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天然型ヒト幹細胞成長因子を用いたナイーブ型iPS細胞作製システム AlphaSTEM™ Culture System

掲載日情報：2017/06/29 現在Webページ番号：65618

ミネルバ バイオテクノロジーズ コーポレーション /
Minerva Biotechnologies Corporation
[メーカー略称：MBT]

従来のプライム（Prime）型iPS細胞よりも、より原初の状態にリセットされたナイーブ（Naive）型ヒトiPS細胞を作製および維持するシステムです。ヒトのプライム型iPS細胞または体細胞から、ナイーブ型iPS細胞を作製できます。ナイーブ型iPS細胞から目的細胞へ分化させた細胞はより高い機能を有し、再生医療研究への応用が期待されます。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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特長

  • 作製したナイーブ型iPS細胞には、次の特長があります。
    • プライム型iPS細胞よりも、維持培養時の増殖効率が高い。
    • 核型異常発生が生じないことを最大70代まで確認済み。
    • 自発的な分化を行わないため、スケールアップや自動化に対応可能。
    • 分化誘導時に目的細胞への分化効率が高い。
    • 作製した分化細胞がプライム型iPS細胞由来のものよりも、より高い機能を有する。
    • 分化させる細胞の種類について制限を受けない。
  • フィーダー細胞を用いずに、簡便に培養を行えます。
  • 本法以外にもナイーブ型iPS細胞作製法はいくつか報告されていますが、これらの方法では作製時に阻害物質（化合物）を用いています（Naive-like細胞と呼ばれる）。本法は、ヒト細胞内で発生初期に実際に発現している因子（NME7AB）のみを用いており、より生体内細胞に近いナイーブ型iPS細胞を作製できます。1)

    • ※ ナイーブ型とプライム型ヒトiPS細胞の比較についてはこちらをご覧下さい

    参考文献：

    1) Carter M.G., et al., Stem Cell Journals, 34(4), 847～859(2016).


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    AlphaSTEM™ Culture Systemの原理

    AlphaSTEM Culture Systemの原理
    1. ヒト多能性幹細胞（iPSおよびES細胞）表面では、糖タンパク質MUC1が特別な切断を受けた状態で発現している（この状態をMUC1＊と呼ぶ）。
    2. 抗MUC1＊抗体（製品名：AlphaSTEM™ Culture Substrate（#MC01360）、文献中ではMN-C3と記載）をプレート・ディッシュ表面にコートし、iPS細胞を捕捉する。
    3. AlphaSTEM™ Naive hPSC Medium（#MN01500）中に含まれている ヒト幹細胞成長因子NME7ABが、レセプターのMUC1＊に結合することで、プライム型ヒトiPS細胞からナイーブ型ヒトiPS細胞への変換、および維持が行われる。
    4. iPS細胞を各種細胞へ分化させる場合は、MUC1＊の部分ペプチド（製品名：AlphaSTEM™ Differentiation Inducer（#MB-PSMGFR）、文献中ではMUC1＊ecdと記載）を添加して、競合反応によりNME7ABを除去する（併せて、目的細胞への分化誘導物質を添加する）。

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    ナイーブ型とプライム型ヒトiPS細胞の比較

    iPS細胞の形態の比較

    iPS細胞の形態の比較

    左：FGF-2を含む培地中で、MEF（マウス胎仔線維芽細胞）をフィーダー細胞として培養したプライム型iPS細胞。
    右：AlphaSTEM™ Culture Substrateをコートしたプレート上で、AlphaSTEM™ Naive hPSC Mediumを用いて培養したナイーブ型iPS細胞


    X染色体の不活性化の確認

    X染色体の不活性化の確認

    左：FGF-2で維持したプライム型iPS細胞。Anti-H3K27me3（赤点）の陽性により、X染色体の不活性化（XaXi）を確認した。
    右：本法で作製したナイーブ型iPS細胞。Anti-H3K27me3（赤点）の陰性により、ナイーブ型の特長であるX染色体の活性化（XaXa）を確認した。


