CRISPRノックインに有用です！ GenExact　一本鎖DNA合成受託サービス

高純度、高精度の一本鎖DNA（ssDNAまたはssODN）を合成する受託サービスです。
CRISPRによる遺伝子ノックイン（KI）でのHDR（相同組換え修復）テンプレートへの一本鎖DNAの使用は、効率的なゲノム編集をもたらし、また目的部位以外（オフターゲット）へのノックインを抑制します。また一本鎖DNAは、in vitro転写（IVT）のテンプレートにも使用されます。
※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

＊ご依頼内容により変動しますので、詳しくはお問合せ下さい。
　また製品のお届けには、上記の作業日数に加えて4～5日の輸送時間がかかります。

CRISPR/Cas9テクノロジーは、標的遺伝子上での適切な二本鎖DNA切断（DSBs）を行うために幅広く用いられています。ガイドRNA（gRNA）は標的DNA上のProtospacer Adjacent Motif（PAM）配列を認識し、Cas9との複合体を形成します。その後、Cas9のエンドンクレアーゼ活性により二本鎖DNAが切断され、その修復のために2種類の機構が引き起こされます。１つはNHEJ（非相同末端結合）で、DSBs部位に挿入または欠損の変異を導入します。もう1つがHDR（相同組換え修復）で、これを利用してドナーDNAを切断部位に挿入することにより、遺伝子ノックインが可能になります。

HDRドナーDNAテンプレートとして、これまで二本鎖DNA（dsDNA）が用いられてきました。近年の研究により、一本鎖DNA（ssDNAまたはssODN）がCRISPRベースの遺伝子挿入、置換および修正において最適であることが示されました。一本鎖DNAは、特に初代細胞や幹細胞の編集、および遺伝子改変動物モデルの開発において、編集効率や特異性の著しい改善、およびオフターゲット効果の減少が示されました。

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A Case Study : Use Single-Stranded DNA Donor Templates (ssDNA or ssODNs) for CRISPR Homology Directed Repair (HDR) Mediated Gene Knock-In
（英語版、6ページ、1 MB）

CRISPR-Cas9 とHDR テンプレートを用いて、初代ヒトT 細胞のハウスキーピング遺伝子RAB11A にGFP 融合タグをノックインした。ssDNA テンプレートを使用した場合（青）、Cas9 とガイドRNA をノックインしないネガティブコントロール（None）と同レベルにオフターゲットを抑制できていることが分かる。
Theodore, L. Roth, et al., Nature, 559（7714）, 405～409(2018).［PMID: 29995861］

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高い純度で正確な配列を有する長鎖の一本鎖DNA（ssDNA, ～1.5 kb または 1.5～3 kb）を調製できるキットです。本キットで調製した長鎖の一本鎖DNAをドナーDNAとし、CRISPR/Cas9と一緒に導入することで、GFP配列を正確かつ効率よくノックインすることに成功した報告があります。詳細についてはLong ssDNA Preparation Kit for 1.5kb & 3.0kbをご覧下さい。