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MICAL酸化されたウサギ骨格筋由来のアクチンタンパク質 MICAL-Oxidized Actin Protein

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:67091

MICAL(フラビンタンパク質モノオキシゲナーゼ)によりMet44およびMet47で酵素的に酸化された、ウサギ骨格筋由来のアクチンタンパク質(MICAL-Oxidized Actin Protein)です。未標識およびピレン標識の製品を取りそろえています。

MICALとは

MICAL(フラビンタンパク質モノオキシゲナーゼ)は、昆虫から哺乳類まで保存されている細胞内フラビンタンパク質モノオキシゲナーゼであり、酸化還元(レドックス)反応の触媒として機能します[1,2]。Termanのグループは、MICALがF-アクチンと相互作用し、NADPHを補因子として用いMet44およびMet47でアクチンを酸化することが示されています[3](下図参照)。重要なこととして、DTTのような還元剤はMICAL活性を変化させず、酸化にはMICALとアクチンの近接近が必要であるため、アクチンへのMICAL媒介作用はH2O2のような拡散性酸化剤によって起こりません[3]。MICAL酸化は、メチオニンスルホキシド還元酵素のMsrBファミリーによって生理学的および酵素的に可逆的です[4,5]
機能的には、タンパク質のサブドメイン2のDループに残基が存在し、アクチンサブユニットの接触に不可欠であるため、Met44の酸化はアクチン重合に大きな影響を及ぼします。酸化するとMet44は負に帯電し、アクチンモノマー間の相互作用を妨害し、F-アクチンの切断と脱重合を促進します[6]
Met44/Met47におけるアクチン酸化の調節は、in vivoではF-アクチンを不安定にし[7]、細胞質分裂[8]、軸索ガイダンス、樹状組織化、シナプス発達、心臓/筋肉の発達、および細胞の生存[5]を含む多くの細胞プロセスで重要な役割を果たすことが示されています。


アクチンMet44/Met47の生理学的酸化還元(レドックス)システム

アクチンMet44/Met47の生理学的酸化還元(レドックス)システム

アクチンのMet44およびMet47の生理学的および可逆的酸化・還元を制御する酵素の概略図。MICALファミリーのタンパク質は、Met44およびMet47でアクチンの酸化を調節する。反対に、メチオニンスルホキシド還元酵素のSelR/MsrBファミリーは、Met44およびMet47においてアクチンを特異的に還元する。


■参考文献

  1. Terman J.R., et al., Cell., 109(7):887~900 (2002).
  2. Wu H., et al., Sci Rep., 8(1):937 (2018).
  3. Hung R.J., et al., Science., 334(6063):1710~1713 (2011).
  4. Lee B.C., et al., Mol Cell., 51(3):397~404 (2013).
  5. Hung R.J., et al., Nat Cell Biol., 15(12):1445~1454 (2013).
  6. Grintsevich E.E., et al., Nat Commun., 8(1):2183 (2017).
  7. Hung R.J., et al., Nature., 463(7282):823~827 (2010).
  8. Fremont S., et al., Nat Commun., 8:14528 (2017).


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特長

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品名Actin Protein (MICAL-Oxidized): Rabbit Skeletal MusclePyrene Labeled Actin Protein (MICAL-Oxidized): Rabbit Skeletal Muscle
商品コードMXA95MPAX1
(旧商品コード:MXAP95)
動物種ウサギ
由来骨格筋
標識ピレン(Pyrene)
純度>95%
分子量約43 kDa
形状凍結乾燥品
適用沈降(Sedimentation)アッセイ重合(Polymerization)アッセイ
沈降(Sedimentation)アッセイ
活性精製されたMICAL酸化アクチン(未標識およびピレン標識)は、Met47/Gly48でのサブチリシンA切断に対する感受性を90%以上低下させます。
製品概要MICAL(フラビンタンパク質モノオキシゲナーゼ)(#MIC01)により、Met44およびMet47で酵素的に酸化されたウサギ骨格筋由来のアクチンタンパク質。MICAL(フラビンタンパク質モノオキシゲナーゼ)(#MIC01)により、Met44およびMet47で酵素的に酸化されたウサギ骨格筋由来のピレン標識アクチンタンパク質。

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使用例

MICAL酸化アクチンとネイティブアクチンのサブチリシン(Subtilisin)アッセイ

図1. MICAL酸化アクチンとネイティブアクチンのサブチリシン(Subtilisin)アッセイ

アクチン(#AKL99)およびMICAL酸化アクチン(#MXA95)を0.1 mg/ml(2.3μM)に希釈した。次に、未処理またはサブチリシン(1:200 w/w)で15分間処理した試料(各2μg)をSDS-PAGEで分離し、Coomassie染色して可視化した。


MICAL酸化ピレン標識アクチンとネイティブピレン標識アクチンのアクチン重合

図2. MICAL酸化ピレン標識アクチンとネイティブピレン標識アクチンのアクチン重合

ピレン標識アクチン(#AP05)およびMICAL酸化ピレン標識アクチン(#MXAP95(現在の商品コードは#MPAX1))を図に記載された濃度に希釈後、重合バッファーとインキュベートした。アクチンの重合は分光光度計により蛍光を検出した。 A.U.:arbitrary units

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MICAL-Oxidized Actin Protein (>95% pure): Rabbit Skeletal Muscle
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MICAL(フラビンタンパク質モノオキシゲナーゼ)(#MIC01)により,Met44およびMet47で酵素的に酸化されたウサギ骨格筋由来のアクチンタンパク質。
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品名商品コード製品概要
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MsrB2 Protein, 6xHis tagged, Human, RecombinantMB201アクチンのMICAL酸化Met44/Met47アミノ酸の還元に関与する酵素。MICAL酸化アクチンを減らし、限定されたタンパク質分解アッセイにおいてサブチリシンAの切断を90%以上高めることが示されています。

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6xHis MICAL-1 Protein Redox-CH domains
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reagent@funakoshi.co.jp

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