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CRISPRノックインに有用です! 一本鎖DNA合成受託サービス

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:68131

guide RNAによるゲノム編集ツール CRISPR-Cas9特集

高純度,高精度の一本鎖DNA(ssDNAまたはssODN)を合成する受託サービスです。
CRISPRによる遺伝子ノックイン(KI)でのHDR(相同組換え修復)テンプレートへの一本鎖DNAの使用は,効率的なゲノム編集をもたらし,また目的部位以外(オフターゲット)へのノックインを抑制します。また一本鎖DNAは,in vitro転写(IVT)のテンプレートにも使用されます。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


CRISPRによる遺伝子ノックインでのHDRテンプレートへの一本鎖DNA使用の利点

  • 高い編集効率
  • 低い細胞毒性
  • オフターゲット効果の減少
  • 編集精度の向上
  • 初代細胞や幹細胞の編集に最適
  • 遺伝子改変動物モデルの作製に最適
遺伝子ノックイン

CRISPRによる遺伝子ノックインの模式図


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サービスの特長

  • 合成した一本鎖DNAについてサンガー法シークエンシングにより塩基配列を確認しています。
  • 独自の手法により,二本鎖DNA(dsDNA)を検出できないレベルに抑え,塩基損傷を最小限度に抑制します。
  • 最大20μgの合成量で,様々な実験デザインに対応できます。
  • テンプレート配列の保管により,同じ配列の再注文に素早く対応します。
  • 16年以上にわたる人工遺伝子合成サービスで培った経験とノウハウがあります。

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サービスの種類/価格/納期の目安

長 さ合成量価 格作業日数の目安*
(営業日)
151~500 nt3μg\56,00015~18
5μg\77,000
10μg\112,000
20μg\182,000
>20μgご照会
501~3,000 nt3μg\112/nt18~23
5μg\140/nt
10μg\182/nt
20μg\266/nt
>20μgご照会
3,000~5,000 ntご照会ご照会ご照会

ご依頼内容により変動しますので,詳しくはお問合せ下さい。
 また製品のお届けには,上記の作業日数に加えて4~5日の輸送時間がかかります。


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CRISPRによる遺伝子編集のメカニズムについて

遺伝子修復

CRISPR/Cas9テクノロジーは,標的遺伝子上での適切な二本鎖DNA切断(DSBs)を行うために幅広く用いられています。ガイドRNA(gRNA)は標的DNA上のProtospacer Adjacent Motif(PAM)配列を認識し,Cas9との複合体を形成します。その後,Cas9のエンドンクレアーゼ活性により二本鎖DNAが切断され,その修復のために2種類の機構が引き起こされます。1つはNHEJ(非相同末端結合)で,DSBs部位に挿入または欠損の変異を導入します。もう1つがHDR(相同組換え修復)で,これを利用してドナーDNAを切断部位に挿入することにより,遺伝子ノックインが可能になります。

HDRドナーDNAテンプレートとして,これまで二本鎖DNA(dsDNA)が用いられてきました。近年の研究により,一本鎖DNA(ssDNAまたはssODN)がCRISPRベースの遺伝子挿入,置換および修正において最適であることが示されました。一本鎖DNAは,特に初代細胞や幹細胞の編集,および遺伝子改変動物モデルの開発において,編集効率や特異性の著しい改善,およびオフターゲット効果の減少が示されました。


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関連資料

画像をクリックするとPDFをダウンロードできます(英語版)。

A Case Study : Use Single-Stranded DNA Donor Templates (ssDNA or ssODNs) for CRISPR Homology Directed Repair (HDR) Mediated Gene Knock-In
(英語版,6ページ,1 MB)


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納品物および品質確認情報

  • 一本鎖DNAの凍結乾燥品
  • サンガー法シークエンシングによる塩基配列確認
  • ゲル電気泳動による純度試験

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ご注文方法

詳細については,当社受託・特注品業務担当までお問い合わせ下さい。


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関連製品:Long ssDNA Preparation Kit for 1.5kb & 3.0kb

高い純度で正確な配列を有する長鎖の一本鎖DNA(ssDNA, ~1.5 kb または 1.5~3 kb)を調製できるキットです。本キットで調製した長鎖の一本鎖DNAをドナーDNAとし,CRISPR/Cas9と一緒に導入することで,GFP配列を正確かつ効率よくノックインすることに成功した報告があります。詳細についてはLong ssDNA Preparation Kit for 1.5kb & 3.0kbをご覧下さい。


Long ssDNA Preparation Kit

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