Strep-tag融合タンパク質をスピンカラムで迅速・簡便に精製！ Strep-Spin Protein Miniprep Kit
掲載日情報：2018/09/27 現在Webページ番号：68066
E. coli、哺乳動物細胞、昆虫細胞などで発現させたStrep-tag（Strep-tagⅡおよびTwin-Strep-Tag）融合の組換え体タンパク質を含む細胞ライセートから、スピンカラムを用いてわずか7分間で迅速・簡便かつ高純度に精製するキットです。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
本キットを用いたStrep-tag融合タンパク質の精製例
C末端にTwin-Strep-Tagを融合したそれぞれのタンパク質を発現させたE. coliのライセート、および本キットを用いた精製物について、15％ゲルでのSDS-PAGE後、クマシーブルーで染色した（GFP：28 kDa、Calmodulin：19.8 kDa、Borna Disease VirusのPタンパク質（BDV-P）：25.5 kDa）。
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特長
- 小スケールで発現させたタンパク質の精製に適しており、特に目的の組換え体タンパク質を発現するコロニーを直接スクリーニングする際に有用です。
- 精製に用いるレジンStrep-Tactin XTは、8M尿素存在下でもStrep-tag融合タンパク質へ結合できます。
- Strep-Tactin XTとTwin-Strep-Tagの結合が極めて強固なため、厳しい条件での洗浄ステップを行うことが可能です。
- 必要とする装置は、卓上型遠心分離機のみです。
- 得られた精製タンパク質は、酵素反応、生化学的実験、SDS-PAGEなどに使用することができます。
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製品の種類と仕様
商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。
| 商品コード | P2004 | P2005 |
|---|---|---|
| 使用回数 | 10 preps | 50 preps |
| 試料の種類 | Strep-tag（Strep-tagⅡおよびTwin-Strep-Tag）融合タンパク質を含む細胞ライセートまたはタンパク質混合溶液 | |
| レジンが結合するタグ | Strep-tagⅡ（配列：WSHPQFEK） Twin-Strep-Tag（配列：WSHPQFEKGGGSGGGSGGWSHPQFE） |
|
| 精製に用いるレジン | Strep-Tactin XT | |
| レジンの最大結合容量 | 15 nmol ビオチン／100μl Strep-Tactin XT Superflow, 50% suspension （30 kDaのTwin-Strep-Tag融合タンパク質で約450μg） |
|
| 処理時間 | 7分間 | |
| 溶出方法 | 大過剰なビオチン溶液 | |
| 溶出液量 | 推奨：3×200μl | |
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使用可能な化合物と濃度
本キットで精製を行う際には、試料溶液中にビオチンが含まれないようにして下さい。また、試料溶液は、pH＞7.0である必要があります。
本キットは、試料溶液中に以下の化合物が混在しても問題なく使用できることを確認しています。
| 種 類 | 化合物名 | 濃 度 |
|---|---|---|
| 還元剤 | β-メルカプトエタノール | ≦50 mM |
| 非イオン性界面活性剤 | Nonidet P-40 | ≦2％ |
| Triton X-100 | ≦2％ | |
| Tween-20 | ≦2％ | |
| イオン性界面活性剤 | SDS | ≦0.1％ |
| 変性剤 | 尿素 | ≦8 M |
| その他の化合物および試薬 | EDTA | ≦50 mM |
| エタノール | ≦10％（v/v） | |
| グリセロール | ≦25％（v/v） | |
| イミダゾール | ≦250 mM | |
| MgCl2 | ≦1 M | |
| NaCl | ≦5 M |
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操作方法概略
以下の操作は、目的タンパク質に応じて低温条件または室温で行って下さい。遠心分離は、卓上遠心分離機を用いて最大速度（通常13,000～15,000×g）で行って下さい。
- Zymo-Spin P1 columnをCollection tubeにセットし、懸濁させた100μlのStrep-Tactin XT Superflowをアプライする。
- 遠心分離後、レジンにStrep-wash bufferを加えて平衡化し、再度遠心分離する。
- 最大800μlまでのタンパク質試料をZymo-Spin P1 columnに加え、ピペッティングまたは指で叩いてレジンを再懸濁後、インキュベートする。
- 遠心分離してフロースルーを廃棄後、Strep-wash bufferでレジンを再懸濁、遠心分離の操作を計4回行う。
- Zymo-Spin P1 columnをお手持ちの新しいマイクロ遠心チューブにセットする。
- Strep-elution bufferでレジンを再懸濁、遠心分離の操作を計3回行い、3回分の溶出画分を回収してまとめる。
※ 必要に応じて溶出操作の回数を増やす。得られた精製タンパク質は適切な温度条件で保管する。
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キット内容
それぞれのコンポーネント名をクリックすると、単品の価格表をご覧いただけます。
- Zymo-Spin P1 column
- Collection tube
- Strep-Tactin XT Superflow, 50% suspension
- Strep-wash buffer
- Strep-elution buffer
※ キットに細胞溶解バッファーは含まれていません。
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月26日 00時00分現在]
| 詳細 | 商品名 |
|
文献数 | ||
|---|---|---|---|---|---|
|
Strep-Spin Protein Miniprep Kit (10 preps) |
|
本製品は取扱中止になりました | 0 | ||
|
Strep-Spin Protein Miniprep Kit (50 preps) |
|
本製品は取扱中止になりました | 0 | ||
[在庫・価格 ：2024年04月26日 00時00分現在]
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関連製品
品名をクリックすると製品の詳細が表示されます。
| 品 名 | 概 要 |
|---|---|
| His-Spin Protein Miniprep Kit | Zymo-Spinカラムを用いて、Hisタグ融合タンパク質をわずか5分間で簡便に精製できるキット。 |
| MBP-Spin Protein Miniprep Kit | Zymo-Spinカラムを用いて、MBPタグ融合タンパク質をわずか6分間で簡便に精製できるキット。 |
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