,iQ5,MyiQ,iCycler iQ
Cepheid社:Smart Cycler,
Qiagen社:Rotor-Gene,
Illumina社:Eco,
Eppendorf社:Mastercycler ep realplex,
Roche社:LightCycler 480,96,
Quantabio社:Q Instrument
Low ROX Thermo Fisher Scientific社(Applied Biosystems):7500,7500 Fast,ViiA7,QuantStudio,
Agilent社(Stratagene):MX4000,MX3005P,MX3000P
High ROX Thermo Fisher Scientific社(Applied Biosystems):7000,7300,7700,7900,7900HT,7900HT Fast,StepOne,StepOnePlus

persistent well factorsが必要です。


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キット内容

  • sparQ universal fast mastermix
  • sparQ DNA standard 1~6
  • High ROX reference dye
  • Library dilution buffer

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価格

[在庫・価格 :2021年07月23日 20時05分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

[在庫・価格 :2021年07月23日 20時05分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。

sparQ Universal Library Quant Kit (100 rxns)

文献数:0

説明文
法規制等
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掲載カタログ

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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