尿試料からの高純度・高収量なエクソソーム回収・調製用キット Exo-Urine EV Isolation Kit

独自の可溶化バッファーと、サイズ排除クロマトグラフィー（SEC）レジンの組み合わせにより、尿試料からエクソソームなどのEV（Extracellular vesicles）を高い再現性・高純度・高収量で回収・調製できるキットです。
※ 血清、腹水などの体液試料や細胞培養液からエクソソーム回収を行うExoQuickシリーズについては、こちらをご覧下さい。
※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

図1：新鮮尿試料から各キットで調製したEVの比較
健常なドナー3人から得た新鮮な尿試料をプールし、4℃で記載の時間保冷した後、EV調製を行った。その後、ウエスタンブロッティングで解析を行った。
A：本製品は1.5 mlの尿試料から、A社製品は15 mlの尿試料から調製した。試料量が10倍違うが、本製品で調製したEVの方が、EVマーカーであるCD63のレベルが高かった。なお、いずれのキットから調製したEVも、尿中の糖タンパク質であるTHPのレベルは低かった。
B：本製品で調製したEVは、CD63の他にもEVマーカーであるAQP2、TSG101、HSP70のレベルがそれぞれ高いことが示された。

図2：凍結尿試料から各手法で調製したEVの比較
複数の健常なドナーから得た尿試料をプールし、-20℃で3週間凍結保存した後、EV調製を行った。その後、ウエスタンブロッティングで解析を行った。
本製品は1.5 mlの尿試料から、A社製品、超遠心法、ポリマー沈殿法の各手法は15 mlの尿試料から調製した。試料量が10倍違うが、本製品で調製したEVは各種EVマーカーのレベルが高かった。また、本製品で調製したEVにTHPがほとんど含まれていないことが分かる。
なお、超遠心法、ポリマー沈殿法で調製したEVでは、AQP2のレベルが高くなっているが、これはEV由来ではない可溶性AQP2の持込み（キャリーオーバー）の可能性が報告されている^＊2。

参考文献：
＊2 Kodaka, K., et al., J. Clin. Exp. Nephrol., 3 (1), 06 (2018).

図3：タンパク質量の測定によるEV収量の比較
図2の各法で調製したEVについてタンパク質の量をQubit protein assay（Thermo Fisher Scientific社）で測定し、超遠心法で得られた量を1として相対的に示した。本製品で調製したEVの収量が、他の方法より極めて高いことが分かる。

図4：各手法で調製したEVのTEM観察像
各手法で調製したEVをTEM（透過型電子顕微鏡）で観察した。
超遠心法、ポリマー沈殿法で調製したEVではTHPフィラメントが見られるが、本製品で調製したEVにはこれが見られず、EV純度が高くなっていることが示された。

図5：各手法で調製したEVのLC-MS/MS解析結果
図2の各法で調製したEVについてLC-MS/MSで解析したところ、本製品で調製したEVではTHPの混入が極めて少なく、かつEVマーカーであるHSP70やANXA2のレベルが高いことが示された。