    各細胞における遺伝子発現のプロファイリング

    各細胞における遺伝子発現のプロファイリング

    FGF-2で維持したプライム型iPS細胞（左）と本法で作製したナイーブ型iPS細胞（右）で、遺伝子発現パターンが大幅に異なることを確認した。


    iPS細胞から分化させた心筋細胞のサルコメア（筋節）構造の比較

    筋節構造の比較

    プライム型iPS細胞由来心筋細胞（左）とナイーブ型iPS細胞由来心筋細胞（右）におけるサルコメア構造*を抗α-Actinin抗体を用いて比較した。
    左：プライム型iPS細胞由来心筋細胞に見られる非構造的サルコメアでは、不規則な収縮を生じる。
    右：ナイーブ型iPS細胞由来心筋細胞では組織化されたサルコメア構造を構成しており、規則的な収縮が行われる。

    * サルコメア：ミオシンとアクチンが付着し、心筋細胞の収縮を行う筋肉の基本単位


    iPS細胞から分化させた心筋細胞の拍動の比較


    プライム型iPS細胞由来心筋細胞と（左）AlphaSTEM™由来心筋細胞（右）の拍動の比較
    （画像をクリックするとビデオがご覧いただけます。）
    左：プライム型iPS細胞由来心筋細胞では、拍動が同期されず収縮も弱いことがわかる。
    右：AlphaSTEM™由来心筋細胞では、拍動が同期されており、強い収縮を示す。


    各種iPS細胞の比較

    　 Naive Naive-like Primed
    成長因子 NME7AB LIF bFGF/TGF-b
    ナイーブ型変換時の
    小分子阻害物質の添加    		 不要 要 不要
    細胞塊の形態 均一な単層 ドーム状コロニー 平坦なコロニー
    X染色体の活性化 あり 場合によりあり なし
    自発的な分化 なし なし あり
    クローニング効率 高 場合により高 低
    核型の安定性 高（70継代まで確認済み） 低 高


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    作製したナイーブ型ヒトiPS細胞から各種細胞への分化誘導例

    iPS細胞から各種細胞への分化誘導例

    胚様体の形成

    本法で作製したナイーブ型iPS細胞からの3種類の胚葉それぞれに由来する胚様体形成の確認



    奇形腫の形成

    本法で作製したナイーブ型iPS細胞からの3種類の生殖系列すべてのテラトーマ形成の確認


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    AlphaSTEM™ Culture Systemおよび必要な試薬類について

    ※ 本システムは、Naive hPSC Medium、Culture Substrate、Differentiation Inducerの3製品それぞれを別個にご購入いただく必要があります。

    ※ 体細胞からナイーブ型iPS細胞を作製する場合、本システムに加えて、別途プライム型へのリプログラミング用製品が必要です。

    ※ 本システムの各製品の他に、以下の試薬類が必要です。詳細は製品プロトコルをご確認下さい。

    • Rho kinase Ⅰ inhibitor Y-27632
    • DPBS, w/o calcium, magnesium
    • MEM
    • 2-Mercaptoethanol
    • TrypLE express enzyme
    • Cell culture plate（Nunc Nunclon VitaまたはFalcon TC-Treated）

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    価格

    ※ 本システムの各製品および作製済みナイーブ型ヒトiPS細胞をご注文の際は、専用のライセンス確認書に必要事項をご記入の上、販売店担当者にお渡し下さい。

    AlphaSTEM™ Culture System

    [在庫・価格 ：2026年05月26日 13時15分現在]

    ※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
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    AlphaSTEM Naive hPSC Medium
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    説明文
    ※購入時に専用の「ライセンス確認書」が必要です。※別途輸送費を￥120,000 いただく製品です。 ナイーブ型ヒトiPS細胞の作製，維持に用いる培地。キット内容：Basal Medium（500ml），Supplement 1,2
    法規制等 医薬用外劇物
    保存条件 4℃,-80℃,暗所保存 法規備考
    掲載カタログ ニュース2023年3月1日号 p.21
    ニュース2024年3月1日号 p.5
    細胞培養・再生医療研究カタログ2021-2022 p.40

