ピロトーシス細胞（カスパーゼ-1活性化細胞）検出キット Pyroptosis/Caspase-1 Assay
掲載日情報：2020/06/11 現在Webページ番号：65906
ピロトーシス（パイロトーシス、Pyroptosis）を起こした細胞を、カスパーゼ１の活性化を指標として蛍光顕微鏡またはフローサイトメーターで検出する試薬です。
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特長
- キットにはカスパーゼ-1活性誘導物質としてニゲリシン（Nigericin）が含まれています。
- キットには細胞透過性FLICA試薬（FAM-YVAD-FMKまたは660-YVAD-FMK）が含まれています。
- FLICA試薬を細胞に添加すると、活性型カスパーゼ-1に不可逆的に結合し、蛍光を発します。
- FLICA試薬添加後、すぐに蛍光を測定できない場合は、Fixative（キットに含まれる）を使用すれば最大16時間保存できます。
- 未固定の細胞はPI（ヨウ化プロピジウム）、7-AAD、またはHoechst 33342（キットに含まれる）で対比染色することもできます。
| Green Assay | Far Red Assay | ||
|---|---|---|---|
| 商品コード | #9145 | #9146 | #9158 |
| 使用回数 | 25～50回分 | 100～200回分 | 25回分 |
| FLICA試薬 | FAM-YVAD-FMK | 660-YVAD-FMK | 測定波長 | 励起492 nm／蛍光520 nm | 励起660 nm／蛍光680～690 nm |
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測定原理
キットに含まれるFLICA試薬（FAM-YVAD-FMK、660-YVAD-FMK）は細胞透過性で、細胞に添加すると、活性型カスパーゼ-1に不可逆的に結合します。
カスパーゼ-1と結合しなかった試薬は細胞外に拡散して洗い流されます。
その後に測定・観察された蛍光シグナルは、試薬の添加時点において細胞内に存在するカスパーゼ-1酵素活性の直接的な尺度といえます。
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使用例
THP-1細胞からマクロファージへの分化誘導の測定
■使用キット：Green Assay（FAM-YVAD-FMK）
■実験条件：THP-1懸濁細胞をPMA（5 ng / ml）で処理し、マクロファージへの分化を誘導した。 48時間後、PMAを除去し、LPS（10 ng / ml）を添加した新しい培地に交換し、カスパーゼ-1の活性化を誘導した。 2時間後、細胞をFAM-YVAD-FMKで1時間染色・洗浄し、蛍光顕微鏡で観察した。
■結果：コントロール細胞（右下図）では活性型カスパーゼ-1を有する細胞がわずかしかないが、一方でカスパーゼ-1を誘導した細胞（左上図）では、多数の緑色蛍光が観察できる。
Nigericinで処理Jurkat細胞中のカスパーゼ-1活性測定
■使用キット：FarRed Assay（660-YVAD-FMK）
■実験条件：
（パネルA〜C）ネガティブコントロール。誘導なし。
（パネルD〜F）Jurkat細胞をNigericin（10μM）で処理。NLRP3インフラマソームおよびカスパーゼ-1の活性化を誘導した。
その後すぐに660-YVAD-FMKを添加し、次いで細胞を37℃で24時間インキュベートし、洗浄した。さらにHoechst 33342で核を対比染色し、Hamamatsu Flash 4.0カメラ装着Nikon Eclipse 90i蛍光顕微鏡で観察した。
■結果：
（パネルA〜C）660-YVAD-FMK標識を示すパネルAでは、活性型カスパーゼ-1を持つ赤色細胞は見られない。
（パネルD〜F）Nigericin処理細胞では、パネルEに青色核を持つ多くの細胞が見られるが、その大部分はパネルDで赤色に標識されており、活性型カスパーゼ-1の存在を示す。
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操作方法概略
- 試料およびコントロールを調製する。
- diH2OでCellular wash bufferを希釈する。
- DMSOをFLICA試薬（Caspase-1 inhibitor）に添加する。
- PBSでFLICA試薬を希釈し、各試料に添加する。
- 約1時間インキュベートする。
- 培地を除去後、Cellular wash bufferを加えて遠心し、細胞を洗浄する。
- 細胞ペレットを Cellular wash bufferに再懸濁する。
- （オプション）必要に応じて標識（Hoechst 33342、PI、7-ADD、抗体など）する。
- （オプション）必要に応じて細胞を固定する。
- 蛍光顕微鏡、蛍光プレートリーダー、またはフローサイトメーターにより分析する。
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キット内容
| Green Assay | Far Red Assay | |||
|---|---|---|---|---|
| 商品コード | #9145 | #9146 | #9158 | |
| 使用回数 | 25～50回分 | 100～200回分 | 25回分 | |
| キット内容 | ・FLICA Caspase-1 inhibitor reagent (FAM-YVAD-FMK) | 1 vial | 4 vial | - |
| ・FLICA 660 Caspase-1 inhibitor reagent（660-YVAD-FMK） | - | - | 1 vial | |
| ・Cellular wash buffer | 15 ml | 60 ml | 15 ml | |
| ・Fixative | 6 ml | 6 ml | 6 ml | |
| ・Hoechst 33342 | 1 ml | 1 ml | 1 ml | |
| ・Nigericin | 1 vial | 1 vial | 1 vial | |
※ 測定にはプレートリーダーまたはフローサイトメーターが必要です。
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価格
Green Assay
[在庫・価格 ：2025年04月25日 17時35分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Green Pryoptosis/Caspase 1 Assay Kit (25-50 tests) |
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Green Pyroptosis/Caspase-1 Assay (100-200 tests) |
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 17時35分現在]
Green Pryoptosis/Caspase 1 Assay Kit (25-50 tests)
文献数： 0
- 商品コード：9145
- メーカー：ITL
- 包装：1kit
- 価格：¥87,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：医薬用外劇物
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | 医薬用外劇物 | ||
| 保存条件 | 4℃,-20℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | パイロトーシスおよびインフラマソーム研究用製品特集 |
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| 関連記事 | |||
Green Pyroptosis/Caspase-1 Assay (100-200 tests)
文献数： 0
- 商品コード：9146
- メーカー：ITL
- 包装：1kit
- 価格：¥167,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：医薬用外劇物
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | 医薬用外劇物 | ||
| 保存条件 | 4℃,-20℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | パイロトーシスおよびインフラマソーム研究用製品特集 |
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Far Red Assay
[在庫・価格 ：2025年04月25日 17時35分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Pyroptosis/Caspase-1 Assay, Far Red (25tests) |
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 17時35分現在]
Pyroptosis/Caspase-1 Assay, Far Red (25tests)
文献数： 0
- 商品コード：9158
- メーカー：ITL
- 包装：1kit
- 価格：¥95,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：医薬用外劇物
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | 医薬用外劇物 | ||
| 保存条件 | 4℃,-20℃,暗所保存 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | パイロトーシスおよびインフラマソーム研究用製品特集 |
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