GCリッチなDNA標的に作用しPCRの特異的な増幅効率をアップします BioStab PCR Optimizer
掲載日情報：2021/02/25 現在Webページ番号：67284
PCRの増幅効率と特異性を向上させる試薬です。5倍濃縮の液体で、PCRバッファー中に終濃度で1倍濃度（GC含有量が75％を超える場合は2倍濃度）となるように加えるだけでATペアには影響を与えず、目的配列のPCRの増幅効率を向上させます。アニーリング温度の選択の自由度が高くなるため、PCRの厳密なコンディション決めは不要となります。
※ 便利なBioStabシリーズには、抗体と⻄洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）コンジュゲート安定化試薬もあります。
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使用例
使用例1（GC含有量74％の試料のPCR、Mouse PKA Cβ fragment）
マウスのプロテインキナーゼA（cAMP-dependent protein kinase A; PKA）の触媒サブユニットCβの、5'領域からの375 bpフラグメント（GC含有量74％）を標的にして、本使用例1に記載されているような何種類かのアニーリング温度を用いて検出を行った。
レーン2～4：本製品は、54～64℃と広い範囲のアニーリング温度で使用可能だった。増幅条件の厳密な最適化が不要であることが示された。
レーン5～7：本製品を加えずPCRを行った場合は、いずれも特異的バンド（オレンジ色の矢印の箇所）の増幅が見られなかった。
レーン1：分子量マーカーのDNAラダー。
使用例2（GC含有量75％の試料のPCR、Human Retinoblastoma gene）
ヒト網膜芽細胞腫遺伝子は、その5´末端にGC含有率75％の領域を含むため、PCR反応液に特別な添加剤を加えなければ増幅できない。PCRバッファーへの添加剤の有無それぞれで増幅した場合の結果を比較した。
レーン2：添加剤無しの通常のPCRバッファーの場合は、非特異的なバンドが複数出現した。
レーン3：終濃度1倍となるように本製品を添加した場合、期待されるバンド（180 bpフラグメント）の効率的な増幅が見られた。
レーン4～5：PCRバッファーに他社製品あるいは1 Mベタイン（Betaine）を添加した場合、180 bpのバンドが出現したが、同時に非特異的なバンドが上方に現れた。
レーン1：分子量マーカーのDNAラダー。
使用例3（GC含有量が75％を超える試料のPCR、Human genome DNA containing CGG triple nucleotide repeat）
GC含量が75％を超えるような標的の増幅には、本製品の添加量を増やす必要がある。GC含量が78.5％で、CGGのトリヌクレオチドリピートを含むヒトゲノムDNAの149 bpの領域を標的に選んで、PCRバッファーへの添加剤の有無それぞれで増幅した場合の結果を比較した。
レーン2：添加剤無しの通常のPCRバッファーの場合、複数の非特異的バンドが観察された。
レーン3：PCRバッファーに2倍濃度の本製品を添加した場合、期待される特異的バンドが得られた。
レーン4～5：PCRバッファーに他社製品または1 M ベタイン（Betaine）を添加した場合、期待されるバンドに加えて上方の非特異的なバンドも増幅された。
レーン1：分子量マーカーのDNAラダー。
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特長
- PCRバッファー中に終濃度で1倍または2倍（高GC含有量の場合）となるように添加するだけです。
- タンパク質成分や防腐剤は含まれていません。試薬成分を蒸留水で調製後、0.22μmフィルターでろ過されています。
- GCリッチなDNA標的（＞70％）の増幅に適しており、ATペアの増幅には影響を与えません。
- 本製品の添加によりアニーリング温度の選択の自由度が高くなるため、PCRの厳密なコンディション決めが不要となります。
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PCRにおけるGCリッチな領域の増幅の重要性とは
ヒトゲノムのGC含量は40％強と報告されていますが1、プロモーター、エンハンサー、その他の制御因子を含む多くの重要な調節ドメインには、GCリッチな配列が存在してます2。また、このようなGCリッチな配列中には、分子内で二次構造を形成し増幅が困難なものもあります3。このため、GCリッチな配列の解析を容易にするために、これまでも様々な試みがなされてきました。例えば、ベタイン（Betain, (CH3)3N+CH2COO-）4、DMSO（Dimethyl sulfoxide）5などを添加する手法が報告されていますが、本製品はこれらの試薬よりも良好な結果が得られます。
参考文献
- Piovesan A., et al., BMC Res. Notes, 12, 106 (2019). [PMID: 30813969].
- Hapgood, J.P., et al., Cell Biol. Int., 25(1), 17～31 (2001). [PMID: 11237405]. (Review)
- McDowell D.G., et al., Nucleic Acids Res., 26(14), 3340～3347 (1998). [PMID: 9649616].
- Henke W., et al., Nucleic Acids Res., 25(19), 3957～3958 (1997). [PMID: 9380524].
- Winshop P.R., Nucleic Acids Res., 17(3):1266 (1989). [PMID: PMID: 2922271].
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月20日 13時35分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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BioStab PCR Optimizer |
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BioStab PCR Optimizer |
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[在庫・価格 ：2024年04月20日 13時35分現在]
BioStab PCR Optimizer
文献数： 0
- 商品コード：AG-10T-0032-L001
- メーカー：KOM
- 包装：1ml
- 価格：¥18,000
- 在庫：3個以上
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
GCリッチ（＞70%）の試料に向き，PCRバッファーに添加するだけで特異バンドの増幅反応を行える。0.22μmフィルターろ過済み。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃,凍結禁止 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2023年4月1日号 p.8
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BioStab PCR Optimizer
文献数： 0
- 商品コード：AG-10T-0032-L005
- メーカー：KOM
- 包装：5ml
- 価格：¥50,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
GCリッチ（＞70%）の試料に向き，PCRバッファーに添加するだけで特異バンドの増幅反応を行える。0.22μmフィルターろ過済み。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃,凍結禁止 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2023年4月1日号 p.8
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