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    ※購入時に専用の「ライセンス確認書」が必要です。※別途輸送費を￥120,000 いただく製品です。 ナイーブ型ヒトiPS細胞の作製，維持時に，プレートやディッシュにコートする試薬。
    法規制等
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    掲載カタログ 細胞培養・再生医療研究カタログ2021-2022 p.40
    ニュース2024年3月1日号 p.5
    ニュース2023年3月1日号 p.21

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    ※購入時に専用の「ライセンス確認書」が必要です。※別途輸送費を￥120,000 いただく製品です。 ナイーブ型ヒトiPS細胞から目的細胞に分化させる際に，培地に添加する試薬。
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    [在庫・価格 ：2026年05月26日 13時15分現在]

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    AlphaSTEM Naive hPSC Medium

    文献数： 0

    説明文 ※購入時に専用の「ライセンス確認書」が必要です。※別途輸送費を￥120,000 いただく製品です。 ナイーブ型ヒトiPS細胞の作製，維持に用いる培地。キット内容：Basal Medium（500ml），Supplement 1,2
    法規制等 医薬用外劇物
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    掲載カタログ ニュース2023年3月1日号 p.21
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    AlphaSTEM Culture Substrate

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    掲載カタログ 細胞培養・再生医療研究カタログ2021-2022 p.40
    ニュース2024年3月1日号 p.5
    ニュース2023年3月1日号 p.21

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    AlphaSTEM Differentiation Inducer

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    作製済みナイーブ型ヒトiPS細胞

    作製済みナイーブ型ヒトiPS細胞です。維持培養には、上記のAlphaSTEM™ Culture Systemが必要です

    ※ 本製品は、HIV1/2、HAV、HBV、HCV、マイコプラズマ、バクテリア、真菌が陰性であることを確認していますが取り扱いには十分にご注意下さい。

    • プライム型へのリプログラミングにセンダイウイルスベクターを用いていますが、ナイーブ型作製後、10継代後にリアルタイムPCRを行い、センダイウイルス由来のリプログラミング因子の転写物が残存しないことを確認しています。
    • 各由来細胞に関しては、提供者からのインフォームドコンセントを取得済みです。

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    AlphaSTEM Naive iPSC Line, Female
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    法規制等 カルタヘナ該当品
    保存条件 液体窒素中での保存 法規備考
    掲載カタログ ニュース2024年3月1日号 p.5
    ニュース2019年2月15日号 p.5
    ニュース2020年10月15日号 p.13

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    AlphaSTEM Naive iPSC Line, Male
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    掲載カタログ ニュース2024年3月1日号 p.5
    ニュース2019年2月15日号 p.5
    細胞培養・再生医療研究カタログ2021-2022 p.40

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    [在庫・価格 ：2026年05月26日 13時15分現在]

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    AlphaSTEM Naive iPSC Line, Female

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    法規制等 カルタヘナ該当品
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    ニュース2019年2月15日号 p.5
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    AlphaSTEM Naive iPSC Line, Male

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    メーカーインタビュー： ナイーブ型iPS細胞作製システム


    Minerva Biotechnologies
    既存の手法で作製した多能性幹細胞（iPS / ES 細胞）は、異常な核型を有し真にナイーブ型ではない可能性がありました。Minerva Biotechnologies 社は、天然型のヒト幹細胞成長因子NME7AB を用いて、世界で初めてナイーブ型iPS 細胞を作製しました。今回は、同社CEO のDr. Cynthia Bamdad にナイーブ型iPS 細胞作製システムについてお話を伺いました。   Dr. Cynthia Bamdad
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    お問い合わせ先

    （テクニカルサポート 試薬担当）

    reagent@funakoshi.co.jp

    製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
    表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

    細胞培養一般試薬