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細胞、組織から脂肪滴を単離するキット Lipid Droplet Isolation Kit
掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：65656
単純勾配遠心分離法を用いて、細胞や組織から脂肪滴を単離するキットです。
左：グリセリド検量線
右：ニワトリ肝臓から単離した脂肪滴中のトリグリセリド存在試験結果
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脂肪滴とは
脂肪滴（Lipid Droplet）は、脂質が多く含まれる細胞小器官で、脂質に富む中核を有しており、リン脂質の単分子膜と脂肪滴関連タンパク質に囲まれています。脂肪滴は全ての真核生物に見られますが、通常は動物の脂肪組織に存在しています。中性脂質の加水分解、貯蔵の調節、および細胞膜の形成や維持に用いられるコレステロールやアシルグリセロールの貯蔵庫としての役割を果たしています。
脂肪滴は、脂質およびコレステロール貯蔵機能以外に、最近、炎症反応、肥満、アテローム性動脈硬化症およびがんとの関連についても報告されています。非脂肪細胞内では、脂肪滴は脂肪酸を中性トリアシルグリセロールとして貯蔵することで、脂肪毒性からの保護を担っています。また、近年、脂質およびコレステロール貯蔵機能以外に、脂肪滴には炎症反応、肥満、アテローム性動脈硬化症およびがんと関係があることが報告されています。
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特長
- 少量の試料（1.5～3×107 cells）（約50～100 mg）から脂肪滴が得られます。
- 超遠心分離は不要です。
- 適用試料：細胞、組織
- 使用回数：50 preps（約50～100 mgの細胞、組織に用いた場合）
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操作方法概略
- 増殖培地10 mlを15 mlポリプロピレンチューブ中に添加し、それにトリプシン処理した1.5～3×107細胞（約50～100 mg）を加えて再懸濁する。
- 1,000×gで5分間遠心分離し、細胞を沈降させる。
- 培地を吸引除去し、1×PBS 10 mlを加えて細胞を洗浄する。
- 再び1,000×gで5分間遠心分離し、細胞を沈降させる。
- 培地を吸引除去し、1×PBS 1 mlを加える。
- 細胞を十分に再懸濁し、2 mlマイクロ遠心チューブに移す。
- 1,000×gで5分間遠心分離し、細胞を再び沈降させる。
- 1×PBSを吸引除去し、Reagent A 200μlを加えてペレットを十分に再懸濁する。
- 氷上で10分間インキュベートする。
- 1×Reagent B 800μlを添加し、よく混合する。
- 氷上で10分間インキュベートする。
- 3 mlシリンジの先に1インチ長27ゲージ径の注射針を取り付け、それに細胞を5回通すことにより、細胞をホモジナイズする。
- ホモジネートを100×gで5秒間軽く遠心分離する。
- ホモジネートをかき乱さないように注意しながら、1×Reagent B 600μlをホモジネート上に層状に滴下する。
- 2 mlマイクロ遠心チューブを遠心分離機にセットし、18,000～20,000×gで4℃、3時間遠心分離する。
- チューブの上部から270μl（浮遊の脂肪滴を含む）を慎重に取り出し、新しいマイクロ遠心チューブに移す。
- 単離した脂肪滴を－80℃で保存する。
- 組織50～100 mgを秤量し、メスまたはハサミで小片に切る。
- 細かく切った組織をガラスダウンスに移す。
- Reagent A 200μlを加える。
- 氷上で10分間インキュベートする。
- 1×Reagent B 800μlを加える。
- 氷上で10分間インキュベートする。
- 粗めの（A）ペッスルで5回上下ストロークを行った後に、細めの（B）ペッスルで5回の上下ストロークを行い、組織を均質化する。
- ホモジネート1 mlを2 mlのマイクロ遠心チューブに移す。
- ホモジネートをかき乱さないように注意しながら、1×Reagent B 600μlをホモジネート上に層状に滴下する。
- 2 mlマイクロ遠心チューブを遠心分離機にセットし、18,000～20,000×gで4℃、3時間遠心分離する。
- チューブの上部から270μl（浮遊の脂肪滴を含む）を慎重に取り出し、新しいマイクロ遠心チューブに移す。
- 単離した脂肪滴を－80℃で保存する。
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キット内容
- Reagent A/B
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Lipid Droplet Isolation Kitの関連製品
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| 品名 | 商品コード | 測定回数 | 製品概要 |
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価格
[在庫・価格 ：2025年04月25日 20時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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Lipid Droplet Isolation Kit(50 preps) |
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 20時55分現在]
Lipid Droplet Isolation Kit(50 preps)
文献数： 0
- 商品コード：MET-5011
- メーカー：CBO
- 包装：1kit
- 価格：¥103,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：1週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2021年6月1日号 p.18 ニュース2021年5月1日号 p.13
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| 製品記事 | Cell Biolabs（セルバイオラボ）社製品特集 |
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